飼料中鹽酸克倫特羅的測定

宋紅霞

[摘 要] 目的：建立飼料中鹽酸克倫特羅的檢測方法。本文對農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《飼料中鹽酸克倫特羅的測定-高效液相色譜法》中色譜條件和對照品處理進行改進，然后按標準方法進行樣品處理。結果證明，該法無論是峰形、信號、還是分離效果均達到滿意程度。

[關鍵詞] 高效液相色譜法 鹽酸克倫特羅 飼料

[中圖分類號] S816 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2016）12-0087-01

鹽酸克倫特羅是腎上腺類神經(jīng)興奮劑，被添加到動物飼料中用于增加動物的瘦肉率，故又稱瘦肉精。人類長期食用含有鹽酸克倫特羅的肉類會出現(xiàn)中毒，危害極其嚴重。因此，國家為從源頭上扼制，便于2002年9月10日起出臺了相關的法律法規(guī)，禁止在飼料和飲用水中使用鹽酸克倫特羅，并在相關標準中規(guī)定為不得檢出成分。嚴格控制飼料中鹽酸克倫特羅的含量，直接關系到人們的生命健康安全。但是，目前的一些檢測方法鹽酸克倫特羅主成分峰信號小，甚至檢測不到，并且峰形差，采取本文改進的方法測定，信號大，峰形尖銳，測定效果好。

1 材料

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀：UltiMate 3000；紫外檢測器。電子天平：型號FA2004B，d=0.1mg。超聲波清洗器：HS3120型。高速離心機：TG16-WS型。電熱恒溫水浴鍋：DZKW-3-4型。其它：實驗室常用儀器設備。樣品：市售配合飼料

1.2 試劑

鹽酸克倫對照品：由國家標準物質中心提供。編號：BW8001 CWI020；純度：99.0%±0.8%；規(guī)格：0.1g；批號：T150026，有效期至2018年11月。

甲醇、乙腈均為色譜純，其它試劑均為分析純。

所用水為符合GB/T6682的一級水。

1.3 固相萃取小柱（SPE）

規(guī)格為3mL的Supelclean LC-WCX SPE固相萃取小柱

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Acclaim C18 柱，粒度 5um ，規(guī)格 4.6×150mm。

流動相：甲醇：乙腈：水（含1+1磷酸溶液0.5mL，PH值在3～4之間）=100：50：350，出峰時間在5分鐘左右；檢測波長：243nm；進樣量20uL；溫度：30℃；流速：1.00mL/min。

2.2 鹽酸克倫特羅標準溶液的配制

2.2.1鹽酸克倫特羅標準儲備液200ug/mL：稱取在P205干燥器中干燥53小時的鹽酸克倫特羅對照品0.0100g，置50mL量瓶中，加0.02mol/L的鹽酸溶液至刻度，搖勻。

2.2.2鹽酸克倫特羅標準工作液2.00ug/mL：吸取1.00mL標準儲備液至100mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。

2.3 樣品溶液的制備：稱取已磨細的試樣5.0000g置150mL的三角瓶中，加入0.5%的偏磷酸溶液50.00mL并搖勻，超聲提取15min，搖勻，靜置，取上層液離心10min，轉速4000r/min。吸取上清液10.00mL，置150mL分液漏斗中，用2mol/L氫氧化鈉溶液調PH值至11～12，放置5分鐘，檢查PH值，如降低，需再加堿調節(jié)。溶液分別用30mL和25mL乙醚萃取兩次，令萃取液通過裝有無水硫酸鈉的定量濾紙，過濾至50mL量瓶中，用少許乙醚淋洗分液漏斗和無水硫酸鈉，并用乙醚定容至刻度。吸取25.00mL于50mL燒杯中，置通風櫥內、低于70℃水浴上蒸干，殘渣溶于2.00mL鹽酸溶液（0.02mol/L），取1.00mL置于預先已分別用1mL甲醇和1mL去離子處理過的SPE小柱上，用注射器稍稍加壓，使其過柱速度不超過1mL/min，再先后分別用1mLSPE淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和淋洗液-2（含2%氨水的30%甲醇水溶液）淋洗，最后用甲醇洗脫，洗脫液置（70±5）℃加熱塊或沙浴上，用氮氣吹干。于凈化、吹干的樣品殘渣中加入1.00mL鹽酸溶液（0.02mol/L），充分振搖超聲，使殘渣溶解，過0.45um濾膜，上機測定。

3 結論

3.1 流動相比例的選擇：當以甲醇+水=45+55為流動相（一）時，鹽酸克倫特羅主色譜峰峰形不好，且信號差，易與雜峰相混甚至被掩蓋；當以乙腈+甲醇+水=120+60+320為流動相（二）時，出峰時間在3分鐘左右，峰形、信號、分離度雖好，但在做樣品時，樣品峰與雜峰呈未分離或分離差的狀態(tài)，故選擇乙腈+甲醇+水=100：50：350（三）的比例，出峰時間在5分鐘左右，能獲得較好的峰形、信號及分離度。

3.2 精密度的測定：

取標準工作液以20uL自動重復進樣5次，峰面積分別為：1.2948、1.2941、1.2921、1.2917、1.2914，計算RSD為0.16%，說明該方法重現(xiàn)性好。

3.3 線性關系的考察：精密移取標準工作液1.25、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0mL，以流動相稀釋至100mL，得到濃度為0.025、0.05、0.100、0.200、0.500、1.00ug/mL的標準系列溶液，并作空白。 以20uL分別自動進樣2次，以峰面積Y為縱座標，濃度X為橫座標，得到曲線方程：Y=0.6464X，r2=1.0000，證明該方法在此范圍內有良好的線性關系。

3.4 回收率的測定：稱取已知含量為0.3157ug/mL、0.3180ug/mL、0.3166 ug/mL的試樣4.7491g、4.7497g、4.7493g共3份，分別按50%、100%、150%加入標準工作液1.5mL、3.0 mL、4.5 mL，測得回收率分別為93.59%、94.07%、94.15%，平均回收率為93.94%，RSD值為 0.33%。

3.5 對照品處理上，分別采用以甲醇和0.02mol/L的鹽酸溶液為溶劑作儲備液，再以流動相（一）、（二）、（三）為溶劑制得六種標準工作液，在三種流動相中進行檢測并對比，結果顯示以0.02mol/L的鹽酸溶液為溶劑的儲備液，用乙腈+甲醇+水=100+50+350作稀釋溶劑及流動相，峰形尖銳，信號強，效果最好。

與其他方法相比，本方法的建立，能夠滿足質量控制的要求，可用于飼料中鹽酸克倫特羅的檢測。

參考文獻

[1]化驗員讀本. 下冊：儀器分析/劉珍主編 ；黃沛成，于世林，周心如編著.-4版.北京：化學工業(yè)出版社，2003.12

[2]中國衛(wèi)生檢驗雜志2005年8月第15卷第8期，畜肉中克倫特羅殘留的HPLC法測定，作者仲娜，盧京光，王小如