一起雞心包積液病例的診治*

魏鳳，張文通，苗立中，沈志強*,

（1.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

一起雞心包積液病例的診治*

魏鳳1，張文通2，苗立中1，沈志強*1,2

（1.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

2 臨床癥狀

肉雞雞群表現減食，精神沉郁，羽毛蓬亂，頭及翅膀下垂；嗜睡，臥地。

3 病理變化

剖檢病雞發現：個別雞肌肉出血；個別腺胃與肌胃交界處出血；腎臟腫大出血；心包大量淡黃色積液(如圖1所示)；肝臟顏色淡黃、腫脹及質碎，脾臟腫大出血。

圖1 心包積液

4 實驗室診斷

4.1 病料處理 取發病或病死肉雞的肝臟和脾臟，添加少量鹽水，用勻漿器進行研磨；勻漿液反復凍融三次，離心取上清。上清凍存至-80℃冰箱。

4.2 病毒RT-PCR鑒定

4.2.1 引物設計 根據 GenBank KU877428的mRNA序列，利用Prime 5.0軟件，設計擴增長度約749bp基因。引物合成單位為生工生物工程（上海）股份有限公司。擴增IBDV VP3的引物序列如下：

上游引物：5′-TCTTCGACACGTCCATCAACT-3′

下游引物：5′-TTACACGGCGTTGCCTGT-3′

4.2.2 病毒RNA基因組提取 Trizol法提取病毒RNA。詳細操作方法如下：將上述4.1中-80℃凍存的上清為提取病毒 RNA基因組的樣本；取1.5ml EP管 (注：提RNA所用到的EP管均需DEPC處理)1個，先加入250μl上清、再加入750μl Trizol試劑，渦旋混勻、室溫靜置5min；再加入200μl氯仿，然后上下顛倒搖動數次、室溫靜置10min；以 4℃ 12,000rmp離心 10min；取上層液體400μl加入至另1新的1.5ml EP管中，再加入異丙醇（預冷的）200μl，混勻于-20℃放置 30min；以4℃ 12,000rmp離心10min；棄上清液，用75%乙醇溶液（預冷的）洗滌沉淀；以 4℃ 12,000rmp離心10min；棄上清液，將該EP管放置室溫或37℃溫箱干燥10min；加入30μl含DEPC的滅菌水，得到的溶液即為病毒的RNA基因組。

4.2.3 病毒的 RT-PCR 反轉錄步驟為：取1.5ml EP管 (注：提 RNA所用到的 EP管均需DEPC處理)1個，加入RNA提取物10μl、下游引物（20μM）2μl，70℃水浴10min；取出后再加入 5× first stand buffer 4μl、dNTP(10mM)3μl、M-MLV酶1.0μl，放置42℃水浴60min；取出后放置70℃水浴15min。得到的溶液即為cDNA。

PCR體系：cDNA4μl、上游引物（20μM）和下游引物（20μM）各 0.5μl、10×PCR Buffer2.5μl、dNTP (10mM)1.0μl、滅菌水16.5μl。PCR反應程序：94℃3min、94℃30s、55℃45s、55℃45s，35個循環。

PCR產物瓊脂糖凝膠電泳：將PCR產物用瓊脂糖凝膠（濃度為1%）電泳檢測。電泳結果與設計擴增大小片段相符 （設計片段大小為749bp）。結果見圖2。

圖2 IBH的RT-PCR結果

病毒的RT-PCR鑒定結果顯示該發病雞群病原為Ⅰ群禽腺病毒。

5 治療

5.1 所有發病雛雞舍應徹底清掃，用2%次氯酸鈉溶液消毒。

5.2 減小飼養密度，加強通風換氣。

5.3 對所有發病雞群的雛雞雞群進行補液，補充Vc和電解質。

5.4 對發病雞舍所有雞群緊急接種Ⅰ群禽腺病毒高免卵黃抗體。

5.5 發病雞舍附近其他雞舍緊急接種Ⅰ群禽腺病毒滅活疫苗。

通過以上措施的治療與控制，1周后回訪該養殖場，發病雞群明顯好轉并且已幾乎未見死亡病雞。

[1] 殷震，劉景華主編.動物病毒學（第二版）[M]．北京：科學技術出版社，1997．

[2] 陳鴻軍.最新管關注：腺病毒引起的HHS[J]．中國家禽，2004,26（19）：30．

[3] 袁萬哲，李玉保，王建昌，等．雞心包積液-肝炎綜合征的初步研究[J]．中國獸醫科學，2016,46（2）：157-160．

S858.31

C

1673-1085（2017）03-0026-02

1 發病情況調查

山東省現代農業產業技術體系家禽創新團隊項目SDAIT-13-011-09。

魏鳳（1979-），女，漢族，助理研究員，主要從事獸用生物制品研究，hzndzwt1@163.com。

2017-02-17

雞包涵體肝炎 （Inclusion Body Hepatitis, IBH）是由Ⅰ群禽腺病毒 （Fowl adenovirusⅠ, FAV-Ⅰ）引起的一種急性傳染病。該病最早發生在巴基斯坦卡拉奇市安卡拉地區，所以也稱之為安卡拉病[1]。該病特征性病理變化為心包囊積液和肝炎。目前該病已在我國多地流行，可造成肉雞、蛋雞乃至水禽發病死亡，已嚴重影響養禽業健康發展[2-3]。2016年11月，山東德州某養雞場發生了以心包淡黃色積液和肝臟淡黃色出血腫脹為特征的疑似雞包涵體肝炎病例，現將診斷過程介紹如下。

山東德州某養雞，2016年11月，3周齡肉雞中零星出現發病，3d之后群體發病或散發死亡。抗生素治療無效。發病率約為10%，病死率達40%。