潰瘍性結腸炎患者血清IL-23、IL-17水平變化與脾虛濕熱證的相關性分析

楊 芳 葛桂萍 曹紅艷 喻海中

(南京中醫藥大學附屬南通市中醫院,南通,226000)

潰瘍性結腸炎患者血清IL-23、IL-17水平變化與脾虛濕熱證的相關性分析

楊 芳 葛桂萍 曹紅艷 喻海中

(南京中醫藥大學附屬南通市中醫院,南通,226000)

目的:觀察細胞因子IL-23/IL-17在脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者中的表達,探討其與脾虛濕熱型潰瘍性結腸炎的關系。方法:選取2014年7月至2016年3月南通市中醫院收治的潰瘍性結腸炎患者60例,用ELLSA法檢測30例脾熱濕熱型、30例非脾虛濕熱型患者、20例健康人IL-23及IL-17水平,對所有受試對象進行脾虛濕熱證型評分,分析IL-23及IL-17與脾虛濕熱證的相關性。結果:脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型潰瘍性結腸炎組血清IL-23、IL-17水平明顯升高,與健康者比較差異有統計學意義(P<0.05),脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型之間比較,差異無統計學意(P>0.05);輕、中、重度潰瘍性結腸炎患者血清IL-17、1L-23組間水平較差異有統計學意義(P<0.05)。結論:IL-23、IL-17與潰瘍性結腸炎患者脾虛濕熱證程度呈正相關。

潰瘍性結腸炎;脾虛濕熱;IL-23;IL-17

潰瘍性結腸炎(Ulcerative Colitis,UC),是一種臨床上非常常見的慢性非特異性腸道炎性反應,在我國的發病率呈逐年上升趨勢。目前其發病機制仍不明確;近年來,隨著IL-23/IL-17通路的闡明,潰瘍性結腸炎的發病機制有了深入研究。目前研究已證明,IL-23/IL-17通路可能是潰瘍性結腸炎發病的重要免疫應答通路,它在慢性腸道炎性反應中可能處于重要地位[1]。我們通過長期的臨床觀察發現,脾虛濕熱證在臨床中較其他證型更多見,本課題旨在通過觀察UC臨床常見的脾虛濕熱證患者血清IL-17、IL-23水平的測定,為活動期UC的診斷及脾虛濕熱UC患者的辯、病情評估及未來中醫藥治療提供可靠的客觀理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年7月至2016年3月南通市中醫院收治的住院患者中診斷為活動期UC患者60例,其中30例脾虛濕熱證UC患者(脾虛濕熱組),30例非脾虛濕熱證UC患者(非脾虛濕熱組),脾虛濕熱組患者中男17例,女13例,年齡18～65歲,平均年齡(45.52±14.36)歲;病程0.5～30年,平均病程(8.17±9.36)年;30例非脾虛濕熱組患者中,男15例,女15例;年齡18～64歲,平均年齡(43.56±14.89)歲;病程0.5～30年,平均病程(5.65±6.85)年。此外,選擇本院健康體檢者20例為正常對照組(健康組),其中男10例,女10例;年齡18～65歲,平均年齡(44.25±15.31)歲。經統計學分析,脾虛濕熱組、非脾虛濕熱組、健康組在年齡、性別等方面比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 診斷標準 西醫診斷標準采用《中國炎性反應性腸病診斷治療規范的共識意見》(2007年山東濟南會議),確定潰瘍性結腸炎的診斷標準[2]。中醫診斷標準參照國家標準《中醫病證治法術語》制定,大瘕瀉之脾虛濕熱證:腹痛、腹脹、便中夾膿血,肛門灼熱或有墜脹感,里急后重、身熱、納呆、神疲、乏力、面色少華,舌質紅胖,舌苔黃滑、脈儒數,其中主癥:大便夾有膿血伴腹痛腹脹,納呆,神疲乏力、舌質紅胖舌苔黃滑,次證:肛門灼熱或墜脹感,里急后重、面色少華,脈儒數。潰瘍性結腸炎疾病分度:輕度:患者每日腹瀉4次以下,便血輕或無,無發熱、脈搏加快或貧血,紅細胞沉降率正常;中度:介于輕度和重度之間;重度:腹瀉6次/d以上,伴明顯黏液血便,體溫>37.5 ℃,脈搏>90次/min,血紅蛋白(Hb)<100 g/L,紅細胞沉降率>30 mm/h。

1.3 納入標準 半年之內做過腸鏡,腸鏡、病理及中醫證型符合上述中西醫診斷標準。

1.4 排除標準 病情程度為緩解期患者;細菌性痢疾、阿米巴痢疾、偽膜性腸炎、腸結核等感染性結腸炎;克羅恩病患者;缺血性腸炎、放射性腸炎患者;合并嚴重其他系統疾病患者。

