豬繁殖與呼吸綜合征綜述及RT—PCR檢測

[摘 要] 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱藍(lán)耳病，以母豬的繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)疾病為主要癥狀，由PRRS病毒引起。該傳染病主要引起的癥狀是發(fā)熱、厭食，母豬懷孕后期導(dǎo)致流產(chǎn)，木乃伊胎、死胎、弱仔等；對幼齡仔豬損害比較大，會引起呼吸系統(tǒng)疾病，死亡率很高。

[關(guān)鍵詞] 豬繁殖與呼吸綜合征 RT-PCR

[中圖分類號] S831 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2016）12-0274-01

引言

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱藍(lán)耳病，以母豬的繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)疾病為主要癥狀，由PRRS病毒引起。該傳染病主要引起的癥狀是發(fā)熱、厭食，母豬懷孕后期導(dǎo)致流產(chǎn)，木乃伊胎、死胎、弱仔等；對幼齡仔豬損害比較大，引起呼吸系統(tǒng)疾病，死亡率很高。導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制進(jìn)而繼發(fā)多種其他疾病而造成死亡。由PRRSV變異株引起的“高熱綜合征”呈現(xiàn)高發(fā)病率和高死亡率的特點(diǎn)，我國將這種傳染病稱為“高致病性豬藍(lán)耳病”，并且列為國家一類動物疫病。

1 病原學(xué)

PRRSV具有兩個基因型；1型是歐洲型，代表毒株為Lelystad病毒；2型是美洲型，代表毒株是VR2332病毒，歐洲型與美洲型核苷酸序列相似度為60%。同一種基因型的PRRSV毒株之間有著較為廣泛的變異，有基因突變、缺失和插入以及毒株間的基因重組現(xiàn)象，基因組中易變區(qū)域包括NSP2、ORF5和ORF3.不同毒株的GP5蛋白差異較大，1型與2型的同源性僅52%～55 %，相當(dāng)于PRRSV與LDV的同源性。歐洲型和美洲型病毒均具有典型的免疫抑制性。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

PRRS唯一易感染并且出現(xiàn)臨床癥狀的自然宿主。病豬和帶毒豬是傳染源與傳播源。處于感染豬可以通過唾液、鼻腔分泌物、公豬精液、糞便和尿液排出病毒，懷孕母豬后期以乳汁形式排毒，對本病耐過的豬也可長期帶毒并且不斷向體外排出病毒。

2.2 易感動物

自然條件下懷孕母豬及其仔豬最易感染，但其他年齡和品種的豬也可感染。

2.3 傳播途徑

該病的具體傳播方式主要有以下幾種類型：

2.3.1直接、間接接觸傳播。

2.3.2空氣傳播。

2.3.3垂直傳播。

2.4 流行特點(diǎn)

目前大部分豬場執(zhí)行免疫藍(lán)耳疫苗或感染過藍(lán)耳野毒，藍(lán)耳陽性場幾乎遍布全國。臨床特征不明顯，表現(xiàn)為種豬流產(chǎn)、死胎，出現(xiàn)母豬并發(fā)感染細(xì)菌、治療不當(dāng)致死，產(chǎn)房腹瀉、仔豬關(guān)節(jié)腫及保育豬鏈球菌、呼吸道疾病增多，整體豬群抗病力低，肉豬難養(yǎng)。個別豬群中大豬發(fā)生較典型藍(lán)耳病。

3 PRRSV 的致病機(jī)理

該病毒進(jìn)入動物機(jī)體后， 侵入巨噬細(xì)胞。各種組織的巨噬細(xì)胞對該病毒均易感。肺泡巨噬細(xì)胞是病毒的靶細(xì)胞， 造成嚴(yán)重的間質(zhì)性肺炎， 入侵的第二天即可對肺造成損害， 7天后損傷整個肺尖葉， 使巨噬細(xì)胞破裂，溶解崩潰造成巨噬細(xì)胞數(shù)量減少， 肺泡壁增厚， 淋巴組織呈衰竭狀態(tài)， 同時降低了肺泡巨噬細(xì)胞對其他細(xì)菌和病毒免疫力， 同時因?yàn)槎局甑淖儺悓?dǎo)致免疫細(xì)胞識別能力降低， 而逃避抗體的中和和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺傷作用。

