T細胞亞群與NK細胞在初診非小細胞肺癌患者外周血中的水平以及與預后的相關性分析

張潤萍，武曉波，戚 潔

?

·臨床醫學· ·短篇論著·

T細胞亞群與NK細胞在初診非小細胞肺癌患者外周血中的水平以及與預后的相關性分析

張潤萍，武曉波，戚 潔

目的 探討T細胞亞群與自然殺傷性淋巴細胞(NK細胞)在初診非小細胞肺癌患者外周血中的水平以及與預后的相關性。方法 選擇2010年1月至2012年12月期間在解放軍第二五一醫院就診的首發非小細胞肺癌患者80例，設為非小細胞肺癌組，另以配對原則選擇同期在我院行體檢的健康人35例設為對照組，采用BD FACSVantage SE型流式細胞儀檢測2組受試者(肺癌組未經治療前)外周血中T細胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+水平值以及計算CD4+/CD8+值)與NK細胞水平，對入組肺癌患者以電話跟蹤隨訪方式調查生存時間，生存時間的定義為確診之日至患者死亡時間或者截止2016年2月29日的時間。結果 非小細胞肺癌組患者外周血中CD3+T細胞與CD4+T細胞水平較健康對照組均有明顯的下降(P<0.05)，而外周血中CD8+T細胞水平較健康對照組有明顯升高(P<0.05)，自然殺傷(NK)細胞水平較健康對照組無明顯變化(P>0.05)；非小細胞肺癌組患者在確診時淋巴結無轉移和非遠端轉移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術治療，CD8+水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長的生存時間(P<0.05)；生存時間的Cox多因素分析中，TNM臨床分期與CK8+T細胞水平是非小細胞肺癌患者預后的2個獨立性影響因素(P<0.01)。結論 非小細胞肺癌患者的外周血中CD8+T細胞水平增高，可能預示著患者會有相對較長的生存期，通過測定初診非小細胞肺癌患者外周血中 CD8+T細胞水平可在一定程度上反應患者的預后。

非小細胞肺癌；T細胞亞群；NK細胞；臨床預后

肺癌是臨床中最為常見的肺部原發性惡性腫瘤，近10年來，全球各國肺癌的臨床發病率以及死亡率均在不斷上升，預計到2025年我國的肺癌患者或將超過100萬，臨床防治工作極為嚴峻。肺癌主要臨床分型為小細胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)及非小細胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)，其中以NSCLC最為常見，大約占到肺癌總發生率的85%。有研究[1]指出，肺癌的發生以及發展與機體免疫功能的紊亂，特別是和T細胞亞群分布紊亂密切相關。目前臨床對非小細胞肺癌患者的外周血T細胞亞群分布紊亂研究較多，但對初診非小細胞肺癌患者外周血中的T細胞亞群水平與疾病預后的關系研究較少。本研究通過測定初診肺癌患者的外周血中T細胞亞群和自然殺傷(NK)細胞水平，結合臨床病理及生存期隨訪進行綜合分析，探討T細胞亞群與NK細胞在初診非小細胞肺癌患者機體中的水平以及與臨床預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年1月至2014年1月期間在解放軍第二五一醫院就診的首發肺癌患者80例，入組標準：通過病理組織學證實為非小細胞肺癌；有完整的臨床病例資料；患者試驗前都沒有采取放化療治療或者外科手術治療。排除合并嚴重的感染性疾病或者機體自身免疫疾病者及近3個月內使用過大劑量的免疫抑制劑者。入組的80例肺癌患者(設為NSCLC組)中，男52例，女28例；年齡40～80歲，平均(61.3±7.3)歲；TNM分期情況：Ⅰ期者13例，Ⅱ期者8例，Ⅲ期者21例，Ⅳ期者38例。另以配對原則選擇同期在我院體檢的健康人35例設為對照組，男23例，女12例；年齡40～80歲，平均(62.1±6.8)歲。2組受試者在性別比和年齡方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)，可作對比研究。本次研究得到本院倫理委員會的批準，受試者以及家屬對本次研究知情并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法 采用BD FACSVantage SE型流式細胞儀以及相關抗體，對2組受試者(肺癌組未經治療前)外周血中T細胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+水平值以及計算CD4+/CD8+值)及NK細胞進行檢測。肺癌患者在完成外周血T細胞亞群、NK細胞水平檢測后，都采取單純化療或者放化療治療。13例肺癌Ⅰ期患者中，6例手術以后進行4個療程的輔助化療，另7例患者為手術后肺癌復發再采取化療，肺癌復發的時間為術后16～18個月。29例Ⅱ～Ⅲ期肺癌患者都在外科手術后采取4個療程的輔助化療，38例Ⅳ期肺癌患者都采取標準化療。患者化療的方案：參照美國國立綜合癌癥網絡指南標準(2015年)，采取含鉑雙藥方案(紫杉醇+鉑類、吉西他濱，鉑類、長春瑞濱等)，其中有24例患者在化療至瘤相對穩定以后，采取胸部立體定向放療。對入組肺癌患者以電話跟蹤隨訪方式，調查生存時間，生存時間的定義為確診之日至患者死亡時間或者截止2016年2月29日的時間。

