抗體Fab片段的表達與應用研究進展

肖凌宇，李巧玲，倪孟祥，方宏清

1.中國藥科大學 生命科學與技術學院，江蘇 南京 210009；

2.安徽大學 健康科學研究院，安徽 合肥 230000

抗體Fab片段的表達與應用研究進展

肖凌宇1，2，李巧玲2，倪孟祥1，方宏清2

1.中國藥科大學 生命科學與技術學院，江蘇 南京 210009；

2.安徽大學 健康科學研究院，安徽 合肥 230000

目前，抗體Fab片段在癌癥、病毒感染和炎癥等疾病的診斷治療中越發重要，占抗體市場份額逐漸上升。相對于全長抗體，抗體Fab片段具有無須N糖基化、可用原核系統進行表達、分子小、免疫原性低等優勢，使之成為研究的熱點。大腸桿菌由于遺傳背景清晰、使用廣泛、生產成本低，因而常作為原核表達宿主。本文綜述了大腸桿菌系統抗體Fab片段產量低的解決方法、Fab抗體的臨床應用，并結合當前研究現狀展望了Fab抗體生產的研究方向。

抗體Fab片段；大腸桿菌；優化表達；Fab抗體藥物

20世紀70年代，DNA重組技術初步成熟。1982年，美國FDA通過了在大腸桿菌中重組表達的商業化人胰島素，這是第一個在大腸桿菌中生產的商業化生物藥物。隨著抗性標記的發展，用原核細胞生產重組蛋白變得更為可行，FDA也通過了更多的生物單體。到2014年，生物藥物市場達1610.5億美元，已有200余種蛋白質藥物，預計到2020年將達到2871.4億美元，所升高的市值多由迅速發展的單克隆抗體和抗體片段所帶來。

抗體片段主要包括Fab類抗體、單鏈抗體（scFV）、納米抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體。Fab類抗體也稱為抗原結合片段（fragment antigen binding，Fab），由于其功能多樣、結構完整，是最早開始研發并且也是研發得最為徹底的抗體片段。

抗體Fab片段的主要優勢之一是適合在大腸桿菌中表達，而IgG全長抗體由于分子大且其CH2區須糖基化修飾而主要用哺乳動物細胞來表達。大腸桿菌表達抗體Fab片段不僅成本低、周期短，而且有利于DNA重組技術高效率地引入突變，通過各種方法優化，能在短時間內提高抗體Fab片段的表達量、溶解度和穩定性，且與相應的scFv相比具有更高的抗體親和力和穩定性。但抗體Fab片段在大腸桿菌中的表達量低是制約其大規模生產和應用的主要因素，通過對宿主細胞、表達載體、表達條件和純化條件等進行改造與優化，有可能獲得基因工程抗體的高效表達。

1 Fab抗體的結構及特點

抗體Fab片段是IgG分子的抗原結合片段，是由木瓜蛋白酶對IgG進行酶解得到，由輕鏈（VLCL）和重鏈Fd段（VH-CH1）組成，相對分子質量約為50 000，輕鏈和重鏈之間的相互作用以及二硫鍵使得Fab分子具有穩定的雙鏈結構。

Fab具有良好的結構完整性和功能多樣性，而且適合在大腸桿菌中表達，周期短，成本低，因此是定向改造首選的分子形式。而全長的IgG由于有Fc段，分子大，需要在哺乳動物細胞中表達進行糖基化修飾，表達周期長，成本高，且全長IgG由于分子太大而不能滲入某些組織[1]。與全長IgG相比，Fab片段有許多特性，如沒有Fc段、合成時不需要進行糖基化修飾、免疫原性低、不會出現細胞介導的細胞毒性作用、結合力高、半衰期短、適合在大腸桿菌和酵母菌中表達、周期短[2]。Fab類抗體在治療眼科疾病、自身免疫疾病和癌癥上都有很好的臨床效果，因此Fab類抗體的工程研究顯得尤為重要。

