巖藻糖基轉移酶2基因多態性與新疆地區哈薩克族、漢族胃腺癌發病的關系

阿依努爾·阿合曼，高峰

(新疆維吾爾自治區人民醫院，烏魯木齊830001)

巖藻糖基轉移酶2基因多態性與新疆地區哈薩克族、漢族胃腺癌發病的關系

阿依努爾·阿合曼，高峰

(新疆維吾爾自治區人民醫院，烏魯木齊830001)

目的 探討巖藻糖基轉移酶2(FUT2)基因多態性與新疆地區哈薩克族、漢族胃腺癌發病的關系。方法 選取胃腺癌患者299例(病例組)、體檢健康者333例(對照組)，病例組中漢族167例、哈薩克族132例，對照組中漢族182例、哈薩克族151例。取清晨全血，采用PCR和DNA測序相結合的方法檢測PUT2基因G739A、A385T、C375T位點的單核苷酸多態性。收集患者臨床資料，采用多因素Logistic回歸分析各因素與胃腺癌的關系。結果 病例組和對照組漢族人群G739A位點AA基因分別為57、27例(P<0.01)，哈薩克族人群G739A位點AA基因型分別為32、18例(P<0.01)，攜帶G739A位點A等位基因的漢族、哈薩克族個體分別是相對應民族非攜帶者患胃腺癌風險的1.655倍(95%CI為1.227～2.233，P=0.001)和1.430倍(95%CI為1.026～1.992，P=0.035)；A385T位點TT基因型在漢族及哈薩克族分別為7、12例，顯著高于相同民族對照組的1、3例(P均<0.05)；C357T位點T等位基因在漢族及哈薩克族病例組和對照組中的差異均無統計學意義(P均>0.05)。病例組中漢族和哈薩克族A385T位點T等位基因分別為39、45例(P<0.01)，對照組中兩民族G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。多因素回歸分析顯示，攜帶G739A位點A等位基因且現在還在吸煙或飲酒者或幽門螺桿菌(Hp)陽性者，患胃腺癌風險增加2.035、2.360、3.815倍。結論 新疆地區漢族、哈薩克族胃腺癌的發生與FUT2基因G739A、A385T位點多態性有關，且胃腺癌患者中哈薩克族A385T位點突變頻率高于漢族，同時吸煙、飲酒、Hp感染亦可增加攜帶G739A位點A等位基因者胃腺癌的患病風險。

胃腺癌；巖藻糖基轉移酶2；單核苷酸多態性；哈薩克族；漢族；新疆

胃癌是消化系統常見腫瘤，以腺癌最為常見。國際癌癥研究機構(IARC)已將幽門螺桿菌(Hp)列為胃癌發病的Ⅰ類致病原[1]，而國外研究發現巖藻糖基轉移酶2(FUT2)基因遺傳的多樣性與Hp感染有關[2,3]。國內研究[4]也已發現，新疆哈薩克族健康人群FUT2基因G739A、A385T、C357T位點存在突變。最新的研究顯示，G739A、A385T位點突變可引起氨基酸序列的改變，C375T突變也與多種消化道疾病的發生有關[5,6]。因此，本研究旨在探討FUT2基因3個位點的單核苷酸多態性與新疆地區漢族、哈薩克族胃腺癌發生的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取新疆維吾爾自治區醫院2013年6月～2015年8月胃腸外科就診的胃腺癌患者299例(病例組)，男191例、女108例，年齡(62.9±11.0)歲，漢族167例、哈薩克族132例；術后均經病理組織檢查確診，采血前未接受放化療治療。現吸煙142例、曾吸煙37例、未吸煙120例，飲酒106例、不飲酒193例，血清Hp抗體陽性186例、陰性113例。漢族患者中，賁門腺癌(GCA)49例，非賁門腺癌(NGCA)118例；TNM分期(ACS，第7版)[7]Ⅰ、Ⅱ期65例，Ⅲ、Ⅳ期102例；病理組織低分化112例，中度分化40例，高分化15例；分化型腺癌55例，低分化型腺癌97例，印戒細胞癌15例。哈薩克族患者中，GCA 27例，NGCA 105例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期92例；病理組織低分化101例，中度分化20例，高分化11例；分化型腺癌49例，低分化型腺癌72例，印戒細胞癌11例。兩民族間胃腺癌生物學行為比較，P均﹥0.05。對照組為來我院體檢健康者333例，男252例、女81例，年齡(63.3±10.7歲)歲，漢族182例、哈薩克族151例，現吸煙126例、曾吸煙55例、未吸煙152例，飲酒82例、不飲酒251例，血清Hp抗體陽性123例、陰性210例。兩組性別、年齡無統計學差異，病例組現吸煙、飲酒、血清Hp抗體陽性患者比例高于對照組(P均﹤0.05)。本研究經醫院倫理委員會認可，所有受試者簽署知情同意書。

