8年生轉基因庫安托楊外源基因轉移及對土壤微生物數量影響的檢測

朱文旭，丁昌俊，張偉溪，張冰玉，黃秦軍，褚延廣，蘇曉華

(林木遺傳育種國家重點實驗室，國家林業局林木培育重點實驗室，中國林業科學研究院林業研究所,北京 100091)

8年生轉基因庫安托楊外源基因轉移及對土壤微生物數量影響的檢測

朱文旭，丁昌俊，張偉溪，張冰玉，黃秦軍，褚延廣，蘇曉華*

(林木遺傳育種國家重點實驗室，國家林業局林木培育重點實驗室，中國林業科學研究院林業研究所,北京 100091)

[目的]評價轉基因庫安托楊可能引起的生態風險。[方法]利用PCR擴增研究外源基因水平轉移情況，利用稀釋平板法研究土壤中細菌、真菌和放線菌數量。[結果]電泳結果顯示：林下雜草混合樣品和土壤微生物DNA樣品中均未出現目的基因片段。轉基因株系和非轉基因株系的非根際土壤中可培養的細菌、真菌和放線菌數量在楊樹的不同生長期出現一定的變化，但是這種變化沒有明顯的規律。[結論]8年生轉基因庫安托楊未出現外源基因水平轉移，也未對土壤微生物的數量產生顯著影響。

轉多基因楊樹；基因水平轉移；土壤微生物；生態安全性

國際農業生物技術服務組織(ISAAA)發布的最新統計數據，截止到2014年轉基因植物商業化種植已經進行了19年(1996年—2014年)，轉基因植物的推廣面積持續增加[1]。在林木方面，通過轉基因手段已獲得了耐鹽[2]、抗蟲[3-4]、抗除草劑[5]、降低木質素含量[6]、增加生長量[7]等轉基因樹木。伴隨著轉基因植物的快速發展，關于轉基因植物安全性方面的爭論一直存在。因此，轉基因植物在實際推廣之前需要進行安全性評估。目前，轉基因植物生態安全性評估[8]主要集中在轉基因植物外源基因逃逸[9-10]以及對生態系統的影響方面。土壤微生物是土壤生態系統的一個重要組成部分，參與土壤生態系統中物質循環和能量流動，對土壤中C、N、P和S等養分元素的循環和有機質的分解起重要作用[11]。轉基因植物的外源基因通過水平轉移，將遺傳物質傳遞給非子代的其他細胞的方式整合到土壤微生物的基因組中，從而可能使土壤微生物的遺傳特性與功能發生一定變化。外源基因的表達所引起的植物生理代謝的改變，以及外源基因表達的產物進入土壤生態系統后可能會對根際微生物群落產生潛在影響[12]。因此，在研究中經常通過測定土壤微生物種類和數量作為轉基因植物安全性監控的指標。

國內外關于轉基因植物安全性的研究多集中在大豆、玉米、棉花等1年生農作物上[1]，關于轉基因林木對土壤微生物多樣性的研究報道多以苗期或幼樹為主[1, 13-15]，對成齡期樹木的研究很少[16]。林木多是在成齡期取材利用，所以，對轉基因林木的安全性監測需要長期進行。在苗期調查時未發現轉多基因庫安托楊對土壤微生物的數量造成影響[17]。本研究以8年生轉多基因的庫安托楊為研究對象，研究了外源基因是否發生轉移及對土壤微生物數量的影響，為轉基因楊樹安全性評估提供參考。

1 試驗林概況

試驗林位于北京市房山區韓村河東營苗圃，2006年春季造林，每個轉基因株系按正方形種植，行10株、列10株(密度2 m×2 m)，造林總面積為0.66 hm2。試驗地的地勢、地貌、氣溫、降雨、植被、栽培管理等自然條件和人為管理均一致，整個試驗階段林地不進行任何肥水及噴施農藥管理。實驗材料為轉5個基因的庫安托楊(P.×euramericana‘Guariento’) 5個株系，5個外源基因包括：枯草桿菌果聚糖蔗糖酶基因(SacB)、透明顫菌血紅蛋白基因(Vgb)、雙價抗蛀干害蟲基因(BtCry3A+OC-Ⅰ)及調節基因(JERF36)，5個株系編號為D5-9、D5-19、D5-20、D5-21和D5-24，非轉基因無性系編號為(D5-0)。各株系經PCR、Southern雜交和BtCryAELISA等分子檢測，同時含有上述5個基因[18]。

