大果山楂黃酮提取的方法研究

陳兵兵 梁昌祥 吳桂容

賀州學院食品與生物工程學院 廣西壯族自治區賀州市 542899

大果山楂黃酮提取的方法研究

陳兵兵 梁昌祥 吳桂容

賀州學院食品與生物工程學院 廣西壯族自治區賀州市 542899

據調查，在成熟的大果山楂果實里面，含有十分豐富的黃酮類物質。其有著天然無毒與多種生物活性等優點。在大果山楂黃酮的提取方面，不同的方法對結果有著較大影響。通過乙醇回流法與超聲法對大果山楂黃酮提取結果的對比分析，得到最有效的提取工藝及各類參數。結果顯示，超聲法是提取大果山楂中黃酮的最佳方法，其具有操作簡單與純度高的優勢。

大果山楂；黃酮；提取

1 引言

大果山楂在植物當中，被劃歸為薔薇科的一類。適應我國南北種植。山楂是我國原有和特有的栽培果樹，其果實營養豐富，食用與藥用價值都很高，已被國家衛生部確定為藥食兩用食品。在2015年版的《中國藥典》中，再一次將大果山楂收錄。它有著消食健胃與活血化瘀的良好療效，臨床常用于消化不良與產后腹痛等癥狀的緩解。其主要功能除了消食健胃與活血化瘀，還包括腹痛腹脹、腸胃不順、經閉、心腹疼痛以及高血脂癥等癥狀的治療[1]。近些年來，大果山楂在臨床上，也廣泛被用于治療高血壓、冠心病以及高脂血癥等一系列的心血管疾病，并取得了良好的療效。其藥理研究中也顯示，大果山楂中的關鍵成分即黃酮。

相關的統計顯示，2016年全國大果山楂種植面積突破600萬畝，總產量突破60萬噸。但是大果山楂的食用與藥用量僅占到總產量的一成。怎樣改善大果山楂的利用率，是大果山楂加工業與醫藥領域發展面臨的重點問題。提取大果山楂中的黃酮，同時對剩余物進行有效利用，是解決該問題的科學手段[2]。

本文通過乙醇回流提取法與超聲法這兩類不同的方法，研究了這兩種不同方法對大果山楂黃酮提取效率的結果。借助于比色法測定提取的黃酮含量，最后得出大果山楂黃酮提取的最佳方法與工藝條件[3]。

2 原料與方法

2.1 材料與試劑

大果山楂：選擇成熟度良好均勻，外觀圓潤，沒有病蟲害的廣西賀州地區的大果山植實施黃酮提取實驗分析。

試劑：主要包括福林酚、無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水碳酸鈉、葡萄糖、鹽酸、鋅粉、醋酸鉛、三氯化鐵、蘆丁標準品等等。

2.2 實驗方法

2.2.1 材料的預處理

大果山楂進行采摘后，對其清洗，再預冷并分級別篩選。歸類后，盛放在聚乙稀薄膜保鮮袋中。將袋口進行折疊，放在冰箱，以2-4℃進行冷藏。

2.2.2 選用儀器及設備

表1：提取溫度因素

表2：料液比因素

表3：提取時間因素

表4：超聲波頻率因素

表5：超聲波作用時間因素

表6：物料比因素

紫外分光光度計，由上海天翔光學儀器有限公司生產。索氏提取器，由上海爭巧科學儀器有限公司生產。DWF-100植物粉碎機，由青州市新航機械設備有限公司生產。DT5-1離心機，由北京時代北利離心機有限公司生產。YP100電子天平，由上海四藍儀器設備股份有限公司生產。

2.2.3 提取液的制備方法

用電子天平稱取5g已經粉碎去核的大果山楂，放置平底燒瓶內。依據一定的料液比加入配制的提取溶劑，在預先設定的提取溫度與時間下，展開水浴回流提取實驗。對提取液進行真空抽濾，進行前后兩次提取后，進行合并。濾液在50℃以下工況，通過旋轉蒸發器濃縮至小于25mL，倒入100mL容量瓶中，再借助于提取劑定容至指定刻度[4]。

2.2.4 標準曲線的制作方法

依次精密吸取蘆丁對照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，即含有蘆丁0、150、300、450、600、750μg，倒入12.5ml比色管內。加入30%的乙醇，直到其容量達到5ml。再加入5%濃度的亞硝酸鈉溶液0.30ml，經過搖勻后放置5分鐘。接著再添加10%濃度的硝酸鋁溶液0.3ml，同樣經過搖勻后放置6分鐘。接著加入1.0mol/LNaOH的溶液2.00ml，通過30%的乙醇定容至指定刻度，進行搖勻處理，再放置15分鐘，通過空白管調零[5]。搖勻后，借助于1cm的比色杯，在510nm波長處對吸光度進行測定，總計3次，算出其平均值，再進行回歸處理。得到標準曲線的回歸方程與相關系數，即Y=7.19×10-4X-3.31×10-2，得出 r=0.9879。得到蘆丁含量（μg）和吸光度的標準曲線。

