穩定期慢性阻塞性肺疾病患者呼吸道潛在致病微生物特點及對氣道炎癥的影響

趙江瑞 譚冠文 方明月 李 越

(信陽職業技術學院護理學院，河南 信陽 464000)

穩定期慢性阻塞性肺疾病患者呼吸道潛在致病微生物特點及對氣道炎癥的影響

趙江瑞 譚冠文 方明月 李 越1

(信陽職業技術學院護理學院，河南 信陽 464000)

目的 探討穩定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者呼吸道潛在致病微生物(PPMs)的特點及其與氣道炎癥、COPD急性加重的關系。方法 穩定期COPD患者185例，采用自行咳痰或痰誘導方法留取合格痰液，進行痰白細胞計數和細菌培養。隨后進行隨訪，隨訪間歇3個月，共隨訪3次，每次隨訪均取痰液行痰白細胞計數和細菌培養。記錄隨訪期間COPD急性加重次數。結果 總PPMs陽性率為37.3%，其中最常檢測到的PPMs為流感嗜血桿菌(HI)。與PPMs陰性組相比，PPMs陽性組的第1秒用力呼氣容積(FEV1)、FEV1/預計值、FEV1/用力肺活量(FVC)較低，而外周血中性粒細胞和百分比、痰白細胞、中性粒細胞和百分比較高(P<0.05)。4個時點均完成痰液檢測的患者共有163例，PPMs陰性率、1次、2次、多次(3次或4次)PPMs陽性率分別為45.4%、23.3%、18.4%、12.9%，其中19例持續存在HI。與HI陰性組相比，HI陽性組痰白細胞、中性粒細胞和百分比均較高(P<0.05)。結論 穩定期COPD患者呼吸道有較高的PPMs陽性率，尤其是流感嗜血桿菌持續存在于呼吸道中，并且與COPD氣道炎癥關系密切。

慢性阻塞性肺疾病；氣道炎癥；潛在致病微生物；流感嗜血桿菌

慢性阻塞性肺疾病(COPD)與炎癥關系密切〔1〕。患者自身口咽和胃腸道存在潛在致病微生物(PPMs)，以革蘭陰性需氧菌、葡萄球菌、酵母菌多見，可移行導致感染〔2〕。PPMs常在穩定期COPD患者的氣管肺泡灌洗液和痰液中發現，最常見的菌株為流感嗜血桿菌(HI)和卡他莫拉菌〔3〕。此外，應用抗生素治療痰液細菌負荷較高的穩定期COPD患者可降低痰中性粒細胞數量〔4〕。目前關于穩定期COPD患者PPMs的研究極少，本研究擬探討穩定期COPD患者PPMs的特點及其與氣道炎癥、COPD急性加重的關系。

1 資料與方法

1.1 對象 2014年1月1日至12月31日在信陽職業技術學院醫院門診復查的COPD患者185例，男126例，女59例，年齡42～86歲，平均(65.8±12.5)歲。納入標準：(1)復合COPD的診斷標準，并處于穩定期：既往6 w內無急性加重癥狀，且至少6 w未再口服或靜脈應用糖皮質激素〔5〕；(2)必要時愿意配合進行誘導痰細菌學檢查。排除標準：(1)合并支氣管哮喘、矽肺、支氣管擴張等嚴重肺疾病、腫瘤、具有免疫缺陷如糖尿病等患者；(2)預防性應用抗生素患者。研究經院倫理委員會通過，研究對象均知情同意。

1.2 基線檢測 納入研究后進行第一次痰標本監測，其中98例痰標本來自于自行咳痰，87例因痰量少而采取誘導痰檢測技術。誘導痰的操作采用中山大學附屬第一醫院曾勉等〔6〕制定的操作流程。痰液質控標準：多核白細胞>25個/低倍視野，鱗狀上皮細胞<10個/低倍視野，或鱗狀上皮細胞∶白細胞<1∶2.5為合格痰液〔5〕，否則重新留取痰液。標本在咳痰后2 h內處理：首先在顯微鏡下觀察白細胞情況，計數中性粒細胞數目和百分比；然后將痰標本按標準流程〔7〕預處理后，分別在血平板、中國藍和巧克力平板中接種，在5%CO2、37℃箱體內孵化18 h后行菌落計數和分離鑒定。出現優勢菌，菌落計數>106CFU/ml為培養陽性。另外，所有患者納入研究后均常規行肺功能檢查。抽空腹靜脈血化驗血常規和C反應蛋白。