2 研究方法

2.1 取樣方法

2.2 DNA 的提取

將同一無性系林地下方的植物樣品混合研磨，提取多種植物DNA的混合樣品。植物樣品DNA的提取采用DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Germany)法。參照UltraClean?DNA Isolation kit(土壤微生物DNA提取試劑盒)使用說明書，使用試劑盒提取7月份的非根際土壤中微生物的總DNA。

2.3 PCR反應條件及程序

使用外源基因的特異引物對土壤微生物DNA和植物DNA進行PCR擴增。PCR 反應體系如下：10×Taq buffer 5 μL，dNTP Mixture (2.5 mol·L-1) 1 μL ；Primer F (10 μmol·L-1) 1 μL ，Primer R (10 μmol·L-1) 1 μL ，rTaq (2.5 U·μL-1) 0.5 μL ，模板DNA 2 μL ，加ddH2O補足至50 μL 。PCR所用引物序列與反應條件見表1、2。

表1 外源基因引物及產物大小

2.4 土壤微生物數量測試方法

細菌培養使用牛肉膏蛋白胨培養基，真菌培養使用馬丁(Martin)孟加拉紅-鏈霉素培養基，放線菌培養使用改良淀粉銨鹽培養基。首先用滅菌的250 mL三角瓶稱取10 g土壤樣品，加入90 mL無菌水，再加入少量滅菌的小玻璃珠以方便將土壤搖開，

表2 PCR 反應程序

室溫下在搖床上(平動用150 r·min-1，晃動用200 r·min-1)振蕩30 min，然后使用無菌水對菌液進行濃度稀釋，每個處理選擇2種濃度的菌液進行培養。細菌選取10-3、10-4濃度的土壤懸濁液，放線菌選取10-2、10-3濃度的土壤懸濁液，真菌選取10-1、10-2濃度的土壤懸濁液，吸取50 μL菌液，均勻的涂在選擇性培養基上，每個濃度涂抹5個培養皿，放線菌培養基置于28 ℃的培養箱內培養，細菌和真菌培養基置于35 ℃的培養箱內培養。同時稱取一定量的待測土樣，用牛皮紙袋裝好，放于烘箱中，105 ℃烘烤，恒質量后稱量其質量，計算土壤含水量，從而計算出每克干土中土壤微生物的數量。

2.5 數據統計分析

采用Excel和SPSS軟件對試驗數據進行方差分析和多重比較

3 結果與分析

3.1 外源基因水平轉移的情況分析

利用外源基因Vgb、SacB、BtCry3A+OC-I和JERF36的特異性引物分別對試驗林內的根際土壤微生物總DNA和林下雜草混合樣品總DNA進行PCR檢測。CK-為無底物模板DNA只有水的對照，CK+為對應基因的質粒陽性對照，M為DNA Marker(200、400、700、1 000、1 500、2 000 bp)。由圖1、2可知，未見目的片段。

圖1 微生物DNA的PCR擴增
Fig.1 PCR amplification in genomic DNA of soil microbial
(Vgb、SacB、BtCry3A+OC-I和JERF36代表不同引物，圖上數字代表PCR 產物的大小，下同。)
(Vgb、SacB、BtCry3A+OC-I and JERF36 represent different primers, chart numbers represent the size pcr product，the same below。)

圖2 對植物DNA的PCR 擴增Fig.2 PCR amplification in genomic DNA of plant

3.2 不同株系中土壤微生物的數量變化

對8年生轉基因楊樹(D5-9，D5-19，D5-20，D5-21和D5-24)及非轉基因楊樹(D5-0)的非根際土中細菌、真菌和放線菌的數量進行統計分析。表3表明：在7月份(楊樹生長旺盛階段)細菌數量急劇增加，顯著高于春季開始生長階段和秋季停止生長階段，轉基因楊樹與非轉基因楊樹土壤中細菌的數量差異不顯著。比較同一無性系的轉基因楊樹在不同月份土壤中細菌的數量發現：除4月份差異顯著外，其它月份的差異不顯著。真菌數量的變化趨勢也是先增加后下降，D5-0、D5-21和D5-24非根際土壤中真菌數量的最大值出現在8月份，D5-9 D5-19 D5-20非根際土壤中真菌數量的最大值出現在9月份，隨后明顯下降。轉基因無性系與非轉基因無性系的差異不顯著。放線菌數量也有同樣的變化趨勢，在楊樹生長最快的7月份，除D5-24外，其余都達到最大值。

表3 8年生林地不同無性系土壤微生物數量

注：數據是平均值±標準差(n=3)；同一行不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: Values are means ± standard deviation (n=3). The values followed by diferent lowereases mean significant diference (P<0.05) between treatments.