2 Fab片段在大腸桿菌中的生產及優化措施

抗體Fab片段主要獲取方式為化學法、酶法和基因工程法。化學法是用化學試劑作用于重鏈間二硫鍵近N端處，打開二硫鍵，獲得2個相同的單價抗原結合片段。用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和無花果蛋白酶酶切IgG全長抗體，也是一種常用方法。基因工程法獲取功能性抗體Fab片段主要通過大腸桿菌系統、畢赤酵母系統和昆蟲系統進行表達，其中最常用的是大腸桿菌系統[3]。但是，抗體Fab片段在大腸桿菌系統中表達量低是制約其大規模生產的主要因素，因此我們著重從大腸桿菌生產優化措施進行論述，主要包括表達宿主、表達載體、培養條件的選擇優化。

2.1 宿主菌的優化

由于Fab片段的結構穩定性是由重鏈Fd段和完整輕鏈間的二硫鍵決定的，而二硫鍵的形成需要氧化性環境，因此在還原性環境的胞質內很難獲得功能性抗體片段，需用信號肽將輕鏈和重鏈Fd段分別引導到周質腔中進行正確折疊，因此周質腔環境就顯得尤為重要。另外，改造菌株、共表達催化劑、在胞質內形成氧化環境，也是一種可選措施[4]。

表達宿主的差異對Fab總表達量的影響很顯著，主要在于宿主菌中某些蛋白酶尤其是周質蛋白酶或外膜蛋白相關基因。宿主本身的蛋白酶對外源蛋白有降解作用，外膜蛋白相關基因缺失能夠將Fab片段更多地釋放到培養基中，更有利于純化，在生產中有實際應用價值。

有研究表明，硫氧還蛋白酶（TrxB）及谷胱甘肽還原酶（Gor）缺乏的大腸桿菌菌株更易提供一個Fab分子正確折疊表達的氧化環境，有利于二硫鍵的產生，使蛋白分泌表達，提高蛋白活性。FA113菌株[5]是Novagen公司改造的相關工程菌株，在普通搖瓶中Fab的產量就能達到10～30 mg/ L。而Levy等[6]使用的DE3菌株是Lon周質蛋白酶和OmpT外膜蛋白酶缺陷的大腸桿菌菌株，表達抗體Fab片段的產量比FA113更高。更為具體的研究表明，Fab片段中輕鏈的降解與degp、prc基因有關，degp和prc編碼的蛋白酶可降解未折疊的輕鏈蛋白。敲除輕鏈裂解基因degp、pcr，并引入prc的抑制基因spr突變，能夠最大限度地抑制輕鏈的裂解，而且對宿主生長不會有影響，在高密度表達抗體Fab片段時表達量能夠達到10 000 mg/L，因此是提高目的蛋白Fab產量的有效策略[2]。但很少有人在用作底盤生物的最小基因組的大腸桿菌中表達過Fab抗體。朱美勤等[7]以前的研究結果表明不同程度的基因組刪減菌在耐酸性和番茄紅素的表達能力上的確有一些差異，因此，他們致力于尋找最適程度的刪減菌，并在此基礎上敲除相關的周質蛋白酶，以更大程度地提高重組蛋白抗體Fab片段的表達量。

Chen等[8]發現敲除大腸桿菌桿中mrcA、mrcB、pal、lpp基因中的1個或2個，能夠提高目的蛋白分泌到培養基中的水平。在相同培養條件下，mrcA和lpp同時敲除比不敲除的DE3大腸桿菌分泌表達高88.9%，只敲除lpp的比不敲除的表達高71.1%，表明lpp外膜蛋白基因對于目的蛋白的滲漏表達起著至關重要的作用。在編碼區或啟動子處引入lpp突變，能夠很好地將周質中的Fab片段分泌到培養基中[9]。用omp、tol、excD、excC、lpp、env和lky的組合突變，全長抗體能夠釋放到培養基中[10]。過表達細菌素釋放蛋白基因kil會引發細胞裂解，細菌釋放蛋白BRP能在細胞外膜形成可滲透性區域，目的蛋白能分泌進入培養基[11]。但這些通過改造外膜而使目的蛋白分泌到培養基中的改造菌株的穩定性不好，無法進行高密度培養，因此要進行工業化大生產還須深入研究。