1.3 隨訪 每隔3個月隨訪1次，共3次，每次隨訪均如前所述取痰標本進行細菌學檢查和白細胞觀察。與研究對象的聯系方式包括電話、短信、郵箱、QQ和微信等，輔以門診隨訪和住院隨訪。如果隨訪時患者近期有急性發作，則適當延遲取痰標本的時間(距急性發作>6 w)。隨訪期間主要觀察指標為痰細菌學和痰白細胞情況，次要觀察指標為COPD急性加重次數。

1.4 統計學分析 采用SPSS16.0軟件行t檢驗、χ2檢驗、秩和檢驗。

2 結 果

2.1 基線痰液檢測結果 185例參與者中，最常檢測到的PPMs為HI，陽性率為17.8%(33/185)，其他依次為卡他莫拉菌7.6%(14/185)、肺炎鏈球菌6.5%(12/185)、金黃色葡萄球菌3.8%(7/185)、銅綠假單胞菌1.6%(3/185)，總陽性率為37.3%(69/185)。與PPMs培養陰性者(PPMs陰性組)相比，PPMs培養陽性者(PPMs陽性組)的第1秒用力呼氣容積(FEV1)、FEV1/預計值、FEV1/用力肺活量(FVC)較低(P<0.05)，而外周血中性粒細胞和百分比、痰白細胞、中性粒細胞和百分比較高(P<0.05)，見表1。

2.2 隨訪期間痰液PPMs培養情況 第1、2、3次隨訪分別有9例、13例、15例患者未完成痰液檢測，每個時點(共4個)均完成痰液檢測的患者共有163例。HI病原體持續性較強，見表2。

2.3 HI持續陰性和持續陽性患者的痰液和臨床結局比較 在4次痰細菌學檢測中，80例HI培養始終陰性(HI陰性組)，21例陽性次數≥3(HI陽性組)。與HI陰性組相比，HI陽性組的痰白細胞、中性粒細胞和百分比均較高(P<0.05)，而兩組急性加重次數未見明顯差異(P>0.05)，見表3。

組別n男性〔n(%)〕年齡(歲)吸煙狀態〔n(%)〕吸煙戒煙從未FEV1(L)FEV1/預計值(%)FEV1/FVC比值(%)PPMs陰性組11678(67.2)64.9±11.942(36.2)36(31.0)38(32.8)1.32±0.4452±864±12PPMs陽性組6948(69.6)67.3±12.823(33.3)16(23.2)30(43.5)1.24±0.3346±956±11t或χ2值0.1080.6682.4022.0892.2152.284P值0.7430.5040.3010.0440.0350.031組別n外周血白細胞(×109/L)外周血中性粒細胞(×109/L)外周血中性粒細胞百分比(%)C反應蛋白(mg/L)痰白細胞(×106/g)痰中性粒細胞(×106/g)痰中性粒細胞百分比(%)PPMs陰性組1167.9±2.24.9±0.362.0±11.64.8±3.02.5±0.51.6±0.363.4±21.6PPMs陽性組698.2±2.45.5±0.467.1±10.75.1±3.25.2±1.84.0±0.977.5±22.8t或χ2值1.2352.1462.1271.6473.3375.2682.752P值0.2870.0390.0410.1120.0010.0000.007

表2 痰PPMs重復培養情況〔n(%),n=163〕

組別n痰白細胞(×106/g)痰中性粒細胞(×106/g)痰中性粒細胞百分比(%)急性加重次數HI陰性組802.0±0.71.3±0.566.5±23.12.5(0～4)HI陽性組216.5±3.15.6±2.880.8±22.73(1～5)t或u值3.3877.4692.6131.482P值0.0010.0000.0120.138