1.2 PUT2基因G739A、A385T、C375T位點單核苷酸多態性檢測方法

1.2.1 DNA提取及PCR擴增 取清晨全血2 mL，采用非離心柱型DNA提取試劑盒(上海天根生物有限公司)按照說明書步驟提取外周靜脈血白細胞DNA。引物由上海生物工程公司合成，FUT2基因位點G739A(rs602662)上游引物5′-TTGTAGGGGTCCATGTTCGC-3′，下游引物5′-GAGGGAGGCAGAGAAGGAGA-3′；A385T(rs1047781)上游引物5′-CCTCCATCTCCCAGCTAA-CG-3′，下游引物5′-CGGTGAAGCGGACGTACT-3′；C375T(rs281377)上游引物5′-AAGCCATGTGGGAGTTACCG-3′，下游引物5′-TGGTAGAAGGTCCAGGAGCA-3′。DNA擴增PCR總體積為20 μL：100 ng/μL上下游引物各0.5 μL，2×Power Taqmanmaster Mix 10 μL(北京百泰克生物技術有限公司)，50 ng/μL DNA 2.0 μL，ddH2O 7.0 μL。PCR擴增條件：95 ℃預變性5 min，94 ℃變性30 s，G739A、A385T、C375T位點分別以55.6、57.9、60.5 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，循環35次，最后72 ℃延伸10 min。3個位點PCR擴增片段大小分別為494、491、409 bp。

1.2.2 DNA直接測序 所有的樣品PCR產物采用直接測序方法檢測FUT2基因G739A、A385T、C357T位點多態性，該步驟由上海生物工程有限公司完成。G739A位點GG、AA型和A385T位點AA、TT型及C357T位點CC型均為單峰，G739A位點AG型和A385T位點AT型及C357T位點CT型均為雙峰。

1.3 統計學方法 各組基因型的Hardy-Weinberg平衡檢驗，采用在線分析平臺SHEsis(http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)分析。采用SPSS19.0軟件。各組基因型、等位基因分別比較行χ2檢驗；將胃腺癌作為因變量，性別、民族、吸煙、飲酒、Hp抗體、G739A、A385T、C357T作為自變量，行多因素非條件Logistic回歸分析。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗結果 FUT2基因G739A、A385T、C375T位點基因型分布在病例組的χ2分別為0.49、0.40、1.35(P=0.48、0.53、0.25)，符合Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性。

2.2 兩組FUT2基因G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因分布情況比較 FUT2基因G739A位點在兩組中均發現GG、AG、AA三種基因型，其中病例組AA基因型89例，明顯高于對照組45例(P<0.01)，攜帶A等位基因者患胃腺癌的風險是非攜帶者的1.551倍(95%CI為1.242～1.937，P<0.01)；A385T位點在兩組中也發現AA、AT、TT三種基因型，病例組TT基因型19例，明顯高于對照組的4例(P<0.01)；C357T位點在兩組中均發現CC、CT、TT三種基因型，各基因型及等位基因比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 兩組FUT2基因G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因分布情況比較(例)

注：與對照組比較，*P<0.01。

2.3 兩組同民族FUT2基因G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因分布情況比較 病例組和對照組漢族人群G739A位點AA基因型分別為57、27例(P<0.01)，攜帶G739A位點A等位基因的個體是非攜帶者患胃腺癌風險的1.655倍(95%CI為1.227～2.233，P<0.01)；病例組漢族人群A385T位點TT基因型7例，顯著高于對照組漢族的1例(P<0.01)；C357T位點基因型和等位基因在病例組和對照組漢族中差異均無統計學意義(P均>0.05)。病例組和對照組哈薩克族人群G739A位點AA基因型分別為32、18例(P<0.01)，攜帶G739A位點A等位基因的哈薩克族人群是非攜帶者患胃腺癌風險的1.403倍(95%CI為1.026～1.992，P<0.01)；病例組和對照組哈薩克族人群A385T位點TT基因型分別為12、3例(P<0.01)，攜帶A385T位點T等位基因的個體是非攜帶者患胃腺癌風險的1.608倍(95%CI為1.046～2.473，P<0.01)；C357T位點基因型和等位基因在族病例組和對照組哈薩克中差異均無統計學意義(P均>0.05)，病例組中，漢族和哈薩克族A385T位點T等位基因分別為39、45例，差異具有統計學意義(P<0.01)；而兩民族G739A、C357T位點基因型及等位基因分布差異均無統計學意義(P均>0.05)。對照組中兩民族G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 FUT2基因G739A、A385T、C357T位點基因型及等位基因在漢族、哈薩克族人群的分布(例)