4 病理變化

該病的主要病理變化為彌漫性間質(zhì)性肺炎，并且伴有細(xì)胞浸潤和卡他性肺炎。在感染病毒后48、60、72小時剖檢豬，可見腹膜、腎周圍脂肪、腸系膜淋巴結(jié)、皮下脂肪和肌肉等多部位發(fā)生水腫以及肺水腫。組織學(xué)變化，鼻粘膜上皮細(xì)胞變形，纖毛上皮消失。支氣管上皮細(xì)胞變性；肺泡壁增厚，膈有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤。母豬可見腦內(nèi)灶性血管炎，腦髓質(zhì)可見單核淋巴細(xì)胞性血管套。動脈周圍淋巴鞘的淋巴細(xì)胞減少，細(xì)胞核破裂和空泡化。接種病毒后60小時可見單個肝細(xì)胞變性和壞死。流產(chǎn)胎兒出現(xiàn)動脈炎、心肌炎和腦炎。

5 診斷

目前常用的檢測PRRS的方法有病毒分離鑒定，分子生物學(xué)有：血清中和試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）；血清學(xué)方法有：核酸雜交、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等診斷方法等。

5.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測抗體

該實(shí)驗(yàn)是血清學(xué)檢查PRRS常用的方法之一，主要考慮這個方法不但省時、省錢，還可以自動操作來進(jìn)行批量檢測，敏感性強(qiáng)于微量血清中和實(shí)驗(yàn)（SN），但特異性不如微量血清中和實(shí)驗(yàn)（SN）。

5.2 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈鎖反應(yīng)（RT-PCR）

很多國家和地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)具備通過多種擴(kuò)增該病毒基因的反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈鎖反應(yīng)方法。這種方法可很容易地對歐洲型毒株和美洲型毒株進(jìn)行區(qū)分。

5.2.1 RT-PCR診斷的原理

試劑盒利用吸附柱提取病毒RNA作為反轉(zhuǎn)錄的模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以引物為起點(diǎn)合成與RNA模板互補(bǔ)的cDNA鏈；之后在DNA聚合酶的作用下，經(jīng)過高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán)，使特異的目標(biāo)DNA片段的復(fù)制數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增萬倍的DNA片段進(jìn)行電泳、染色后，在凝膠成像儀的紫外燈下，可發(fā)現(xiàn)肉眼可見DNA片段的擴(kuò)增帶，以達(dá)到檢測的目的。

6 免疫接種

對豬進(jìn)行接種免疫是當(dāng)前進(jìn)行預(yù)防該病最好的方法。特別是今天比較流行的情況下。堅(jiān)持嚴(yán)格進(jìn)行疫苗免疫接種，實(shí)施合理的豬群免疫接種密度。根據(jù)高致病性PRRS免疫技術(shù)規(guī)范（試行）要求，商品仔豬斷奶后需要首次進(jìn)行免疫，劑量為1頭份，可以根據(jù)需要在首次免疫后30天再進(jìn)行二次免疫。

7 環(huán)境消毒與滅源

養(yǎng)殖場應(yīng)建立嚴(yán)格的消毒管理措施與制度，定期進(jìn)行消毒，對于場區(qū)的過往車輛和工作人員的服裝進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，明令禁止非生產(chǎn)人員進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。在疫病高發(fā)季節(jié)，應(yīng)增強(qiáng)對養(yǎng)殖場、圈舍及其周邊環(huán)境和運(yùn)載車輛的消毒次數(shù)，定時清理圈舍內(nèi)的糞便和各種動物排泄物，對待病死豬、糞便、污水和各種污染的物品進(jìn)行無害化處理，徹底消滅病原體。PRRSV在外界環(huán)境中存活的能力較差，一般的消毒措施即可殺滅病毒。該病經(jīng)常使用的消毒劑有醛類、含氯消毒劑、酚類堿類、氧化劑等。

8 疫病監(jiān)測

場區(qū)內(nèi)應(yīng)定期對疫苗免疫效果和生豬健康水平進(jìn)行監(jiān)測，根據(jù)監(jiān)測的情況進(jìn)行疫苗的更換或調(diào)整防疫計(jì)劃。

作者簡介：牛憲翔（1981-），男，獸醫(yī)師，河南省滑縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所副所長。