2.2 表達載體的選擇

選擇表達載體時要從啟動子、復制子、選擇性標簽和融合蛋白表達序列等方面出發，須選擇合適的表達元件組合進行Fab片段的表達。

2.2.1 復制子的選擇 復制子的選擇在于拷貝數。一般情況下可以認為高拷貝數的質粒意味著更高的蛋白表達量。但是，大量質粒給大腸桿菌更多的代謝壓力，繼而降低大腸桿菌的生長繁殖速率，目的蛋白的表達量也因此減少。因此拷貝數高并不代表著高的蛋白表達[12]。

常用的載體是pET系列，帶有pMB1起始位點（由ColE1衍生，每個細胞15～60個拷貝[13]）；pUC系列載體中包含改造的pMB1起始位點，高拷貝數為500～700個[14]；pQE載體含有野生型ColE1起始位點，約15～20個拷貝。這些載體都屬于同一類不兼容載體，相互競爭的復制機制，不能在同一個細胞中同時增殖[15]。2個質粒一同表達的雙表達載體，一般p15A為起始位點（pACYC和pBAD系列質粒中含有）是能夠兼容的[16]。雖不多見，3個載體共同表達能夠通過pSC101載體實現，這個質粒的拷貝數相對較低（每個細胞小于5個拷貝）。低拷貝數的質粒有利于克隆基因的高劑量或該表達產物對細胞生長有害的情況[17]。或者，Duet載體的使用通過將2個基因克隆在同一個質粒上簡化了共同表達過程。Duet質粒有2個多克隆位點，每個位點都含有T7啟動子、lac控制子和一個核糖體結合位點。通過結合不同的兼容性Duet載體，能夠實現8個重組蛋白在4個表達質粒中的同時表達。

2.2.2 啟動子的選擇 在蛋白表達時，需要一個較強的轉錄啟動子來控制高水平的表達，同時要盡量避免基礎表達。目前，大腸桿菌中使用較多的有lac啟動子、tac啟動子、trc啟動子、T7啟動子。lac啟動子的轉錄受CAP正調控和lacI負調控，可由乳糖類似物異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導激活轉錄。trc啟動子是trp和lac的拼合啟動子，比trp和lac啟動子具有更強的轉錄效率和啟動子特性。現實中為了能嚴謹地表達調控產物，常選擇lac/tac/trc復合表達系統的菌株。以上啟動子均是由IPTG誘導激活的。

T7表達系統由于其強大的轉錄效率，成為大腸桿菌表達系統的主流。T7啟動子是由T7 RNA聚合酶識別啟動的，高活性的T7 RNA聚合酶可由另一個質粒表達，大多數情況是整合在宿主菌基因組上。IPTG誘導T7 RNA聚合酶的表達，因此可通過控制誘導條件繼而控制目的蛋白的表達量，以避免目的蛋白表達過多過快，堵塞蛋白分泌通道，影響最終的分泌表達水平[18]。

還有溫度敏感型啟動系統，如突變的λcI抑制蛋白λcI857，該抑制蛋白在37℃以上非常不穩定。在工業生產中，通常在28～30℃進行高密度培養，隨后將溫度提高到40～42℃，抑制蛋白失效，λcI啟動子激活，大量表達目的蛋白[19]。另一個溫度誘導型蛋白為冷激蛋白cspA，在15℃時進行誘導表達，能達到較高的可溶蛋白表達水平[20]。