注：與對照組同民族比較，*P<0.01；與同組哈薩克族比較，#P<0.01。

2.4 FUT2基因多態性與胃腺癌發病的關系 由表3可見，胃腺癌發病的危險因素有吸煙、飲酒、Hp抗體、G739A；其中FUT2基因G739A位點為A等位基因且吸煙或飲酒或Hp抗體陽性者，患胃腺癌風險分別增加2.035、2.360、3.815倍(P均<0.01)。

表3 胃腺癌發病的多因素非條件Logistic回歸分析結果

3 討論

近年研究表明，我國惡性腫瘤病死率居全國死亡原因的第2位，其中農村胃癌病死率居腫瘤的第1位[8]。國內外學者對胃癌的病因進行了廣泛而深入的研究，已有研究發現胃癌與遺傳、飲食習慣、Hp感染等密切相關[9,10]。本研究顯示，病例組中現吸煙患者比例高于對照組。國外研究報道，吸煙與胃腺癌有較強聯系，其相對危險度在1.3～2.5[11]。原因可能與煙草及煙草煙霧中含有多種致癌物質和促癌物質，如苯并芘、二甲基亞硝胺、酚類化合物、尼古丁、煙焦油等，可破壞遺傳基因、損傷細胞膜和降低免疫力促使組織癌變；這些物質可溶解于唾液中隨吞咽進入胃內，并因吸煙量及吸煙時間延長的長期作用而致癌[12]。

飲酒與胃癌的聯系程度不盡相同，Jayalekshmi等[13]研究發現,無論曾經或當前正在飲酒均與印度人群胃癌發生無明顯關聯，而韓國多中心腫瘤隊列研究證實,嚴重飲酒是增加胃癌發生率的重要危險因素[14]，徐曉琴等[15]研究同樣表明飲酒是山西地區胃癌發生的危險因素之一。本研究也顯示，病例組有飲酒史者的比例高于對照組，提示飲酒是新疆地區胃腺癌的風險因素。既往研究已經證實，乙醇可在賁門胃底部未經胃中食物及水等稀釋，濃度較高可能導致胃黏膜脫水而致黏膜損傷，從而導致胃黏膜上皮易受致癌物質侵犯或和直接影響上皮的惡性變，同時乙醇可顯著提高二亞硝基化合物等的致癌性，這些都有可能增加胃癌發生的危險性[16]。

國際癌癥研究機構已于1994年將Hp列為胃癌發病的Ⅰ類致病原[1]，我國學者也就Hp可增加胃腺癌的發生達成共識[17]。本研究病例組Hp感染率顯著高于對照組，與國內外學者們基本一致。相關的機制研究顯示，Hp感染后可誘導胃黏膜的炎癥增殖活性，而這些炎癥細胞(多形核白細胞、巨噬細胞或單核細胞等)產生氧自由基可引起相鄰細胞的DNA損害，繼而導致基因修飾、突變甚至腫瘤的發生[18]。

流行病學調查顯示，胃癌患者具有家族聚集現象以及單卵雙生子胃癌同患率高于雙卵雙生子的同患率，提示遺傳易感性可能是胃癌的一個重要發病因素[19]。FUT2基因位于人類染色體19q13，編碼332個氨基酸殘基多肽組成的α(1，2)-FUT。有研究表明，其功能異常能夠增強多種腫瘤細胞的致瘤性，導致腫瘤細胞抵制凋亡的能力增強[20]。在白種人中，該基因座位上的G739A、A385T突變可引起氨基酸編碼的改變，進而無法編譯出有活性的FUT。新疆為多民族聚集地區，各少數民族均有其不同的遺傳特點。在少數民族中哈薩克族占較大比例，而且具有獨特的遺傳背景，故本課題組對新疆地區漢族及哈薩克族患者進行了胃癌發生與FUT2基因遺傳易感性的研究。結果顯示，漢漢族和哈薩克族人群攜帶G739A位點A等位基因的個體分別為非攜帶者患胃腺癌風險的1.655倍、1.608倍。A385T位點在漢族和哈薩克族的兩組中均發現純合TT基因型，漢族和哈薩克族人群病例組A385T基因TT突變率分別為4.2%和9.1%，明顯高于相同民族對照組的0.5%和2.0%。其原因可能為FUT2基因G739A、A385T位點的突變引起編碼氨基酸序列的改變，由于氨基酸脫水縮合形成多肽鏈組成蛋白質的一級結構，氨基酸序列的改變可導致蛋白質空間結構的改變，而蛋白質特殊的空間結構與其特殊的功能相適應；所以，兩位點的突變導致氨基酸翻譯過程的終止或改變，進而無法編譯出有活性的α(1，2)-FUT，FUT2基因由分泌狀態改變為非分泌狀態，導致G739A和A385T位點的突變者患胃腺癌的風險顯著增加[21]。漢族病例組和對照組比較以及哈薩克族病例組和對照組比較中，C357T位點基因型和等位基因差異均無統計學意義。其原因可能與G739A位點突變型引起該基因第258位甘氨酸被絲氨酸取代，A385T位點第140位異亮氨酸被苯丙氨酸取代有關，而C357T位點雖然存在堿基的突變，但其同義突變仍然編碼第130位天冬酰胺，未導致氨基酸改變[5,6]。