1.3 統計學處理 采用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析，符合正態分布的計量資料以均數±標準差(x±s)表示，采取獨立樣本t檢驗以及單因素方差分析。生存時間的單因素分析采用Kaplan-Meier法，采用Log-rank檢驗。對生存時間單因素分析的結果，再運用Cox回歸行多因素分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組外周血中T細胞和NK細胞水平比較 NSCLC組患者外周血中CD3+T細胞與CD4+T細胞水平較健康對照組均有明顯下降(P<0.05)，而外周血中CD8+T細胞水平較健康對照組有明顯升高(P<0.05)，NK細胞水平較健康對照組無明顯變化(P>0.05)。見表1。

表1 NSCLC組與健康對照組外周血中T細胞和NK細胞水平的比較(x±s)

注：NSCLC：非小細胞肺癌，NK：自然殺傷性淋巴細胞

2.2 NSCLC組預后分析 NSCLC患者在確診時若淋巴結無轉移和非遠端轉移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術治療；CD8+水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長的生存時間(P<0.05)，其他因素對生存時間均無明顯影響(P>0.05)。見表2。

2.3 NSCLC組患者生存時間的Cox多因素分析 將有無淋巴結轉移、是否遠端轉移、TNM不同分期、是否行外科手術、CD8+T細胞水平以及CD4/CD8的比值等單因素生存時間分析所得出的結果，再進行生存時間Cox多因素分析，結果顯示，TNM臨床分期與CK8+T細胞水平是非小細胞肺癌患者預后的2個獨立性影響因素(HR=2.554，P<0.01；HR=1.942，P=0.008)。

3 討論

隨著科學技術的不斷進步，臨床對免疫機制的研究也越來越深入。目前，國內外研究人員均證實，肺癌發生以及發展都和人體免疫細胞特別是與體內T細胞亞群、NK細胞有著緊密的聯系。T細胞亞群中主要類型為CD3+、CD4+、CD8+等T細胞，免疫細胞在保持機體免疫系統功能平衡、發揮人體自身免疫功能中扮演著主要角色。T細胞亞群與NK 細胞已成為目前臨床監測腫瘤發展趨勢、預估治療效果及預后的重要指標[2]。

3.1 NSCLC患者體內的T細胞亞群存在明顯的變化 CD3+是反應細胞整體免疫狀態的T細胞，而CD4+T細胞是輔助性T細胞，其在抑制腫瘤的生長與轉移方面發揮著重要作用。本研究顯示，80例初診非小細胞肺癌患者外周血中CD3+T細胞與CD4+T細胞水平較健康對照組均有明顯的下降，證實肺癌患者體內的T細胞亞群存在明顯的變化。Ganesan等[3]研究認為，肺癌患者在各種抑制因素綜合的影響下使得機體處在完全免疫功能抑制狀態， 可抑制CD4+T細胞與CD3+T細胞的分化以及成熟。

