TK1聯(lián)合CEA、CA199在胃腫瘤患者中的應(yīng)用

張 華

合肥市第二人民醫(yī)院檢驗科 安徽省合肥市 230011

TK1聯(lián)合CEA、CA199在胃腫瘤患者中的應(yīng)用

張 華

合肥市第二人民醫(yī)院檢驗科 安徽省合肥市 230011

目的：初步探討細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（TK1）聯(lián)合CEA、CA199在胃腫瘤患者中的應(yīng)用。方法：使用酶免疫點印跡化學(xué)發(fā)光法檢測54例胃癌患者、11例胃良性腫瘤患者、35例胃炎患者及30例健康體檢人員TK1項目并使用電化學(xué)發(fā)光方法檢測54例胃癌患者CEA、CA199項目。結(jié)果：胃癌患者、胃良性腫瘤患者、胃炎患者及體檢人員TK1的均值分別為2.71、1.66、1.46、0.61pmol/L，其中位值分別為1.68、1.41、1.34、0.56pmol/L，各組間差異顯著（p＜0.05），其中，胃癌患者中TK1的陽性率最高（48.15%），且TK1+CEA+CA199聯(lián)合檢測能提高陽性率到64.81%。結(jié)論：血清TK1水平檢測可用于體檢、監(jiān)測和隨訪腫瘤患者，與CEA、CA199聯(lián)合檢測有臨床診斷價值。

胸苷激酶1（TK1）；腫瘤；預(yù)后

腫瘤發(fā)病率逐年增加，胃癌為常見的惡性腫瘤之一，在我國為第二大常見腫瘤。目前胃癌的診斷主要依靠胃鏡及組織病理檢查，由于該檢查具有一定的創(chuàng)傷性，而難以普及成常規(guī)體檢。CEA、CA199為臨床常用的腫瘤標(biāo)志物，其在消化道腫瘤中的特異性相對較高，常用于體檢及胃腫瘤的輔助診斷。細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（TK1）是近期研究較多的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，在腫瘤早期篩查、療效監(jiān)控及預(yù)后評估中作用日趨明顯[1]。現(xiàn)將我院一段時間內(nèi)胃腫瘤患者血清TK1檢測結(jié)果與CEA結(jié)果聯(lián)合比較，為血清TK1在胃瘤患者中應(yīng)用提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月至2015年8月在我院消化科、普外科、腫瘤科就診的胃癌患者54人為胃癌組，其中男性46例，女性8例，年齡分布在40-80歲，均經(jīng)組織病理學(xué)確診。胃良性腫瘤組11人，其中男性3例，女性8例，年齡分布51-71歲。胃炎癥組35人，男性18例，女性17例，年齡分布25-67歲。正常體檢組30例，男性15例，女性15例，年齡分布在26-67歲。

1.2 TK1檢測

TK1檢測使用酶免疫點印跡化學(xué)發(fā)光法，TK1細(xì)胞周期分析試劑盒（24人份/盒，含三個濃度梯度校準(zhǔn)品）與CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀由深圳華瑞同康公司提供。樣本為清晨空腹靜脈血，3000r/ min離心5min取血清，-20℃保存?zhèn)溆谩⑿?zhǔn)品、待測血清3ul點樣于含有硝酸纖維素膜的模板上，室溫晾干，洗膜兩次，加封閉液室溫?fù)u晃封閉30min，加抗TK1-IgY抗體室溫?fù)u晃反應(yīng)120min，洗滌三次，加生物素化抗IgY二抗室溫?fù)u晃反應(yīng)40min，洗滌三次，加SA-HRP室溫?fù)u晃反應(yīng)60min，洗滌三次，加ECL發(fā)光試劑，反應(yīng)完全后進(jìn)入化學(xué)發(fā)光成像分析儀成像，應(yīng)用校準(zhǔn)品TK1濃度及相應(yīng)灰度測量值生成標(biāo)準(zhǔn)曲線同時計算回歸方程，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測出待測樣本TK1濃度，正常人血清內(nèi)TK1含量小于2.0 pmol /L，若檢測值大于2.0pmol/L預(yù)示存在細(xì)胞增殖性疾病的風(fēng)險。

1.3 CEA、CA199檢測

CEA、CA199檢測試劑盒、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)曲線均由羅氏提供，檢測儀器為羅氏COBAS601。檢測系統(tǒng)為封閉體系，儀器性能經(jīng)過驗證，檢測方法按照EP9-A文件經(jīng)過比對，該檢測系統(tǒng)參加全國衛(wèi)生部室間質(zhì)評并成績優(yōu)秀，其結(jié)果可靠。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，獨立的多組間樣本分布比較應(yīng)用Kruskal-Wallis H檢驗，陽性率的比較采用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 胃癌、良性腫瘤、胃炎及正常體檢組TK1結(jié)果比較

各組間TK1結(jié)果比較見表1，其中胃癌組的均值及中位值均高于其他各組，與其他各組比較差異明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。

2.2 TK1與CEA 、CA199聯(lián)合檢查在胃癌中陽性率的比較

在54名胃癌患者中，應(yīng)用TK1檢查，陽性患者26例，陽性率為48.15%；應(yīng)用CEA檢查發(fā)現(xiàn)陽性患者11例，陽性率為20.37%；應(yīng)用CA199檢查，陽性患者12例，陽性率為22.22%；應(yīng)用TK1+CEA檢查發(fā)現(xiàn)陽性患者30例，陽性率提高到55.56%；應(yīng)用TK1+CA199檢查發(fā)現(xiàn)陽性患者32例，陽性率提高到59.26%；而應(yīng)用TK1+CEA+CA199聯(lián)合檢查發(fā)現(xiàn)陽性患者35例，陽性率提高到64.81%。各組間陽性率比較差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義。（X2=46.32，v=3，p=0.000，p<0.05）