4 討論

轉基因植物在大面積種植以后，其對環境的影響一直備受關注。轉基因林木產生大量的根茬和殘枝落葉，外源基因片段會隨之進入土壤生態系統，這時目的基因片段有可能會發生基因的水平轉移，進入土壤微生物體內并整合到其基因組上，進而改變土壤微生物群落結構及其多樣性，而且植物殘體和根際分泌物與土壤中的微生物相互作用，也有可能影響微生物的種類、數量以及生命活動。利用外源基因引物分別對試驗林內植物總DNA和根際土壤微生物總DNA進行PCR檢測，未見目的片段。稀釋平板培養法的結果顯示：轉基因楊樹與非轉基因楊樹的非根際土壤中可培養的細菌、真菌和放線菌數量在不同生長期會出現一定的變化，但是這種變化沒有達到顯著水平而且變化規律也不明顯。微生物的數量都是在楊樹生長最旺盛的(7月和8月)達到最大值。

李霞等[15]研究1年生轉Bt基因歐洲黑楊發現，轉基因和對照林地間及根際土壤中微生物數量在不同月份的差異不顯著。胡建軍等[16]研究7年生轉Bt基因的歐洲黑楊，轉基因歐洲黑楊與非轉基因歐洲黑楊間根系土壤中細菌、放線菌和霉菌數量的差異不顯著，轉基因歐洲黑楊與鄰近楊樹林地的土壤細菌、放線菌和霉菌數量的差異也不顯著。張雁等[19]研究轉Bt基因南林895楊發現，轉Bt基因楊樹根際三大類土壤微生物的數量與對照的差異不顯著。另一些研究表明，轉基因植物對土壤微生物多樣性組成的影響顯著。王洪興等[20]在研究轉Bt基因的水稻發現，轉基因水稻根際細菌數量顯著低于非轉基因水稻，轉基因水稻根際真菌數量卻顯著高于非轉基因水稻，根際放線菌數量沒有明顯變化規律。王倩倩等[21]研究轉CpTI基因蘋果發現，種植30 d時，轉基因根際土壤中細菌和真菌數量高于非轉基因對照；60 d時，根際土壤中真菌數量顯著高于對照，而細菌數量顯著低于對照。

5 結論

通過對8年生轉多基因庫安托楊5個株系和非轉基因株系進行研究，未發現外源基因轉移，轉基因楊樹的土壤微生物數量主要受季節變化影響。森林中土壤微生物的組成和結構復雜，關于林木轉基因安全需要進行系統、全面和長期的研究。

[1] Clive James. 2014年全球生物技術/轉基因作物商業化發展態勢[J]. 中國生物工程雜志, 2015, 35(1):1-14.

[2] 楊春霞, 李火根, 程 強, 等. 南林895楊抗旱耐鹽基因DREB1C的轉化[J]. 林業科學, 2009, 45(2):17-21.

[3] Zhang B, Chen M, Zhang X,etal. Expression ofBt-Cry3A in transgenicPopulusalba×P.glandulosaand its effects on target and non-target pests and the arthropod community[J]. Transgenic research, 2011, 20(3): 523-532.

[4] Génissel A, Leplé J C, Millet N,etal. High tolerance againstChrysomelatremulaeof transgenic poplar plants expressing a syntheticcry3Aagene formBacillusthuringiensisssp. tenebrionis[J]. Mol Breed, 2003, 11(2): 103-110.

[5] Confalonieri M, Belenghi B, Balestrazzi A,etal. Transformation of elite white poplar (PopulusalbaL. ) cv. ‘Villafranca’and evaluation of herbicide resistance[J]. Plant Cell Rep, 2000, 19(10): 978-982.

[6] Eriksson M E, Israelsson M, Olsson O,etal. 2000. Increased gibberellin biosynthesis in transgenic trees promotes growth,biomass production and xylem fiber length[J]. Nat Biotechnol, 18(7): 784-788.

