少數民族地區RhD（-）血液冰凍保存洗滌復蘇技術及臨床應用

張新龍，劉海英

（阿克蘇地區中心血站，新疆 阿克蘇 843000）

少數民族地區RhD（-）血液冰凍保存洗滌復蘇技術及臨床應用

張新龍，劉海英

（阿克蘇地區中心血站，新疆 阿克蘇 843000）

目的 探討少數民族地區RhD（-）血液冰凍解凍紅細胞的制備方法，并對臨床輸注效果進行分析。方法 使用美國血液技術公司提供的ACP215全自動細胞洗滌儀和全密閉式成套耗材，先甘油化紅細胞懸液，后置-65℃以下深低溫保存，需要時去甘油復蘇，采用9%NaCl和0.9%NaCl滲透壓梯度遞減方法洗滌，制備成冰凍解凍紅細胞，按照國家衛生部規定的檢測方法對該制品進行質量檢測，并對臨床上RhD（-）患者的輸注效果進行跟蹤調查。結果 應用該方法冰凍解凍RhD（-）血紅細胞，其質量符合國家規定的相關標準，經臨床輸注后效果良好。結論 使用ACP215制備冰凍紅細胞，低溫保存后洗滌去甘油，操作安全快捷，回收率高，產品質量可靠，將為少數民族地區稀有血型血液的長期保存、及時有效供給以及自身儲血、突發公共事件緊急大量用血創造有力條件。

RhD（-）血液；冰凍紅細胞；冰凍解凍紅細胞；洗滌；臨床應用

新疆阿克蘇地區是一個以維吾爾族為主體的多民族聚居的地區，RhD（-）在維吾爾族等少數民族的分布為5%，漢族僅占0.3%，屬稀有血型。解決RhD（-）血型患者臨床用血救治以及應對地方突發事件稀有血型血源儲備是我們急需解決的問題。目前國內很多血站采用手工法制備RhD（-）冰凍解凍去甘油紅細胞延長紅細胞的有效期，我站引進ACP215全自動血細胞洗滌儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞技術，減少了人為因素影響，產品質量穩定可靠。現對制備方法和臨床效果評價，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇來自2015年1月開始阿克蘇地區街頭自愿無償獻血者，經街頭初篩為RhD（-）后，本站檢驗科進一步確認為RhD（-），血液復檢合格后，在2～6℃冰箱保存6天以內的全血或去白細胞紅細胞懸液，采用ACP215全自動血細胞洗滌儀制備成冰凍紅細胞，臨床需要時再解凍洗滌制備成去甘油紅細胞懸液，隨機跟蹤40U該制品臨床應用效果并予以評價。

1.2 耗材

235型去甘油耗材（美國血液技術公司），57%甘油耗材、三珠袋（北京博德桑特公司），9%NaCl（山東威高公司），0.9%NaCl、PVC血液轉移袋（四川南格爾公司），一次性輸血器（內蒙古赤峰公司）

1.3 儀器與設備

ACP215全自動血細胞洗滌儀（美國血液技術公司），Cryofuge-600i低溫離心機（德國賀立氏公司），CompoDcK無菌接管機（德國費森尤斯公司），DW-86L386超低溫冰箱（青島海爾公司），CT-D4干式融化箱（美國克瑞特），振蕩儀（蘇州市醫用儀器廠），BC-5800血細胞計數儀（深圳邁瑞公司），BD-9050全自動細菌培養系統（美國BD公司）。

1.4 方法

1.4.1 紅細胞甘油化

將全血或去白懸浮紅細胞4℃下離心（3500r/min×8min），目檢合格分出上層血漿/添加劑和白膜層后，轉移至三珠袋制備成壓積紅細胞，連接輸血器和復方甘油溶液，把血袋固定在振蕩儀上搖振（振幅60次/分），每U壓積紅細胞（200 ml全血制備） 血袋中由慢到快手工加入57%復方甘油溶液1袋160 ml（2U壓積紅細胞中加入2袋320 ml），時間控制在10-15 min內完成，放置室溫平衡30分鐘后，放入-65℃以下超低溫冰箱快速冰凍保存，即制成冰凍紅細胞。