表1：97例TK1陽性患者TK1值在不同腫瘤間分布（pmol/L）

3 討論

TK是細(xì)胞內(nèi)嘧啶代謝循環(huán)中關(guān)鍵酶之一，主要作用是在ATP作為供體和鎂離子（Mg2+）參與下，經(jīng)過嘧啶補(bǔ)救途徑催化dTdR轉(zhuǎn)化為dTMP，為DNA的合成提供原料[2,3]。TK有兩種同工酶，利用離子交換色譜法可將TK分離為兩種同工酶，分別命名為細(xì)胞質(zhì)TK（TK1）和線粒體TK（TK2）[4]，后者存在于細(xì)胞線粒體中，與細(xì)胞周期無關(guān)，僅在靜止的哺乳動物細(xì)胞中檢測到。而TK1存在于細(xì)胞質(zhì)中，參與細(xì)胞的生長、分裂等生理活動。作為DNA合成和損失修復(fù)的關(guān)鍵酶之一，TK1的濃度與細(xì)胞DNA合成增加伴各種核苷酸增加、細(xì)胞增殖狀態(tài)緊密相關(guān)。TK1在非增殖細(xì)胞核健康人血清中含量極微或檢測不到，但在細(xì)胞異常增殖過程中，它的活性在細(xì)胞G1后期及S期開始快速增長，在S后期達(dá)到頂峰，在G2期迅速降低，在此過程中，TK1活性的改變與其mRNA水平變化正相關(guān)[5,6]。因此高水平的TK1反映著細(xì)胞活躍的增殖程度，是評估細(xì)胞增殖度的重要標(biāo)記之一。癌癥最基本的特征是由癌基因突變所致的細(xì)胞生長失控，引起異常增殖。腫瘤的惡性行為和腫瘤細(xì)胞快速增殖密切相關(guān)。

由于惡性腫瘤其惡性行為和DNA的快速合成密切相關(guān)，為了滿足其異常快速增殖的需要，患者體內(nèi)的TK1水平在腫瘤細(xì)胞增殖的S期經(jīng)嘧啶補(bǔ)救途徑大量合成。在本文中，我們發(fā)現(xiàn)胃癌患者的TK1均值和中位值均明顯高于良性腫瘤、炎癥及正常體檢對照組（p<0.05），并在胃癌組內(nèi)出現(xiàn)顯著性增高的異常值（32.53），后經(jīng)臨床發(fā)現(xiàn)該患者為胃癌伴多器官轉(zhuǎn)移。而良性腫瘤與炎癥之間差異不明顯（p>0.05），但仍然高于正常體檢組，雖TK1的增高水平反應(yīng)細(xì)胞的增殖程度，良性腫瘤與炎癥反應(yīng)性增生使細(xì)胞出現(xiàn)一定程度的增殖，但這種增殖遠(yuǎn)不及惡性腫瘤的增殖程度。在與CEA、CA199聯(lián)合應(yīng)用時發(fā)現(xiàn)，TK1的陽性率（48.15%）明顯高于CEA（20.37%）和CA199（22.22%），TK1如果與CEA、CA199中一項聯(lián)合應(yīng)用可將陽性率提高到55%左右，如果三項聯(lián)合應(yīng)用則可提高到65%左右。由此可見，TK1檢測可明顯將惡性腫瘤患者與正常人區(qū)別開了，而且，相對于胃癌具有更高的陽性率。由于TK1的檢測多采用化學(xué)發(fā)光法，標(biāo)本來源為外周血清，與腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199聯(lián)合應(yīng)用，可提高陽性率，還可減少患者負(fù)擔(dān)。總之，TK1是具有特殊價值的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，但可用于體檢、監(jiān)測和隨訪腫瘤患者，TK1與CEA、CA199聯(lián)合檢測對胃癌診斷一定臨床實用價值。

[1]劉秀菊,周際,李遠(yuǎn),等.一種新的腫瘤生長相關(guān)生物標(biāo)志物胸苷激酶1臨床應(yīng)用進(jìn)展.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2011,25(01):123-126.

[2]邢曉光.血清胸苷激酶1水平變化對惡性腫瘤的診斷價值.山東醫(yī)藥,2012,52(23):83-84.

[3]Bolayirli M,Papila C,Korkmaz GG, et al.Serum thymidine kinase 1 activity in solid tumor (breast and colorectal cancer) patients treated with adjuvant chemotherapy.J Clin Lab Anal, 2013,27(03):220-226.

[4]Zhang J,Jia Q,Zou S,et al. Thymidine kinase 1:A proliferation marker for determining prognosis and monitoring the surgical outcome of primary bladder carcinoma patients.Oncol Rep, 2006,15(02):455-461.

[5]Huang S,Lin J,Guo N,et al. Elevated serum thymidine kinase 1 predicts risk of pre/early cancerous progression.Asian Pac J Cancer Prev,2011,12(02):497-505.

[6]Chen ZH,Huang SQ,Wang Y,et al. Serological thymidine kinase 1 is a biomarker for early detection of tumours--a health screening study on 35,365 people,using a sensitive chemiluminescent dot blot assay.Sensors(Basel), 2011,11(12):11064-11080.

張華(1970-)，女，合肥市第二人民醫(yī)院檢驗科主管檢驗師。