[7] Shani Z, Dekel M, Tsabary G,etal. Growth enhancement of transgenic poplar plants by overexpression ofArabidopsisthalianaendo-1,4-β-glucanase(cel1)[J]. Mol Breed, 2004, 14(3): 321-330.

[8] Wolfenbarger L L, Phifer P R. The ecological risks and benefits of genetically engineered plants[J]. Science, 2000, 290(5499): 2088-2093.

[9] Lu B R, Snow A A. Gene flow from genetically modified rice and its environmental consequences[J]. BioScience, 2005, 55(8): 669-678.

[10] Londo J P, Bautista N S, Sagers C L,etal. Glyphosate drift promotes changes in fitness and transgene gene flow in canola (Brassicanapus) and hybrids[J]. Annals of botany, 2010, 106(6): 957-965.

[11] Preston-Mafham J, Boddy L, Randerson P F. Analysis of microbial community functional diversity using sole-carbon-source utilisation profiles-a critique[J]. FEMS Microbiology Ecology, 2002, 42(1): 1-14.

[12] 關正君, 魯順保, 魏 偉. 轉基因植物對土壤微生物群落的影響及風險評價[J]. 科學, 2015, 67(3): 47-51.

[13] 魏 冰, 李 云, 杜寧霞, 等. 毛白楊雜種外源基因穩定性及其對土壤微生物的影響[J]. 核農學報, 2009, 23(6): 1054-1059.

[14] 侯英杰, 蘇曉華, 焦如珍, 等. 轉基因銀腺雜種楊對土壤微生物的影響[J]. 林業科學, 2009, 45(5):148-152.

[15] 李 霞, 薛泉宏, 樊軍鋒, 等. 一年生轉Bt基因歐洲黑楊對土壤微生物的影響[J]. 西北林學院學報, 2011, 26(4): 123-127.

[16] 胡建軍, 張蘊哲, 盧孟柱, 等. 歐洲黑楊轉基因穩定性及對土壤微生物的影響[J]. 林業科學, 2004, 40(5): 105-109.

[17] 侯英杰. 轉基因楊樹生態安全性評價初步研究[D]. 北京：中國林業科學研究院, 2008.

[18] Wang J G, Su X H, JI L L,etal. Multiple TransgenesPopulus×euramericana‘Guariento’ plants obtained by biolistic bombardment[J]. Chinese Science Bulletin, 2007, 52 (2) : 224- 230.

[19] 張 雁, 郭同斌, 潘惠新, 等. 轉Bt基因南林 895 楊抗蟲性及對土壤微生物影響分析[J]. 林業科學研究, 2012, 25(3): 346-350.

[20] 王洪興, 陳 欣, 唐建軍, 等. 轉Bt基因水稻秸稈降解對土壤微生物可培養類群的影響[J]. 生態學報, 2004, 24(1): 89-94.

[21] 王倩倩. 轉基因蘋果對微生物群落數量及植株花粉育性影響研究[D]. 保定：河北農業大學, 2013.

(責任編輯：詹春梅)

DOI:10.13275/j.cnki.lykxyj.2017.02.024

毛竹擴張對常綠闊葉林土壤性質的影響及相關分析

趙雨虹1,2，范少輝2*，羅嘉東3

(1．國家林業局林產工業規劃設計院，北京 100010； 2.國際竹藤中心，國家林業局竹藤科學與技術重點實驗室，北京 100102；3.中國林業科學研究院亞熱帶林業實驗中心，江西 分宜 336600)

收稿日期： 2015-01-29
基金項目： “十二·五”竹藤資源高效培育技術研究與示范資助(2012BAD23B04)
作者簡介： 趙雨虹(1983—)，女，天津市人，工程師，博士，主要從事森林生態學研究.E-mail: rainbow.86@163.com
* 通訊作者：范少輝(1962—)，男，福建永泰人，研究員，博士生導師，主要從事竹林培育研究.E-mail: fansh@icbr.ac.cn

關鍵詞：毛竹擴張;土壤碳含量;土壤物理性質;土壤水分特征

Keywords:Phyllostachysedulisexpansion；soil organic carbon content；soil physical properties；soil water properties