1.5 剔除標準 不愿意配合此項臨床研究的患者。

1.6 觀察指標 脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者血清IL-17、1L-23水平;潰瘍性結腸炎患者疾病分級與血清IL-17、IL-23的關系;脾虛濕熱證評分方法每個主癥記2分,每個次癥記1分。最高分12分,最低分4分。其余組最高分4分,最低分0分。所有潰瘍性結腸炎患者在入院第2天抽取清晨空腹肘靜脈血3 mL,對照組(體檢健康者)在體檢時抽取空腹肘靜脈血3 mL,由南通市中醫院化驗室進行4 000 r/min離心,分離血清后于統一于-80 ℃冰箱貯存并統一檢測。采用雙抗體夾心(ELISA)法,檢測程序按照試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 血清IL-17,IL-23比較 脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者血清IL-17、1L-23水平較健康組明顯升高(P<0.05),脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型之間比較,差異無統計學意(P>0.05)。

表1 不同證型患者血清IL-17、1L-23水平

注:與健康人比較*P<0.05,**P<0.05。

2.2 潰瘍性結腸炎患者疾病分級與血清IL-17、IL-23的關系 輕、中、重度潰瘍性結腸炎患者血清IL-17、1L-23組間水平較差異有統計學意義(P<0.05)。

表2 輕、中、重度患者血清IL-17、IL-23水平

注:與輕度患者比較,*P<0.05,**P<0.05。

2.3 IL-17、IL-23與脾虛濕熱證評分值的相關性 脾虛濕熱型評分與IL-17、IL-23均呈正相關。見表3。

表3 IL-17、IL-23與脾虛濕熱證評分值的相關性

3 討論

中醫理論根據潰瘍性結腸炎的臨床表現,可歸于“泄瀉、下利、痢疾、腸癖”等范疇。《黃帝內經》稱為“濡泄”“洞泄”“注下”“后泄”“鶩溏”“飧泄”等,《諸病源侯論·痢病諸侯》中有赤白痢、血痢、膿血痢、熱痢等名稱;《備急千金藥方·熱痢》指出“大凡痢有四種,謂冷、熱、疳、蠱:冷則白,熱則赤,疳則赤白相雜……,蠱則純痢瘀血”,并舉有治赤白滯下方;《外臺秘要·水谷痢》對痢之分型更多,列有治痢方劑170余首,其中重下方6首。該病的病因病機主要為飲食不節或者外感濕熱之邪損傷脾胃,脾虛則運化失司,水濕內停,日久化熱,濕熱下注腸道,致腸道傳導失司,脂絡受傷,氣滯血瘀,而致血敗肉腐成膿而發生此病,可見脾虛是發病的根本,濕熱是標,正如張景岳所云“凡痢疾,病在廣腸最下端,而其病變不在廣腸而在脾也,揭示了UC脾虛濕熱證的本質。

目前研究發現潰瘍性結腸炎的發病與遺傳、腸黏膜屏障功能異常、腸黏膜免疫失調、腸道細菌紊亂等等多種機制有關,雖然致病的始動因素尚未確定,但持續存在的腸黏膜免疫失調仍然是潰瘍性結腸炎發病的關鍵。隨著對潰瘍性結腸炎發病機制的不斷深入,各種炎性反應細胞因子在UC的發病過程中起著重要作用,已有研究表明[3-4]認為IL-23/IL-17炎性反應軸IL-23/IL-17軸在腸道炎性反應中發揮重要。IL-23主要是由IL-12p40和IL-23p19,2個亞單位組成,其主要是由被激活的單核-巨噬細胞和樹突狀細胞所分泌。IL-23通過結合細胞膜表面分泌的IL-23受體復合物,從而刺激細胞內的信號傳導系統,進而誘導細胞激活。IL-23在CD4+T等免疫細胞應答中起關鍵作用,其能刺激炎性反應細胞向病變部位聚集,從而誘導炎性反應肉芽腫形成。因此,近年來研究發現,IL-23在UC的發病中扮演了重要角色,在UC的發病中有著積極的免疫調節作用,這種作用是通過促進IL-17的分泌發揮的,IL-23是一種強烈的細胞免疫調節因子和刺激因子,它可以誘導記憶型的Th17細胞分泌大量IL-17。現階段有研究證實,潰瘍性結腸炎患者腸黏膜中IL-23含量較正常組對比,其含量明顯升高[5-6]。隨著潰瘍性結腸炎疾病的進展,IL-23/IL-17免疫通路逐漸失調,自身組織和抗原的免疫耐受逐漸破壞,最終誘發了自身免疫性疾病的發生。

