調(diào)節(jié)性T細胞在肝細胞癌患者中的表達頻率及意義

許海波

摘要：目的 探討肝細胞癌患者外周血CD4+CD25high Treg細胞表達頻率及其臨床意義。方法 選取28例診斷及分期明確的肝細胞癌患者及健康對照20例，流式細胞術(shù)檢測外周血CD4+CD25high Treg細胞表達頻率，并進項統(tǒng)計學分析。結(jié)果 肝細胞癌患者Treg細胞比例顯著高于健康對照組[（4.91±2.37）% vs （1.62±0.73）%，P<0.05]，差異有統(tǒng)計學意義。且其隨肝細胞癌進展不斷增加，III期患者顯著高于I和II期患者，且均高于健康對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 肝細胞癌患者CD4+CD25high Treg細胞表達頻率顯著升高且與臨床分期相關(guān)，提示Treg可能參與肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞：肝細胞癌；調(diào)節(jié)性T細胞；表達

Abstract：Objective To investigate the clinical significance of the expression of CD4+CD25high and the frequency of Treg cells in peripheral blood of hepatocellular carcinoma patients. Methods 28 cases of diagnosis and staging of hepatocellular carcinoma patients and healthy control group in 20 cases，the frequency of peripheral blood CD4+CD25high expression of Treg cells were detected by flow cytometry，and the input statistics analysis. Results The proportion of liver cells cancer cells in patients with Treg was significantly higher than that in healthy control group[（4.91±2.37）% vs （1.62± 0.73）%，P<0.05]，the difference was statistically significant.With the increasing development of hepatocellular carcinoma，III patients was significantly higher than that in patients with I and II，and were higher than the healthy control group，the differences between groups were statistical significance （P<0.05）. Conclusion The expression frequency of CD4+CD25high Treg cells in hepatocellular carcinoma was significantly increased and correlated with clinical stage，suggesting that Treg may be involved in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma

Key words：Hepatocellular carcinoma；Regulatory T cells；Clinical phase

肝細胞癌是全球主要健康問題之一，平均每年有超過60萬患者死于此病[1]。越來越多的證據(jù)顯示腫瘤與免疫功能紊亂間的密切關(guān)系，在肝細胞癌中常見的腫瘤浸潤淋巴細胞表明腫瘤觸發(fā)了免疫反應(yīng)。既往研究已經(jīng)證實腫瘤微環(huán)境中不同T淋巴細胞亞群扮演不同的作用[2]。CD4+調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）可通過抑制效應(yīng)T細胞進而負性調(diào)控抗腫瘤免疫[3]。類似腫瘤相關(guān)免疫反應(yīng)也在肝細胞癌微環(huán)境中存在，提示為肝細胞癌開發(fā)免疫療法具有理論基礎(chǔ)。肝細胞癌常規(guī)療法并不能徹底治愈，因為有50%以上患者會在3年內(nèi)復(fù)發(fā)?；谝陨显?，開發(fā)可通過誘導(dǎo)或增強現(xiàn)有腫瘤特異性免疫反應(yīng)而為患者提供更加有效且靶向腫瘤細胞的免疫療法顯得尤為迫切。而明確不同種類免疫細胞在肝細胞癌患者中的具體作用可能為新的免疫療法制定提供有效線索。Treg細胞可通過誘導(dǎo)細胞-細胞間聯(lián)系、TGF-β及IL-10等免疫抑制細胞因子分泌等多途徑抑制CD4+和CD8+ T細胞反應(yīng)，其在乙肝患者中的作用已經(jīng)獲得證實[4]，但關(guān)于其在與乙肝密切相關(guān)的肝細胞癌患者中的表達情況研究較少。據(jù)此，本研究主要探究肝細胞癌患者中Treg細胞表達頻率及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年10月～2016年2月于本院肝病科就診且確診為肝細胞癌的患者28例，平均（59.26±16.69）歲，其中男16例，女12例；其中I期10例，II期11例，III期7例。所有患者診斷及分期依據(jù)中國抗癌協(xié)會制定的原發(fā)性肝細胞癌診斷及分期標準[5]。同時選取同期健康體檢者20例作為對照組，平均（58.33±13.21）歲，男12例，女8例。肝細胞癌患者組和對照組間一般資料均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。