常綠闊葉林是我國濕潤亞熱帶地區特有的森林生態系統，蘊藏豐富的資源和生物多樣性。毛竹(Phyllostachysheterocycla(Carr.)Mitford)作為一種高大散生喬木狀克隆植物，依靠強大的地下莖(竹鞭)向常綠闊葉林蔓延以實現種群克隆擴張，導致常綠闊葉林演替形成竹闊混交林，甚至在人為干擾下形成毛竹純林[1]。毛竹擴張能夠引起一系列生態變化，如森林景觀被破壞[2]、生物多樣性銳減[3]、林地土壤退化[4]及森林碳庫改變[5]等。常綠闊葉林在毛竹擴張的脅迫下，結構簡化、組成成分減少、物流能流受阻、平衡狀態破壞、更新能力減弱，以及生態系統服務功能的持續下降導致水土流失加劇，自然災害頻發、生物多樣性減少、生態與環境質量下降[6]。近年來，常綠闊葉林受鄰近毛竹林擴張的問題逐漸引起生態學家的廣泛關注，但基于土壤有機碳含量和土壤性質對毛竹擴張給常綠闊葉林帶來的影響尚未見報道。為此，本研究在江西省大崗山森林生態定位站，基于空間代替時間理論，選擇常綠闊葉林、2∶8竹闊混交林，8∶2竹闊混交林和毛竹純林4種林分類型為研究對象，對4種植被林下土壤有機碳和土壤物理性質、持水能力變化特征進分析，并運用相關分析方法探討其相互關系，以揭示毛竹擴張對常綠闊葉林土壤性質的影響。旨在為我國亞熱帶森林植被演替方面研究提供理論支持，豐富我國南方竹林主要分布區域已有竹林擴張研究成果，為大崗山地區森林科學經營提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究區概況

1.2 研究樣地設置

試驗地設置在大崗山森林生態站海拔300 m區域。2014年6月，在盡量保持立地條件和經營措施一致的前提下，選取常綠闊葉林、2∶8竹闊混交林、8∶2竹闊混交林和毛竹純林4種林分類型，每種林分各設置3個20 m×20 m標準樣地，共12個樣地。常綠闊葉林優勢種主要為絲栗栲(CastanopsisfargesiiFr.)，林下植物主要為黃牛奶樹(Symplocoslaurina(Retz.)Wall.)、苦櫧栲(Castanopsissclerophylla(Lindl.)Schott.)、絨毛潤楠(MachilusvelutinaChamp. ex Benth.)、油茶(CamelliaoleiferaAbel.)、鐵芒萁(Dicranopterisdichotoma(Thunb.)Bernh.)、淡竹葉(LophatherumgracileBrongn.)和草珊瑚(Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai)等；竹闊混交林由毛竹和絲栗栲組成，林下植被主要有刨花楠(MachiluspauhoiKanehira)、山烏桕(Sapiumdiscolor(Champ. ex Benth.)Muell.Arg.)、油茶、絨毛潤楠、杜莖山(Maesajaponica(Thunb.)Moritzi.)、淡竹葉、鐵芒箕和寒莓(RubusbuergeriMiq.)等；毛竹純林下植被簡單，主要有淡竹葉、油茶、毛冬青(IlexpubescensHook. et Arn.)和狗脊(Woodwardiajaponica(L.f.)Sm.)等[9]。4種林分類型樣地基本情況詳見表1。

1.3 樣品采集與分析方法

1.3.1 樣品采集 在每個標準樣地內按照海拔高

表1 樣地概況

注：表中每種林分數據均為實際調查樣地的加權平均值。

Note: The data of each stand is a weighted average of the actual survey plots in the table.

1.3.2 室內分析 土樣密度、土壤持水量采用環刀法測定；土壤孔隙度和貯水量采用計算法；土壤有機碳采用K2Cr2O7外加熱法測定[10-12]。

1.4 數據處理

采用Excel圖表和SPSS13.0軟件進行數據處理。

2 結果與分析

2.1 土壤有機碳含量變化特征

圖1 毛竹擴張對林地土壤有機碳含量的影響Fig.1 The effect on soil organic carbon content about P. edulis expansion

2.2 土壤密度與孔隙度變化特征

表2 4種林分類型土壤密度

注：同行不同小寫字母表示不同林分間差異顯著(p<0.05)，同列不同大寫字母表示同一林分不同土層間差異顯著(p<0.05) (LSD)。

Note: Different lower case letters in same line indicate significant difference in different stand (P<0.05). Different capital letters in the same column indicate significant difference in different soil layers in the same stand (P<0.05) (LSD).