1.4.2 解凍與洗滌去甘油

將冰凍紅細胞從-65℃以下超低溫冰箱中取出后，先在室溫中平衡10分鐘后再放置于37℃干式融化箱中，設定時間30min自動搖動并充分融化至解凍紅細胞，將解凍紅細胞轉移至1000mlPVC空袋中，與235型去甘油耗材、無菌接管機連接，打開ACP215儀器，按照固定管路安裝連接高滲、等滲鹽水作為洗滌劑，檢查無誤后，選擇去甘油程序，按開始鍵，機器按程序設定自動依次加入9% NaCl高滲溶液和0.9% NaCl低滲溶液，以梯度遞減洗滌的方法逐漸去除紅細胞內外的甘油，，最后再每U加0.9%NaCl溶液120ml重新懸浮洗滌紅細胞，確保紅細胞內外的滲透壓平衡，制備成解凍紅細胞[1]。

2 結 果

2.1 冰凍解凍去甘油紅細胞質量抽檢

按《血站技術操作規程》（2012版）和《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）中的檢測方法和檢測項目，抽取40U（20袋×2U）的冰凍解凍紅細胞解凍后留樣檢測，均符合《全血成分血質量要求》[2]。見表1

表1 40 U冰凍解凍去甘油紅細胞質量檢測結果一覽表

2.2 臨床應用情況

將以上使用ACP215全自動紅細胞處理機制備的40U（20袋*2U）冰凍解凍去甘油紅細胞，用于臨床輸注，輸注主要用于產科手術、外傷、血液病等13例患者，每位患者用量為2-8U不等，血液平均保存期為105天，查看《臨床輸血效果評價記錄表》，描述輸血過程順利，輸血中及輸血后無不適反應，其中11例患者輸注后血紅蛋白有所上升，貧血狀態得到改善，2例患者輸注后血紅蛋白上升不明顯，其中1例活動性出血現象出現，1例為自身溶血性貧血患者。

3 討 論

1）全血或去白懸浮紅細胞在2-6℃儲血冰箱可保存35天，隨著保存時間的延長，紅細胞內2，3-二磷酸甘油酸及ATP逐漸下降，從而影響了氧的釋放能力和紅細胞的活性，紅細胞的變形能力和滲透脆性增加，紅細胞的溶血程度也隨著增加，故要選擇保存6d以內（相對新鮮）的血液進行冰凍保存；2）選擇甘油作為紅細胞保護劑，是因為甘油無毒、中性、相對分子質量小，能滲透入細胞，與水結合力強，對細胞膜有良好的保存作用。將采集6天以內的全血或去白懸浮紅細胞中的紅細胞甘油化后置-65℃以下保存，紅細胞耗能較少，紅細胞的代謝活動降低或完全停止，避免了代謝毒性產物的積累，達到延長紅細胞保存期的目的，最長保存期為十年；3）臨床需要RhD（-）血時，將甘油化冰凍紅細胞去甘油復蘇，采用滲透壓梯度遞減（9%NaCl→0.9%NaCl）的方法，使用全自動ACP215血細胞洗滌儀，去除了細胞代謝產物及抗凝劑，全密閉管路，此方法約需1.5 h，產品人為因素影響較小，時間短，操作快捷安全；4）經質量抽檢，洗滌后的紅細胞生理形態及生化特性與液體保存的紅細胞相似，產品質量可靠、較穩定；5）跟蹤輸血患者，經評價基本達到輸血目的。冰凍紅細胞保存期長，可大量儲存，在少數民族地區稀有血型血源匱乏的情況下，對調節血液供需平衡，保障突發公共事件緊急大量用血[3]，維護社會穩定有著重要的戰略意義。

[1] 中華人民共和國衛生和計劃生育委員會.《血站技術操作規程》2012版[Z].北京:衛醫政發[2012]1號附件,2012.

[2] 中國人民共和國衛生部,中國國家標準化管理委員會.GB18469-2012全血成分血質量要求[S].北京:中國標準出版社,2012

[3] 夏愛軍,張獻清,穆士杰,等.手術患者輸注冰凍紅細胞的安全性探討[J],現代檢驗醫學雜志,2007,22(2):26.

本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-8242.2017.05.803.02