胃癌患者血清、癌組織中炎性因子及凋亡相關因子的表達

董 鵬 劉繼平

(內蒙古民族大學附屬醫院普外科，內蒙古 通遼 028000)

胃癌患者血清、癌組織中炎性因子及凋亡相關因子的表達

董 鵬 劉繼平1

(內蒙古民族大學附屬醫院普外科，內蒙古 通遼 028000)

目的 探討胃癌患者血清及癌組織中炎性因子、凋亡相關因子的表達水平，為術后靶向治療提供科學依據。方法 選取該院住院手術的胃癌確診患者68例作為受試者，術前和術后第7天受試者均空腹抽取靜脈血，受試者于術后留取癌組織及癌旁正常組織(距癌組織大于5 cm)。采用實時熒光定量法檢測血清、癌旁正常組織及癌組織中炎性因子和凋亡相關因子的mRNA表達水平；采用免疫組織化學染色法檢測癌組織及癌旁正常組織中炎性因子和凋亡相關因子的蛋白陽性表達強度。結果 與術前比較，術后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA表達水平均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA表達水平均明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53蛋白和基因表達水平明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)；TNF-α、Cyclin E蛋白和基因表達水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)。結論 胃癌患者術后IL-2、wtP53的上調及TNF-α、Cyclin E的下調提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E均參與胃癌的發生發展，有望成為胃癌治療的新靶點。

胃癌；炎性因子；凋亡因子

胃癌是全世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，中國是胃癌高發區，其發病率有逐年上升趨勢。目前對胃癌的病因、發病機制的研究報道很多〔1,2〕，其中對癌基因和抑癌基因的研究甚廣〔3〕，但對炎性因子、凋亡基因與胃癌發生發展關系的報道甚少。本研究通過分子水平檢測胃癌患者血清及癌組織中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA水平及蛋白陽性表達強度，探討胃癌發病機制及胃癌治療的靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集內蒙古民族大學附屬醫院2014年10月至2016年2月確診胃癌的住院患者68例作為受試者，其中男36例，平均年齡(53.5±2.9)歲，女32例，平均年齡(52.6±4.1)歲。病理類型：高分化腺癌21例、中分化腺癌18例、低分化腺癌29例；無淋巴轉移者33例、有淋巴轉移者35例；臨床分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例，Ⅳ期15例；癌癥患者全部排除其他器官瘤變且術前均未接受放療或化療處理，組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 實驗試劑和儀器設備 試劑：抗體IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E由美國Santa Cruz 公司提供；試劑盒SP9710和DAB由福州邁新生物技術有限公司提供； 分子生物學試劑和試劑盒均由上海生物工程有限公司提供。萊卡 2245石蠟切片機(德國)；ABI7300實時熒光定量PCR儀(美國)；Biometra PCR擴增儀(美國)。

1.3 基因和蛋白檢測

1.3.1 各組IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的基因表達水平 IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的引物序列由上海生物工程有限公司提供，產物分別是287 bp、 254 bp、173 bp和136 bp，采用實時熒光定量PCR檢測，嚴格按照試劑盒操作。凝膠成像后用凝膠圖像分析系統分析結果，mRNA表達水平以CT值表示。

1.3.2 各組IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的蛋白表達水平 組織經固定、脫水、透明、浸蠟、包埋，制備成3 μm的防脫切片，行免疫組織化學染色，抗體稀釋比例均為1∶100，4℃過夜后連接SP試劑盒，PBS緩沖液充分沖洗后用DAB顯色試劑盒顯色，蘇木精復染細胞核，樹膠封片，光學顯微鏡下觀察分析。

1.4 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件進行t檢驗及χ2檢驗。

2 結 果

2.1 血清、癌旁正常組織和癌組織中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA表達水平的比較 見表1、表2。與術前比較，術后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA水平均明顯升高(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平均明顯降低(P<0.01)。與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53 mRNA水平明顯降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平明顯升高(P<0.01)。

時間IL-2wtP53TNF-αCyclinE術前1.12±0.540.93±0.158.05±0.999.38±1.03術后3.51±0.821)2.64±0.471)3.25±0.611)3.55±0.861)

與術前比較：1)P<0.01

2.2 IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E在癌旁正常組織和癌組織中的蛋白表達比較 與癌旁正常組織比較，癌組織中IL-2、wtP53的蛋白陽性表達強度明顯降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E的蛋白陽性表達強度明顯升高(P<0.01)。采用圖像分析軟件Motic Images Advanced 3.2檢測灰度值，蛋白陽性表達強度與灰度值呈反比。見表3。