對于Fab的生產表達，需要選擇的啟動子的強度應盡量與宿主細胞的轉運能力保持一致，否則表達過強會對宿主細胞產生不利影響，進而影響最終蛋白產量。

2.3 載體設計（目的基因序列）

目的基因序列是影響表達水平的關鍵因素，輕鏈和重鏈的位置順序不同，表達水平差異很大。經典的載體設計方式是基于同一個啟動子，加上輕重鏈各自的核糖體結合位點，在重鏈和輕鏈的N端都加上各自的信號肽序列以將重鏈、輕鏈分別引導入周質腔進行正確折疊。

信號肽的選擇主要基于翻譯起始區（TIR）的強度。TIR的核苷酸序列與信號肽序列重疊，因此優化信號肽能夠改善TIR的強度，提高目的蛋白的產量。常用的信號肽為果膠裂解酶B（pelB）和主要外膜蛋白A（ompA）、堿性磷酸酶（phoA）、STII、DsbA、PhoA、MalE等。在大腸桿菌中表達血管內皮生長因子（VEGF165）、神經生長因子（NFG）、人轉移生長因子β1（TGF-β1）分泌型蛋白時，表現出相對TIR強度較低時，目的蛋白表達量越高[21]。在TIR強度一致時，信號肽中H區疏水性的強度越高，越能將分泌相對受限的重鏈引導進入周質腔，進而提高表達水平。因為H區疏水性提高能夠改變抗體的分泌途徑，更傾向于共翻譯轉運途徑，阻止HC在細胞質中的聚集[22]。

因此，選擇合適的信號肽對高水平分泌表達非常重要。有學者研究輕重鏈及信號肽的順序問題，發現在3種排列組合中，pelB+LC+ompA+HC的構建形式時周質表達量最高[23]。我們增加了排列組合方式，發現最優組合為pelB+HC+pelB+LC，并且在其他排列順序基礎上發現ompA信號肽突變能夠帶來更高的表達量（結果尚未發表），這表明不同的目的蛋白序列所對應的表達序列不同。

Humphreys等[24]構建了雙啟動子的噬菌體篩選表達載體，在輕重鏈之前都有一個tac啟動子，并且第2個tac啟動子是經過改造的，以平衡重輕鏈的表達。Leonard等[25]在2個相兼容的載體中分別表達輕鏈和重鏈，在抗性壓力下在同一個細胞中進行表達和組裝。

除了用信號肽把重輕鏈引導入周質，還有一些可在胞質中表達的方法。由于細胞質中為還原環境，無法合成二硫鍵，因此都是分泌到周質腔中進行正確折疊，可采取與目的蛋白載體共表達氧化型催化劑的措施，在胞質中形成氧化環境，胞內表達水平要遠高于分泌表達，在13種小分子抗體中都有相對高的表達水平[4]。

在載體上適當地設計融合共表達標簽更有利于Fab的表達、檢測和純化。在表達scFv小分子抗體時，加上MBP[26]和SUMO[27]標簽能夠提高目的蛋白的可溶性表達。Czerwinski等[28]在表達抗體Fab片段時，在pComb3H載體上同時表達生物素羧基載體蛋白（BCCP），能夠結合生物素受體又能識別人血型糖蛋白A，因此可以用親和素標記的熒光素或酶代替二抗，檢測生物素化的Fab，同時純化時也可用親和素柱。

2.4 分子伴侶的選擇

由于強啟動子的作用，宿主菌本身的細胞資源都用于表達目的蛋白，目的蛋白表達水平往往較高，宿主菌自身的分子伴侶無法滿足肽鏈的正確折疊，因此會形成包涵體。引入外源分子伴侶以輔助目的蛋白的正確折疊，是一種提高活性蛋白產量增加活性蛋白的思路。