2.3 結果與分析

2.3.1 乙醇回流提取法

（1）提取條件。首先將大果山楂粉碎過20目篩，在105℃環境下干燥2小時，取出粉末1g，放置在回流提取器內。回流提取前后共計3次，再對提取液進行合并，回收乙醇，得到大果山楂黃酮提取液。將容量定至100ml，測出其吸光度。

依次改變提取溫度、料液比以及提取時間等參數，進行對比分析。

（2）提取溫度。實驗過程中，溫度高低，反映了分子無規則運動的劇烈狀況如何。通過對比分析得知，伴隨著溫度的提升，黃酮在乙醇溶液里面的溶解度也得到了增加，由此提取率逐漸提高。但是假如溫度過高，那么雜質也會大量溶出，使提取效率受到一定的影響。見表1。

（3）料液比。從實驗中得知，伴隨著料液比的增加，提取率也相應增加。但是如果料液比，即質量與體積的比值大于1:9時，那么提取率的增速放緩。這時再增加液料比時，那么提取率的變化不明顯。黃酮的提取此時充分。見表2。

（4）提取時間。由表3可見，在其它條件均相同的基礎上，延長提取時間，但黃酮的提取率并非始終增高。2小時后，提取率還有著下降的狀況。這也許是黃酮提取物受到了氧化的影響。所以將實驗的時間安排在2小時比較適宜。

2.3.2 超聲提取法

（1）超聲波頻率。由表4可見，隨著超聲波頻率的增大，提取作用得到增強，提取率也隨之增加。但也不是始終在增加。當超聲波頻率超過40kHz時，提取率出現了下降趨勢。

（2）超聲波作用時間。由表5可見，伴隨著超聲波作用時間的不斷增加，黃酮提取率也呈現出正態分布的特征。一旦時間超過15分鐘，提取率發生了下降的現象。由于超聲波作用時間增加，黃酮提取物也將受到氧化的影響。其最佳時間是15分鐘。

（3）物料比。通過對比分析，得知物料比對黃酮提取含量的影響，見表6所示。

通常從理論上來說，料液比越大，那么提取率也就相應越大。如果料液比超過40，那么提取率將變得穩定，即相應的溶劑已經把有效的成分溶解出去。

3 結論

本文通過乙醇回流提取法與超聲波法的對比分析，得出大果山楂黃酮提取的最佳工藝方法。

（1）材料預處理，包括大果山楂去核、干燥、粉碎、添加乙醇溶液、過濾、濃縮、提純、冷藏等。

（2）標準曲線制作方法方面，首先取干燥大果山楂粉末2.5g，添加70%的乙醇100ml，進行前后三次超聲波震蕩，每次15分鐘，并間隔15后進行下一次。接著再合并提取液，對乙醇進行回收處理，最終得到大果山楂黃酮的提取液。將其容量定至100ml，測出其吸光度。

（3）工藝參數設定方面：需要70%濃度的乙醇。超聲波頻率設定為40kHz最佳，作用時間應保持15分鐘。料液比設定為1:40。

通過本文的分析可見，針對大果山楂黃酮提取，超聲波法典型的優勢是步驟簡單，易于操作。僅需少量的有機溶劑，同時選擇的試劑對人體無毒無害，所以適用于大批量生產。

[1]郭國華.臨床中藥辭典[M].長沙:湖南科學技術出版社,2008.

[2]張黎明,楊鑫,曹宇等.山楂葉總黃酮的水浸提和純化工藝研究[J].食品研究與開發,2010,31(01):12-16.

[3]汪春軍,陳紅艷,宋可珂.植物黃酮類化合物的提取分離研究進展[J].廣東化工,2011,6(39):91-92.

[4]宋卓悅.東北山里紅黃酮BBD優化高效提取及季節動態研究[D].哈爾濱:東北林業大學,2015.

[5]劉璐,付明哲,王俠等.植物黃酮類化合物提取及測定方法研究進展[J].動物醫學進展,2011,32(06):151-155.

陳兵兵（1968-），女，廣西壯族自治區浦北縣人。現為賀州學院食品與生物工程學院高級講師，醫學學士學位，從事保健品、食品開發方面的研究。

賀州學院科研項目2014YBZK16。