表2 NSCLC組患者生存時間Kaplan-Meier單因素分析

注：NSCLC：非小細胞肺癌

CD8+T細胞能夠在分化成細胞毒性 T細胞后殺傷體內的腫瘤細胞。本次研究結果顯示，98例初診肺癌患者外周血中CD8+T細胞水平要明顯高于健康對照組，這一結果與李月雅等[4]的研究結果相一致，這提示，肺癌患者機體免疫系統可能會本能性地產出較多具有殺傷性的CD8+T細胞。由于肺癌患者體內 CD4+T細胞水平的下降、CD8+T細胞水平的上升，直接致使本組肺癌患者CD4/CD8值的下降。NK細胞能夠直接殺傷體內腫瘤細胞，其水平的降低可反應出機體免疫系統功能的下降。本組研究結果顯示，98例初診肺癌患者體內NK細胞含量要明顯低于對照組，表明肺癌患者機體免疫功能受到一定程度的損害，這一結果與江金華等[5]的研究結果相一致。

3.2 T細胞亞群含量水平變化與NSCLC患者預后的相關性分析 本研究結果顯示， NSCLC患者在確診時如淋巴結無轉移，非遠端轉移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術治療，CD8+T水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長的生存時間；其他因素對生存時間均無明顯影響。將單因素生存時間分析所得出的結果，再進行生存時間Cox多因素分析，結果顯示，TNM臨床分期與CK8+T細胞水平是非小細胞肺癌患者預后的2個獨立性影響因素。

目前有研究指出，CD8+T細胞是機體獲得性免疫的最主要的功能性細胞，能起到免疫抑制作用，能夠抑制自然殺傷性淋巴細胞的毒性與活性，且有效抵制T 細胞的大量增殖，在對抗惡性腫瘤免疫中的作用極為重要。Wahlin等學者[6]研究指出，淋巴結內 CD8+T細胞水平高的患者有更好的預后。而本研究也證實，外周血中CD8+T細胞水平是影響NSCLC患者預后的獨立性因子，當初診時CD8+T細胞水平超過31.8%時，患者會有更長的生存期。

綜上所述，NSCLC患者外周血中CD8+T細胞水平增高，可能預示著患者會有相對較長的生存期，通過測定初診NSCLC患者外周血中 CD8+T 細胞水平可在一定程度上反應患者的預后。本次研究存在樣本數量較少這一局限性，對于NSCLC患者T淋巴細胞亞群具體分布水平以及與預后的準確相關性還需要大樣本病例來進行臨床驗證。

[1] 吳姍姍，嚴峰，鄧玉玲，等. 小細胞和非小細胞肺癌晚期患者 CD3+、CD4+及CD3+、CD8+T淋巴細胞亞群的差異[J]. 中國免疫學雜志, 2015, 31(1): 114-116,121. DOI:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.01.024.

[2] 燕翔，焦順昌. 腫瘤浸潤淋巴細胞與非小細胞肺癌預后關系的Meta分析[J]. 中國醫學科學院學報, 2015, 37(4): 406-414. DOI:10.3881/j.issn.1000-503X.2015.04.007.

[3] Ganesan AP, Johansson M, Ruffell B, et al. Tumor-infiltrating regulatory T cells inhibit endogenous cytotoxic T cell responses to lung adenocarcinoma[J]. J Immunol, 2013, 191(4): 2009-2017. DOI:10.4049/jimmunol.1301317.

[4] 李月雅，張翠翠，魏熙胤，等. 肺癌患者外周血T-淋巴細胞亞群NK細胞的基線數值及其與預后的關系[J]. 中國腫瘤臨床, 2016, 43(5): 204-210.

[5] 江金華，嚴汀華，盧穗萬，等. 外周血T淋巴細胞亞群與NK細胞檢測在肺癌診斷及治療中的意義[J]. 腫瘤研究與臨床, 2013, 25(2): 90-93. DOI:10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2013.02.006.

[6] Wahlin BE, Sander B, Christensson B, et al. CD8+T-cell content in diagnostic lymph nodes measured by flow cytometry is a predictor of survival in follicular lymphoma[J]. Clin Cancer Res, 2007, 13(2 Pt 1): 388-397. DOI:10.1158/1078-0432.CCR-06-1734.

(本文編輯：彭潤松)

張家口科學技術局項目(1021129D)

075000 河北 張家口，解放軍第二五一醫院腫瘤一科

R734.2

A

10.3969/j.issn.1009-0754.2017.02.026

2016-08-26)