2.3 土壤水分變化特征

表3 4種林分土壤物理性質特征

注：同林分不同小寫字母表示不同土層間差異顯著(p<0.05)，同列不同大寫字母表示不同林分間差異顯著(p<0.05) (LSD)，下同。

Note: Different lower case letters in same stand indicate significant difference in different soil layers (P<0.05). Different capital letters in the same column indicate significant difference in different stand (P<0.05) (LSD). The same below.

2.4 土壤有機碳含量與土壤其他特征的相關分析

表5表明：土壤有機碳含量與土壤總孔隙度呈顯著正相關，與土壤密度、非毛管持水量和現有貯水量呈顯著或極顯著負相關，與其它相關變量相關性不顯著。土壤物理性質和水分各指標間也存在不同程度的相關關系，土壤密度與總孔隙度、毛管孔隙度、飽和持水量、毛管持水量呈極顯著負相關，與非毛管持水量成顯著正相關；而土壤總孔隙度與毛管孔隙度、飽和持水量、毛管持水量呈極顯著正相關，與非毛管持水量呈顯著負相關；毛管孔隙度與飽和持水量、毛管持水量呈極顯著正相關；飽和持水量與毛管持水量呈極顯著正相關，與非毛管持水量呈顯著負相關。

表4 4種林分土壤水分變化特征

表5 土壤有機碳與各土壤性質間的相關系數

注：表中*表示P<0.05，**表示P<0.01。

Note: * indicateP<0.05，** indicateP<0.01。

3 討論

大崗山生態站研究區域均為林齡較高的次生常綠闊葉林，凋落物層較厚，土壤肥沃，有機碳含量較高，常綠闊葉林表層土壤孔隙度和持水量均較高，為擴張后竹筍萌發提供了充足的養分、水分來源。宋慶妮等[13]的研究結果表明，毛竹擴張對土壤氮素的礦化是毛竹成功擴張的另一個原因，在常綠闊葉林逐漸演替成毛竹純林的過程中，土壤氮素氨化作用增強，產生的大量銨態氮，進一步滿足了毛竹生長發育對土壤氮素的需求，而隨著林地毛竹比例增加，土壤硝化作用和總礦化作用下降，不能滿足常綠闊葉林對大量土壤硝態氮和無機氮的需求，影響了常綠闊葉林的生長。因此，土壤碳氮含量以及土壤密度、孔隙度和水分特征可能是控制毛竹林擴張，維持常綠闊葉林作為頂級群落穩定性的重要生態策略，但是，空間代替時間的方法不能完整還原常綠闊葉林向毛竹純林演替過程，其機理也更為復雜，需進一步研究。

4 結論

原先闊葉樹的林分土壤密度高于毛竹純林，土壤孔隙度、持水量較低，進而影響土壤水肥的運輸和通氣性能，降低植物對養分的利用；毛竹在擴張過程中為了吸收營養物質，依靠強大的地下竹鞭不斷擴張到常綠闊葉林生態系統，導致林內部分木本植物競爭失敗而死亡，增加了竹闊混交林土壤有機碳來源，促進竹闊混交林土壤有機碳含量的增加；但由于毛竹無性繁殖的特點，對土壤有機碳消耗巨大，當常綠闊葉林完全演替到毛竹純林后，原來常綠闊葉林林下植被大部分已消失殆盡，再加上擇伐、挖筍等人類活動的影響，地上、地下碳源大量減少，從而導致土壤有機碳歸還降低，有機碳含量逐漸下降。

參考文獻：

[1] 《江西森林》編委會. 江西森林[M]. 南昌: 江西科學技術出版社, 1986: 220-230.

[2] Yuji I, Atsushi T. Range expansion and its mechanisms in a naturalized bamboo species,Phyllostachyspubescens, in Japan [J]. Journal of Sustainable Forestry, 1998, 6:127-141.

[3] 楊淑貞, 杜晴洲, 陳建新, 等. 天目山毛竹林蔓延對鳥類多樣性的影響研究[J]. 浙江林業科技, 2008, 28(4): 43-46.

[4] 吳家森, 姜培坤, 王祖良. 天目山國家級自然保護區毛竹擴張對林地土壤肥力的影響[J]. 江西農業大學學報, 2008, 30(4): 689-692.

