一種改進的蛋白質測定方法

張玉良

摘 要：文章提出了一種改進的蛋白質測定方法，包括以下步驟：（1）稱取一定量的樣品，加入到凱氏定氮專用消化管中，加入一定量的濃硫酸，待樣品浸泡0.5小時后，再加入硫酸鉀和硫酸銅，作為催化劑；（2）將裝有樣品的消化管放入消化爐中，逐漸升溫到450℃；（3）待消化液變成綠色澄清后，關閉消化爐；（4）待反應液冷卻至室溫，在凱氏定氮儀上進行蒸餾和滴定。文章改進了濃硫酸、硫酸銅和硫酸鉀以及40%氫氧化鈉的用量，提高了反應速度，減少了反應時間，提高大批量生產的經濟效益。

關鍵詞：蛋白質；凱氏定氮；硫酸鉀和硫酸銅

1 技術背景

蛋白質是人體所必需攝入的營養成分，人體必需攝入足夠量的蛋白質才能保證正常運行。準確了解各種食物中蛋白質含量意義重大。因此，檢測蛋白質的含量是需求量較大的檢測業務，在大批量檢測中，減少檢測時間是當務之急。而傳統的檢測方法和儀器一次只能檢測少量的樣品，且操作起來步驟繁多，需要技術人員時刻關注。易造成結果偏差。本文對傳統方法和儀器方法進行了結合，通過適當的改進和調整，將催化劑硫酸鉀和硫酸銅和濃硫酸加入量改進，縮短了檢測時間，減少了試劑用量，適用于大批量生產。

2 試劑

（1）濃硫酸；（2）硫酸銅；（3）硫酸鉀；（4）30%過氧化氫；（5）硼酸；（6）氫氧化鈉；（7）溴甲酚綠指示劑（1g/L溴甲酚綠乙醇溶液）；（8）甲基紅指示劑（1g/L甲基紅乙醇溶液）；（9）混合指示劑：1份甲基紅和5份溴甲酚綠溶液臨用混合；（10）鹽酸標準溶液：濃度為0.1mol/L。

3 儀器設備

（1）凱氏定氮儀；（2）消化爐；（3）酸堿滴定管。

4 檢測步驟

（1）稱取0.5-1克樣品于消化管中，加入5克硫酸鉀，0.5克硫酸銅，輕搖消化管至樣品和藥品分布均勻，再量取10ml濃硫酸，觀察反應是否劇烈。

（2）待初反應不劇烈后，將消化管放入消化爐中，從100℃開始逐漸升溫至450℃。

（3）觀察反應液變成綠色澄清后停止加熱，關閉消化爐。待溫度降至室溫時，向反應液中加入2ml過氧化氫溶液，繼續加熱反應。反應結束后，冷卻。

蒸餾瓶中加入20%硼酸溶液20ml，3滴混合指示液，調整凱氏定氮儀冷凝管的高度，使冷凝管的下端插入吸收液面以下。提前配備好40%氫氧化鈉溶液，將堿管插入氫氧化鈉溶液中。取下消化管，放在凱氏定氮儀架上，開啟凱氏定氮儀開關，直至消化液變成黑色，液面離開冷凝管下端，再蒸餾1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部，停止蒸餾。

（4）取下吸收瓶，將吸收液轉入150ml容量瓶中，定容。準確吸取25ml吸收液，用鹽酸標準溶液滴定，直至顏色由酒紅色變成綠色，pH 5.1。同時作試劑空白。

（5）計算結果

式中：X-蛋白質含量，g/100g；

V1-滴定時消耗鹽酸標準溶液的體積，mL；

V2-空白消耗鹽酸標準溶液的體積，mL；

C-鹽酸標準溶液濃度，mol/L；

f-吸收液稀釋倍數；

m-試樣的質量，g；

0.014-標準滴定液相當于氮的質量，kg/mol；

F-氮換算為蛋白質的系數，一般食物為6.25；純乳與純乳制品為6.38；面粉為5.70；玉米、高粱為6.24；花生為5.46；大米為5.95；大豆及其粗加工制品為5.71；大豆蛋白制品為6.25；肉與肉制品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵為5.30；復合配方食品為6.25。

本論文所用試劑的量與傳統國標法試劑用量如表1。

從表1 可見，本論文可以節省大量檢測試劑，從而可以節約成本，符合企業經濟效益。

本論文得到的測定結果與傳統國標法得到的測定結果比較如表2。

從表2可見，改進后的方法和傳統方法的結果誤差在1%之內，結果準確度高且穩定。

5 結束語

本文對傳統方法和儀器方法進行了結合，通過適當地改進和調整，將催化劑硫酸鉀和硫酸銅和濃硫酸加入量改進，縮短了檢測時間，減少了試劑用量，適用于大批量生產。改進后的測定結果的準確性和穩定性比較高。在大批量生產中，本文所述方法在節省試劑，減少檢測時間，增加準確度上有較大的優勢，可以作為企業檢測蛋白質的可選方案。

參考文獻

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