本研究結果還提示，G739A位點A等位基因是胃腺癌的風險因素，進一步證實了Serpa等[22]的研究。因此，本課題組進一步將上述多個危險因素進行關聯分析，發現G739A位點含A等位基因且現在還在吸煙、飲酒或Hp感染者，患胃腺癌風險顯著均增加。但是，有關于合并吸煙、飲酒、Hp感染、G739A增加胃腺癌易患性的信號通路仍然不十分清楚，有待進一步進行相關的分子生物學研究。

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Correlation between FUT2 gene polymorphism and risk of gastric adenocarcinoma in Kazak and Han people of Xinjiang area

Ayinuer·Aheman,GAOFeng

(ThePeople′sHospitalofXinjiangUyghurAutonomousRegion,Urumqi830001,China)

Objective To discuss the correlation between fucosyltransferase 2 (FUT2) gene polymorphism and the risk of gastric adenocarcinoma in Kazak and Han people of Xinjiang area.Methods A total of 299 cases of gastric cancer patients (case group, including 167 cases in Han and 132 cases in Kazak) and 333 healthy subjects (control group, including 182 cases in Han and 151 cases in Kazak) were included in this study. The single nucleotide polymorphisms (SNPs) of the PUT2 gene G739A, A385T and C375T loci were analyzed by PCR and DNA sequencing. We collected the clinical data, and used Multiple factors logistic regression to analyzed the relationship between the various factors and the gastric adenocarcinoma. Results In the case group and control group, there were 57 and 27 cases in Han population with AA gene at G739A locus, which were separately 32 and 18 cases in Kazak population (allP<0.01). The risk of gastric adenocarcinoma in Han and Kazak individuals with G739A locus A allele was 1.655 times and 1.430 times higher than that of the corresponding non-carriers (95%CI=1.227-2.233,P=0.001; 95%CI=1.026-1.992,P=0.035). A385T locus TT genotype in Han and Kazak population were found in 7 and 12 cases, which were significantly higher than those of the same ethnic group (allP<0.05). There was no significant difference between the Han and Kazak population of the case and control group in the T allele of C357T (allP>0.05). A385T locus T allele in Han and Kazak population of the case group were found in 39 and 45 cases (P<0.01). There was no significant difference in genotypes and allele of G739A, A385T and C357T between Kazak and Han population in the control group (allP>0.05).Multiple regression analysis showed that the risk of gastric cancer was 2.035, 2.360 and 3.815 times greater in patients with A allele at G739A locus and smoking, drinking or Hp positive. Conclusions The occurrence of gastric cancer is associated with PUT2 gene G739A, A385T polymorphism in Han and Kazak population of Xinjiang area. In patients with gastric cancer, the frequency of A385T mutation in Han is higher than that in Kazak. At the same time, smoking, drinking and Hp infection may increase the risk of gastric cancer.

gastric adenocarcinoma; fucosyltransferase 2; single nucleotide polymorphism; Kazak nationality; Han nationality; Xinjiang

新疆維吾爾自治區自然科學基金資助項目(2014211A053)。

阿依努爾·阿合曼(1972-)，女，主任醫師，主要研究方向為消化道腫瘤的發病機制。E-mail: ayinuer1215@163.com

高峰(1964-)，男，主任醫師，主要研究方向為炎癥性腸病的發病機制。E-mail: xjgf@sina.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.005

R735.2

A

1002-266X(2017)10-0015-05

2016-08-05)