1.2標本采集及測定 抽取體檢者體檢當日及肝細胞癌患者入院確診后且未進行治療時清晨空腹靜脈血于EDTA抗凝管中，用于測定Treg細胞比例，所有測試均在采血后2 h內(nèi)完成。

1.3主要試劑及儀器 CD45-PC7、CD4-FITC、CD25-PC5單抗購自ebioscience公司；FC500流式細胞儀（美國Beckman公司）。

1.4流式細胞檢測CD4+CD25high Treg細胞比例 取肝細胞癌患者和健康對照者EDTA抗凝靜脈血50 μL于流式檢測管底，加入CD4和CD25抗體各20 μL室溫避光孵育20 min，加800 μL紅細胞裂解液混勻，室溫避光15 min，離心去上清；用PBS 洗2次去上清，加500 μL PBS重懸上機，根據(jù)CD45和SSC圈定淋巴細胞群，再對CD4+ T淋巴細胞進行設(shè)門，圈定CD4+CD25high Treg細胞群，同時設(shè)置同型對照，數(shù)據(jù)收集及分析采用 CXP Cytometer處理。

1.4統(tǒng)計學處理 以SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，所有實驗數(shù)據(jù)均以平均值±標準差（x±s）形式表示，組間Treg細胞平均水平比較采用t檢驗，以P<0.05視為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1肝細胞癌患者外周血Treg細胞比例 分析肝細胞癌和健康對照者外周CD4+CD25high Treg細胞比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝細胞癌患者Treg細胞比例顯著高于健康對照組[（4.91±2.37）% vs （1.62±0.73）%，P<0.05]，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2肝細胞癌患者外周血Treg細胞比例與臨床分期間的關(guān)系

進一步分析發(fā)現(xiàn)Treg細胞隨肝細胞癌進展比例不斷增加，III期患者顯著高于I和II期患者，且均高于健康對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

免疫平衡紊亂與腫瘤的發(fā)生發(fā)展間存在密切關(guān)聯(lián)，腫瘤發(fā)生是腫瘤細胞免疫逃逸的結(jié)果，而免疫效應(yīng)細胞在此過程扮演重要角色，近年來大量研究證實Treg與腫瘤免疫監(jiān)視及促進腫瘤發(fā)生進展密切相關(guān)。CD4+CD25high Treg細胞是維持免疫耐受的重要因素之一，其主要功能即限制T細胞的活化，調(diào)控免疫反應(yīng)，進而保護機體避免自身免疫性疾病發(fā)生。目前已經(jīng)證實Treg細胞介導(dǎo)的免疫逃逸是腫瘤免疫中至關(guān)重要環(huán)節(jié)，其也是抗腫瘤治療失敗的主要原因之一。Treg細胞可促進腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視進而導(dǎo)致腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[6]。

本研究通過對肝細胞癌患者及健康對照體內(nèi)Treg細胞比例測定發(fā)現(xiàn)癌癥患者外周CD4+CD25high Treg細胞比例顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義。進一步分析發(fā)現(xiàn)該細胞比例與臨床分期相關(guān)，隨著肝細胞癌臨床進展不斷增加。

以上研究結(jié)果提示肝細胞癌患者CD4+CD25high Treg細胞比率明顯高于健康組，說明肝細胞癌患者Treg升高，機體細胞免疫功能受到抑制，可能與CD4+CD25high Treg細胞的免疫抑制作用導(dǎo)致肝細胞癌患者抗腫瘤免疫應(yīng)答受到抑制有關(guān)，使機體無法對現(xiàn)有腫瘤細胞進行有效清除。

參考文獻：

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[3]Roychoudhuri R，Eil R L，Restifo N P.The interplay of effector and regulatory T cells in cancer[J].Current Opinion in Immunology，2015， 33：101.

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編輯/羅茗柯