Lobstein等[29]發現，將二硫鍵異構酶DsbC片段插入trxB gor敲除的突變宿主菌的染色體，能夠輔助目的蛋白Fab片段在胞質中的高效折疊。除了二硫鍵異構酶因DsbC，二硫鍵氧化還原酶DsbA及具有分子伴侶活性的肽基脯氨酰順反異構酶FkpA和SurA都有促進目的蛋白分子正確折疊的作用。Levy等[30]比較了不同分子伴侶對目的蛋白表達的影響，證明Skp比GroEL/ES、DnaK/J和DsbC的輔助活性更大，能達到最大產量0.8 mg Fab/（L·D600nm），然而DsbC在其他研究中被證明為輔助活性最大的分子伴侶，因此可以推測，每個目的蛋白有其最適合的共表達分子伴侶，需要通過實驗驗證。Martin等[31]構建了輔助質粒pTUM4，其中帶有DsbC、DsbA、FkpA和SurA這4種能輔助目的蛋白正確折疊的分子伴侶，結果表明這4種分子伴侶的共同過表達不僅能提高重組蛋白的產量，還能提高細胞穩定性。

2.5 培養條件的優化

大腸桿菌生產出的Fab抗體其分泌位置與培養條件有密切關系。特定的培養條件能夠使Fab分子更多分泌表達到上清中，可能是因為Fab分子在周質腔中的大量積累使菌體破裂，也可能是因為培養基或培養溫度的原因使大腸桿菌外膜的通透性增加。

2.5.1 培養溫度的選擇 低溫不僅能增加抗體Fab片段的表達量，還能提高蛋白的可溶性表達，由于低溫時培養基中的氧溶量會增加，避免厭氧菌體生長而產生對目的蛋白表達有抑制作用的乙酸的產生。另外，質粒穩定性也會隨著抗生素半衰期的延長而增加。較低溫度會使目的蛋白降解的相關酶活性降低，提高可溶蛋白的穩定性。低溫時，目的蛋白合成速率也減慢，向周質或培養基中的轉運速度也相應變小，不易阻塞通道，不會給細菌帶來太大的負擔[32]。3H6 Fab在大腸桿菌周質中分泌，37℃時胞外分泌率為40%，30℃時則高至70%，且總產量也有明顯提高[33]。

2.5.2 轉速的選擇 Ukkonen等[34]比較了不同宿主菌、培養基、培養轉速及通氧量的情況下Fab片段的總產量，發現不同轉速對Fab最終產量的影響較大。在同一種培養基中，150 r/min轉速時的胞外滲透率為75%，遠高于250 r/min時的2%～17%。而且他們也證明了低通氧量會促進Fab的胞外分泌。

2.5.3 培養基的選擇 抗體Fab片段生產過程中，培養基的成分對于可溶性表達有著重要的影響。有豐富金屬離子和鹽離子的緩沖溶液更有利于Fab表達，特別是可溶性表達。金屬離子能夠幫助輔助折疊的酶類形成二硫鍵，增加可溶蛋白的表達量[35]。如今用的較多的培養基有自動誘導培養基、分批補料葡萄糖培養基、甘油培養基，實驗證明培養相同的時間后，不管是細胞密度還是Fab產量，自動誘導培養基都有較大優勢[36]。

3 Fab抗體純化方法

除了構建較優載體提高Fab抗體的表達量，改進純化工藝提高純化效率也能提高Fab的產量。最常見的純化方法是在Fab目的基因的輕鏈或重鏈上加上6個組氨酸標簽，然后通過親和層析將目的蛋白固定到含有Fab抗抗體的吸附柱上，最后用洗脫液洗脫下來。蛋白A、蛋白G[37]、蛋白L[38]正是幾種這樣的吸附柱，但對IgG的吸附是特異的，而Fab片段缺少Fc段，蛋白A、G與IgG的Fc段結合，只與Fab的亞單位結合，因此不具有普遍性。蛋白L可與κ輕鏈可變區結合。也可在載體上插入親和素標簽（BCCP），純化時用親和素柱，簡單高效[23]。