[5] 楊清培, 王 兵, 郭起榮, 等. 大崗山毛竹擴張對常綠闊葉林生態系統碳儲特征的影響[J]. 江西農業大學學報, 2011, 33(3): 529-536.

[6] 宋永昌, 陳小勇. 中國東部常綠闊葉林生態系統退化機制與生態恢復[M]. 北京: 科學出版社, 2007.

[7] 王 兵, 李少寧, 李利學, 等. 大崗山森林生態系統優化管理模式研究[J]. 江西農業大學學報, 2005, 27(5): 683-688.

[8] 張昌順，范少輝，謝高地. 閩北毛竹林枯落物層持水功能研究[J]. 林業科學研究，2010, 23(2): 259-265.

[9] 趙雨虹. 毛竹擴張對常綠闊葉林主要生態功能的影響[D]. 北京：中國林業科學研究院，2015.

[10] 國家林業局.森林土壤分析方法[M]. 北京: 中國標準出版社, 1999: 1-108.

[11] 王 丹, 戴 偉, 王 兵, 等. 杉木人工林不同發育階段土壤性質變化的研究[J]. 北京林業大學學報, 2010, 32(3): 59-63.

[12] 鮑士旦. 土壤農化分析方法[M]. 北京: 中國農業出版社, 2008: 1-200.

[13] 宋慶妮, 楊清培, 劉 駿, 等. 毛竹擴張對常綠闊葉林土壤氮素礦化及有效性的影響[J]. 應用生態學報, 2013, 24(2): 338-344.

[14] 劉蔚漪, 范少輝, 蘇文會, 等. 竹林不同界面水文效應研究[J]. 浙江農林大學學報,2011,28(3):486-493.

[15] 王 丹,王 兵, 戴 偉, 等. 杉木人工林土壤系統有機碳相關變量的通徑分析[J].土壤通報,2011,42(4):822-827.

(責任編輯：徐玉秀)

Exogenous Gene Transformation of 8-Year-Old Multi-gene TransgenicPopulus×euramericana‘Guariento’ and Its Influence on Soil Microbial Quantity

ZHUWen-xu,DINGChang-jun,ZHANGWei-xi,ZHANGBing-yu,HUANGQin-jun,CHUYan-guang,SUXiao-hua

(State Key Laboratory of Forest Genetics and Tree Breeding, Key Laboratory of Tree Breeding and Cultivation, State Forestry Administration, Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China)

[Objective]To evaluate the possibility of the ecological risk caused by multi-gene transgenicPopulus×euramericana‘Guariento’.[Method]The target genes were amplified by PCR, and the amounts of three species of rhizosphere soil microbe, including bacteria, actinomycetes and fungi, were counted.[Result]No target PCR product was observed in all samples analyzed. The amounts of bacteria, fungi and actinomycetes in non-rhizosphere soil between transgenic poplar and non-transgenic poplar did have some changes in different growing period, but no obvious regularity was found in these changes themselves.[Conclusion]The result suggested that no horizontal transfer of transgene occurred, and the gene transformation did not significantly affect the soil microbial quantity.

multi-gene transgenic poplar; gene transfer; soil microorganism; ecological safety

The Influence ofPhyllostachysedulisExpanding into Evergreen Broadleaf Forest on Soil Property and Its Related Analysis

ZHAOYu-hong1，2,FANShao-hui2,LUOJia-dong3

(1.Forest Product Industry Programming and Design Institution, Beijing 100010, China; 2.International Center for Bamboo and Rattan, SFA Key Laboratory of Bamboo and Rattan Science and Technology, Beijing 100102, China; 3.Experiment Center of Subtropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Fenyi 336600, Jiangxi, China)

2016-06-12 基金項目： 國家“863”國家高技術研究發展計劃項目(2013AA102703)；林業公益性行業科研專項經費重大項目(201004004) 作者簡介： 朱文旭(1986-)，男，遼寧省遼陽人，在讀博士.研究方向：林木遺傳育種．E-mail：zhuwenxu.315@163.com * 通訊作者：研究員，首席專家．研究方向：林木遺傳育種.E-mail：suxh@caf.ac.cn

10.13275/j.cnki.lykxyj.2017.02.023

S718.46

A 文章編號：1001-1498(2017)02-0349-05

14 文獻標識碼：A

1001-1498(2017)02-0354-06