組別IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常組織4.93±0.515.62±0.892.97±0.713.45±0.83癌組織0.85±0.131)1.38±0.431)10.52±1.411)12.08±1.581)

與癌旁正常組織比較：1)P<0.01，下表同

組別IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常組織85.62±4.3894.35±5.07130.81±8.75134.88±9.26癌組織129.08±8.911)135.67±9.061)90.74±6.321)85.25±6.311)

3 討 論

胃癌是常見消化道腫瘤之一，目前其發病機制尚未完全明確。胃癌的發生發展可分為多個階段，同時各階段均有多種基因參與。近年來研究證實，凋亡因子、炎性因子與腫瘤的發生發展日益密切，比如IL-1、IL-2、Bcl-2、Bax等〔4，5〕，他們參與多種惡性腫瘤的發生發展過程〔6〕。已有研究證實，白細胞介素(IL)-2具有多種生物學活性，是迄今發現的功能最為廣泛的細胞因子之一，它能促進T細胞介導的免疫反應，調節T細胞的成熟活化參與機體免疫應答；TNF-α由巨噬細胞產生，是一種具有多效性的細胞因子，廣泛參與機體內多種生物學效應例如組織的損傷及腫瘤壞死，同時可誘導細胞的增生、分化與凋亡；wtP53基因作為腫瘤抑制基因可抑制腫瘤生長并誘導細胞發生凋亡及捕獲G1周期，通過阻滯細胞周期和誘導細胞凋亡而達到抗癌作用；Cyclin E是一種細胞周期蛋白，主要作用是促進DNA復制的起始，其表達受細胞周期調節并在G1期末達到高峰，它能與細胞周期依賴激酶(CDK2) 特異性地結合形成復合物Cyclin E/CDK2，促使底物磷酸化釋放轉錄因子，使細胞通過起始點進入S期，從而在人類腫瘤中高表達〔7～10〕。本研究結果說明胃癌患者術后能使IL-2、wtP53上調和TNF-α和Cyclin E下調，提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E參與胃癌的發生發展，這一研究結果有助于發現胃癌治療新靶點。

1 程宏厚,王天明.97例早期胃癌臨床病理分析〔J〕.中華綜合臨床醫學雜志,2004;10(6):46-7.

2 謝 瓊,盧月月,易宏鋒.Caspase-3和P53在胃癌中的表達及臨床意義〔J〕.胃腸學和肝病學雜志,2014;23(11):1287-9.

3 李 娜,高俊巖,劉 敏.細胞凋亡和腫瘤的關系研究進展〔J〕.當代醫學,2009;15(16):13-4.

4 李 軍,石 搏,黃可欣,等.葛根素對心肌缺血再灌注大鼠心肌組織Bcl-2、Bax和Caspase-3表達水平的影響〔J〕.中國實驗診斷學，2013;17(4):631-3.

5 于慧玲,李冬梅,孫勤暖,等.不同宮頸病變患者血清和宮頸病變組織中凋亡相關因子的表達及其臨床意義〔J〕.吉林大學學報醫學版,2015;41(1):129-35.

6 甘偉平,羅陳飄,陳喜志,等.抑癌基因PTEN和P53在胃癌中的表達及意義〔J〕.中華實用診斷與治療雜志,2016;30(1):68-70.

7 周春紅,蔣 茜,盛月華,等.胃癌患者血清TNF、IL-2、IL-6檢測〔J〕.齊齊哈爾醫學院學報,2009;30(18):2237-8.

8 孫勤暖,李冬梅,吳 罡,等.甲狀腺乳頭狀癌患者血清、癌組織中P53、Fas、TNF-α和Cyclin E的表達及臨床意義〔J〕.中國免疫學雜志,2014;30(10):1383-7.

9 孫勤暖,李冬梅,于慧玲,等.甲狀腺乳頭狀癌組織中炎性因子的表達及其臨床意義〔J〕.吉林大學學報醫學版,2014;40(6):1261-6.

10 楊正平.Cyclin E/Cdks復合物相關調控分子與腫瘤關系的研究進展〔J〕.實用腫瘤學雜志,2008;22(2):185-8.

〔2016-10-11修回〕

(編輯 郭 菁)

內蒙古自治區科學技術廳(2011ms1174)

1 內蒙古民族大學附屬醫院護理部

劉繼平(1973-)，女，副主任護師，主要從事護理管理及外科護理研究。

董 鵬(1978-)，男，主治醫師，碩士，主要從事肝膽免疫學研究。

R735.5

A

1005-9202(2017)07-1671-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.044