3 討 論

本研究結果表明，COPD患者氣道內具有較高的PPMs陽性率，其中最為常見的是HI。同時，本研究發現PPMs陽性者的肺功能較差，而外周血和痰液的炎癥反應更為嚴重，提示PPMs與肺功能和炎癥反應關系密切。有研究表明，短期抗生素治療可以降低穩定期COPD患者痰細菌負荷和中性粒細胞〔4〕，支持PPMs和氣道炎癥之間的因果關系。本研究結果發現，HI是最常見且唯一一種持續存在的呼吸道PPM，這與國外的研究結果一致〔3〕。研究表明，COPD患者先天免疫反應功能受損，對HI的吞噬反應減弱〔8〕。而且，與其他呼吸道PPMs相比，HI已被發現具有侵入肺實質的能力，并且可以在細胞內發現〔9〕，使其更加難以被清除。與其他PPMs相比，HI的持續存在提示其與COPD關系更為密切，但是其對COPD的發病機制、臨床表現、預后以及治療策略的確切影響，目前并不清楚。

本研究結果表明，HI與氣道炎癥密切相關，與Garcha等〔10〕研究結果相似。研究表明，HI一旦定植于氣道，會增加氣道黏膜腫瘤壞死因子(TNF)的產生，并具有明顯的細胞毒性T細胞反應〔11〕，可直接引發中性粒細胞的氣道炎癥；最近Barker等〔12〕研究表明，存在HI是氣道產生TNF和白細胞介素(IL)-1的一個獨立危險因素。另外，本研究中COPD的急性加重次數在HI陽性組和HI陰性組之間并無顯著差異，一個可能的原因是本研究的隨訪時間較短，尚難以顯現HI對臨床事件的影響。

本研究的優點在于，這是國內較早探討呼吸道PPMs與COPD疾病和炎癥之間關系的研究，并且是一個縱向研究，結果較為準確；本研究的缺點在于，首先，我們檢測PPMs的手段是傳統的細菌培養，與qPCR等分子技術相比，其準確度可能較差，尤其是當細菌處于靜息狀態時，這可能會導致假陽性和假陰性的出現；其次，限于樣本量，不同PPMs的COPD患者之間的炎癥指標是否存在差異難以進行比較。

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7 牛穎梅，童朝暉，王 辰，等.穩定期慢性阻塞性肺疾病氣道炎癥的研究〔J〕.國際呼吸雜志，2009；29(3)：132-6.

8 Taylor AE，Finney-Hayward TK，Quint JK，etal.Defective macrophage phagocytosis of bacteria in COPD〔J〕.Eur Respir J，2010；35(5)：1039-47.

9 Dr?mann D，Rupp J，Rohmann K，etal.The TGF-beta-pseudoreceptor BAMBI is strongly expressed in COPD lungs and regulated by nontypeable Haemophilus influenzae〔J〕.Respir Res，2010；11(1)：67-75.

10 Garcha DS，Thurston SJ，Patel AR，etal.Changes in prevalence and load of airway bacteria using quantitative PCR in stable and exacerbated COPD〔J〕.Thorax，2012；67(12)：1075-80.

11 King PT，Lim S，Pick A，etal.Lung T-cell responses to nontypeable Haemophilus influenzae in patients with chronic obstructive pulmonary disease〔J〕.J Allerg Clin Immunol，2013；131(5)：1314-21.

12 Barker BL，Haldar K，Patel H，etal.Association between pathogens detected using quantitative polymerase chain reaction with airway inflammation in COPD at stable state and exacerbations〔J〕.Chest，2015；147(1)：46-55.

〔2016-12-03修回〕

(編輯 李相軍/滕欣航)

1 鄭州大學第三附屬醫院呼吸一病區

趙江瑞(1983-)，女，講師，主要從事臨床護理研究。

R569

A

1005-9202(2017)07-1675-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.046