IL-17主要是由Th17細胞誘導、基質細胞產生的一種可溶性炎性反應細胞因子,能刺激內皮細胞、上皮細胞產生粒細胞集落刺激因子、IL-8、IL-6和PGE2等,并能促進血液中中性粒細胞發育成熟。有研究發現,潰瘍性結腸炎患者血清IL-17的濃度水平與其病情呈現正相關,重度患者IL-17含量高于中度患者,中度患者IL-17含量又高于輕度患者,說明IL-17的表達水平與潰瘍性結腸炎的炎性反應程度及疾病進展密切相關。潰瘍性結腸炎患者結腸組織中IL-17表達明顯增高,說明局部IL-17聚集,從而誘發了潰瘍性結腸炎的發生[7-10],由此推斷,阻斷IL-17分泌可能成為治療UC的一個新手段。其致病機制可能為IL-17通過刺激上皮細胞盒抗原遞呈細胞產生TNF、IL-6、IL-8、IL-1等炎性反應因子,進而募集并激活大量中性粒細胞,大量的炎性反應因子遷移到結腸炎性反應部位而致潰瘍性結腸炎的發生。

本次試驗研究表明,UC組和健康對照組間比較差異有統計學意義(P<0.05);UC輕、中、重度患者血清IL-23、IL-17表達水平組兼比較差異有統計學意義,在脾虛濕熱型與非脾虛濕熱型UC組間,差異無統計學意義(P>0.05),這與南方醫科大學中醫藥學院所研究的濕熱型型和非濕熱型潰瘍性結腸炎組血清IL-17水平明顯升高,與對照組比由統計學意義研究結果不一致。我們分析,第一,可能與潰瘍性結腸炎患者脾虛濕熱證及非脾虛濕熱證患者的樣本量過少有關,第二,潰瘍性結腸炎患者本身疾病錯綜復雜,統一時期本身存在脾虛濕熱,同時也存在瘀血阻絡的證型,單一證型難以概括,同一患者不同時期表現的中醫證型不同,早期可能為濕熱下注,中期可能為脾虛濕熱,后期發展成為脾腎陽虛,而且早、中、晚3期界限難以確定,單一的一個證型難以概括。但是Spesrman檢驗說明了IL-23/IL-17與脾虛濕熱證呈現正相關,說明IL-23/IL-17與UC的疾病進程密切相關,與潰瘍性結腸炎嚴重程度相關,且可能在UC的發病機制中發揮主要的作用。

綜上所述,潰瘍性結腸炎是一種由多種復雜因素介入的一種免疫性疾病,IL-23/IL-17的高表達參與了潰瘍性結腸炎疾病進程中慢性炎性反應的形成,且兩者的血清含量與脾虛濕熱證有密切的相關性,為臨床上我們運用健脾清熱利濕劑治療潰瘍性結腸炎可提供理論依據,并可以作為評價藥物療效的指標參考。

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(2016-12-13收稿 責任編輯：王明)

Correlation Analysis Between Serum IL-23, IL-17 and Syndrome of Dampness-heat Due to Spleen Deficiency in Patients with Ulcerative Colitis

Yang Fang, Ge Guiping, Cao Hongyan, Yu Haizhong

(1NantongHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoNanjingUniversityofChineseMedicine,Nantong226000,China)

Objective:To observe the expression of cytokine IL-23/IL-17 in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and explore the relationship between patients with ulcerative colitis (UC) and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency. Methods:In total, 60 cases of UC patients admitted in Nantong Hospital of Traditional Chinese Medicine from July 2014 to March 2016 were selected as the research subjects. ELLSA method was used to test the IL-23 and IL-17 levels of 30 patients with syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, 30 patients without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and 20 healthy people. The syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency of all research subjects was graded, and the correlation between IL-23 and IL-17 levels and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency was analyzed. Results:The IL 23/IL-17 levels in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency increased significantly, and there was significant difference when compared with healthy subjects (P<0.05). There was no significant difference between patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency (P>0.05). There were statistically significant differences in the serum IL-17/1L-23 levels among patients with mild, moderate and severe UC patients (P<0.05). Conclusion:There was positive correlation between IL-23 /IL17 and the severity of syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency.

Ulcerative colitis; Syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency; IL-23; IL-17

南通市青年基金項目(編號:WQ2014056)

楊芳(1984.08—)女,碩士研究生,主治醫師,研究方向:中醫藥治療脾胃疾病,E-mail:348296489@qq.om

R256.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.03.030