Ashwini等[39]采用優化的一步純化法對目的蛋白Fab片段進行純化。首先用親硫層析除去大腸桿菌污染物，目的蛋白純化物會直接進入鎳親和柱中，最終純度可達99%。Nesbeth等[40]發現，共表達周質核酸酶和目的Fab片段能夠在細胞破碎后自動降解大腸桿菌基因組，從而減少基因組污染及原料的黏稠度，簡化后期純化流程。在共表達時，高密度發酵培養后，產量可達0.7 g/L，遠高于Fab片段單獨表達，而且產量達到最高點時比單獨表達提前8～10 h，大大節約了時間成本。

4 Fab抗體片段的臨床應用

在一些臨床應用中，抗體片段比完整的抗體更加有優越性。其中一個優越性是片段抗體比完整抗體分子小，能夠進入全長抗體進不去的組織中發揮治療作用以及進行免疫組織化學染色。抗體片段比常規抗體更小，通常沒有被糖基化，可以使它們的產物在原核表達系統中表達，從而節省時間和資金消耗。然而，缺少Fc結構域的片段在體內比常規抗體降解速度快，不會激發Fc介導的細胞毒性作用，而且由于減少了抗體與Fc受體的非特異性結合，對免疫組化和其他檢測更有利。但同時也是因為缺少Fc域，比全長抗體降解速度快，半衰期只有2～3 h，有研究將Fab聚乙二醇化，能夠延長其半衰期。

隨著對Fab片段研究的深入，在預防、診斷和治療領域有了廣泛應用。有些Fab抗體藥物已通過FDA審查進入市場，有些仍處于臨床試驗階段。以下按照Fab治療疾病的種類分類介紹。

4.1 自身免疫性疾病

4.1.1 治療紅斑狼瘡 抗體片段CD7657是具有高親和力的聚乙二醇Fab'，屬抗人CD40L種類，能夠治療紅斑狼瘡，且避免了抗人CD40L IgG1抗體hu5c8會形成血栓的副作用。由于其缺少Fc段，不會激活血小板并保留有藥理活性[41]。該抗體片段已進入臨床階段，選取28名健康人員和17名狼瘡患者進行藥動學及安全性研究，結果證明治療效果良好，且輕度不良反應中均無血栓現象。

4.1.2 治療風濕性關節炎 賽妥珠單抗酯[42]是治療類風濕性關節炎的單抗，已獲FDA批準，與TNF-α受體結合。雖然臨床數據表明賽妥珠單抗在安全性和有效性上并不比其他抗TNF-α的抗體有更多優勢，但將抗TNF-αFab抗體片段PEG化后，半衰期從幾個小時延長到2周，而且與其他全長抗體不同，沒有Fc段，可以用原核系統表達，具有重大意義。

4.2 診斷腫瘤

美妥昔單抗I是成都華神集團高新技術產品，是已獲我國食品藥品監督管理總局（CFDA）批準用于治療肝癌的抗CD147F（ab）2。

抗體片段Fab LH-7是通過構建噬菌體抗體庫篩選出的對乳腺癌診斷具有高活性且預后良好的Fab抗體，對于乳腺癌的診斷和治療提供了新思路和前景[43]。

Tsumura等[44]通過研究大多數癌癥中都會分泌的TF因子，篩選了1849種單克隆抗體及1849種Fab單抗片段，以選出可用于癌癥診斷和治療的合適的抗體。結果表明1849-Fab比1849-IgG具有更快與抗原結合的能力，并有更快的清除率，不易發生持續高腫瘤累積。

阿斯利康公司的ZD-2767C是將抗癌胚抗原F（ab'）2融合到羧肽酶G2上，將其作為癌癥前體藥物治療中的抗體酶，現正進行Ⅰ期臨床試驗。

4.3 地高辛解毒劑

地高辛強心苷用量過多易致死，地高辛免疫Fab可用于治療慢性或急性地高辛中毒。最新的研究中使用地高辛免疫Fab成功治愈了椰子蟹中毒患者[45]。

4.4 眼科疾病

雷尼珠單抗（ranibizumab/Lucentis）由羅氏公司研制，2006年由FDA批準上市，用于治療黃斑病變。2012年8月，FDA批準了雷尼珠單抗注射劑的一個新適應證，即糖尿病性黃斑水腫導致的視力損害。

目前雷尼單抗適用于以下疾病：新生血管（濕）年齡相關黃斑退行性變性（AMD）、視網膜血管閉塞（RVO）后黃斑水腫、糖尿病黃斑水腫（DME）。它通過抑制人血管內皮生長因子A（VEGF-A）治療視網膜靜脈阻塞，表達于大腸桿菌周質腔，生產成本低。給藥方式為玻璃體注射，其快速穿透力和流動性能夠促進局部給藥，最高限度地發揮藥效，能夠改善患者視力，提高患者生活質量。貝伐珠單抗是IgG全長抗體，同樣能夠結合VEGF-A抗原，但在臨床試驗的靜脈注射中表現出嚴重的不良反應，局部給藥的Fab片段有顯著優勢。

5 結語

Fab抗體片段相比于全長抗體的優勢使其越發受到關注，應用范圍越來越廣，從治療腫瘤到免疫性疾病到眼科疾病，而作為示蹤診斷劑也有不錯的效果。

通過基因工程方法在大腸桿菌中進行表達，通過分子水平優化，如增加分子伴侶獲得正確折疊產物，改造基因缺失的宿主菌，或培養條件的優化，技術不斷成熟，能夠獲得表達產量高、生產成本低的Fab抗體藥物。不同程度的大腸桿菌基因組刪減菌在我們的實驗中表現出高于野生菌的表達水平，這也為后期基因工程改造生產Fab抗體提供了新思路。同時，其他替代性生產抗體的方法也已進入試驗階段，如用酵母、無細胞系統、轉基因植物系統表達Fab片段，將會比大腸桿菌系統成本更低，表達量更高。

小分子抗體是抗體藥物的未來發展趨勢，Fab抗體、scFv抗體、雙特異性抗體、三特異性抗體、mini抗體都表現出不同程度的抗原親和性。如Vandenbroucke等[46]將含有抗TNF的納米抗體基因整合到乳酸桿菌基因組，因此人們在飲用酸奶的同時就能治療腸炎。未來小分子抗體藥物的應用可能會優于全長抗體，在診斷治療方面會發揮越來越重要的作用。

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Advances in the Expression and Application of Antibody Fragment Fab

XIAO Ling-Yu1,2,LI Qiao-Ling2,NI Meng-Xiang1*,FANG Hong-Qing2*

1.School of Science&Technology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009;
2.School of Health Science Research,Anhui University,Hefei 230000;China

*Co-corresponding authors,NI Meng-Xiang,E-mail:nimx_2000@aliyun.com;FANG Hong-Qing,E-mail:fanghongqing@vip.sina.com

Currently,antibody fragment Fab play major role in treating a wide variety of human diseases including cancer,viral infection inflammation as well as immune disease.The market of Fab fragment is gradually growing.Compared to full-length antibodies,low molecular weight and low immunogenicity and alternative system of prokaryotic distribute the antibody fragment to hot spot of study.Escherichia coliis chosen to be the host bacteira because of its clear genetic background,extensive use and low production cost.In this review,we highlighted recent significant progress in the engineering ofE.colifor enhanced production of functional Fab by overcome some of the limitations of the bacterial production system.We also summraized some clinical application of Fab antibodies and proposed some orientation for future research on Fab engineering combined with current research progress.

antibody fragment Fab;Escherichia coli;optimized expression;Fab antibody drug

R392.1;Q78

A

1009-0002（2017）03-0397-08

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.031

2017-01-06

國家重點基礎研究發展計劃（2011CBA00800）

肖凌宇（1993-），女，碩士研究生，（E-mail）ylx1513@163.com

倪孟祥，（E-mail）nimx_2000@aliyun.com；方宏清，（E-mail）fanghongqing@vip.sina.com