臨床化學體外診斷試劑分析性能評估要點探討

崔濤，陳洪忠，張云娟

山東省食品藥品監督管理局 審評認證中心，山東 濟南 250000

臨床化學體外診斷試劑分析性能評估要點探討

崔濤，陳洪忠，張云娟

山東省食品藥品監督管理局 審評認證中心，山東 濟南 250000

根據國家及地方食品藥品監督部門的政策法規要求和作者從事體外診斷試劑產品審評工作的經驗，闡述臨床化學體外診斷試劑分析性能評估研究要點，為此類產品的研發和申報提供指導性建議。

臨床化學；檢測；體外診斷試劑

目前，臨床所應用的化學體外診斷試劑超過50種，按常規分類可將其大致分為酶類、基質類、血脂類、免疫類等，在臨床中廣泛用于測量肝臟功能、腎功能、心肌酶譜、風濕性疾病、心血管功能、體液電解質、免疫性疾病、血脂、血糖等，不管在健康人群體檢過程中，還是疾病患者的診斷過程中，這些臨床化學指標都是最基本也是最重要的檢測項目，而當今疾病的預防、診斷和治療也越來越多地依靠檢驗科室提供的檢測信息，這些信息將直接影響臨床醫生對疾病的正確診斷和治療。因此，做好體外診斷試劑注冊審評工作，嚴控試劑質量標準非常重要。在此，希望通過闡述臨床化學體外診斷試劑分析性能評估研究要點，為此類產品的研發和申報提供指導性建議。

1 主體

從審評角度來講，臨床化學體外診斷試劑所用方法學各異，種類繁多，不可一概而論，因此在本文中，主要探討的是符合GB/T 26124-2011臨床化學體外診斷試劑（盒）國家標準，即用于醫學實驗室進行臨床化學項目定量檢驗所使用的基于分光光度法原理的體外診斷試劑，并且在管理上屬于二類醫療器械的產品的分析性能評估要點分析。

在申請人提交的產品注冊資料中，分析性能評估資料是最重要的基礎資料，內容主要包括空白吸光度、靈敏度、精密度、批間差、線性范圍、準確度、干擾實驗、穩定性、參考區間等項目，各項目均應有具體的試驗數據、統計分析以及接受標準等詳細資料。產品性能評估將直接影響注冊產品的質量。

1.1 空白吸光度

空白吸光度是用指定的空白液加入試劑作為樣品測試時所得到的吸光度值，測試條件一般為37℃、測試主波長、1 cm光徑。在實際研發過程中，企業通常采用的空白液為蒸餾水或生理鹽水，還有很少企業采用含牛血清白蛋白的緩沖液。在臨床檢測過程中樣本一般為血清、血漿或尿液等，空白液具體選用哪種，須考慮不同試劑的反應特性和檢測樣本的基質效應具體而定。目前市場中產品空白吸光度的表示方法一般為“空白吸光度＞某數值”或“空白吸光度＜某數值”，在實際測量過程中空白吸光度一般在某個值附近波動，因此可能表示為“某數值＜空白吸光度＜某數值”的形式更為合適。

對于采用速率法的臨床化學體外診斷試劑，則應以空白吸光度變化率作為性能指標，即采用儀器啟動穩定后測定的吸光度和約5 min后的吸光度來計算試劑的空白吸光度變化率。

1.2 靈敏度

靈敏度為試劑測試n單位被測物時吸光度差值或吸光度變化率。在靈敏度測定評估過程中，最主要的問題是測試樣本的選擇，樣本的選擇應更貼近臨床實際應用，建議選用正常參考值附近樣本或病理高值樣本。

1.3 精密度（重復性）

在某些企業提交的申報資料中，容易把精密度和重復性相混淆，其實兩者之間是有區別的。重復性一般表示的是在相同測量條件下，對同一樣本進行連續多次測量所得結果之間的一致性；而精密度則更強調在規定條件下，相互獨立的測量結果間的一致程度，建議選用2個濃度的樣本，且2個濃度的樣本具有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標正常參考值附近樣本和病理高值樣本。

1.4 批間差

批間差主要用于評估不同批次產品之間性能的差異，通常做法為測試3個不同批次的試劑，每個批次測試10次，分別計算每批10次測定的均值，計算相對偏差。根據不同產品之間的差異，批間差指標一般為變異系數不大于10%，同樣應選用正常參考值附近樣本或病理高值樣本。

1.5 線性范圍

產品線性范圍的大小須根據生化試劑的反應特性和所檢測指標的臨床意義范圍來確定，如在整個臨床意義范圍之內試劑均具有良好的線性關系，r值一般須大于0.99，可考慮將線性范圍設定稍大于臨床意義范圍即可滿足臨床需要，若所申報臨床生化試劑具有良好線性關系的范圍比所測指標臨床意義范圍要小，則在臨床檢測時須考慮臨床樣本的稀釋問題，充分考慮樣本稀釋后基質效應的影響，須做相關研究，明確所選用的稀釋液類型及樣本最大可稀釋率。若某些檢測指標的臨床意義包含零點附近，可考慮將零點附近的偏差設為絕對偏差。同時建立試劑線性范圍所用的樣本盡可能選擇臨床樣本，必要時可選擇在高值臨床樣本中添加適量檢測物。

對于有推薦性行業標準的臨床生化體外診斷試劑盒，線性范圍不能低于其規定。

1.6 準確度

準確度是評價注冊產品質量高低的最重要指標，目前企業主要采用3種方法進行準確度的評價。

1.6.1 相對偏差 相對偏差是首選方法，此方法著重強調用于評價的作為檢測樣本的物質質量要高，一般為參考物質或有證參考物質對試劑（盒）產品進行測試，計算相對偏差，相對偏差一般不超過10%。若有國家標準品、參考品，則優先采用國家標準品、參考品進行檢測評價。在實際研發過程中，由于對參考物質或有證參考物質的含義有分歧，因此，除有國家標準品、參考品的產品外，建議考慮采用其他方法。

1.6.2 比對試驗 此方法即為采用臨床已上市的、普遍認為質量較好、具有相同方法學的同類產品作為比對試劑，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣本，對檢測結果進行數據處理、統計學分析，以此考察擬申報試劑與比對試劑之間的差異。如2種試劑之間偏倚很小或在企業允許的誤差范圍內，說明2個檢測系統對樣本的檢測結果基本相符，可證明擬申報試劑能夠滿足臨床檢測需要、符合申報產品質量要求。

需要注意的是，采用比對試驗方法在具體研發過程中應參照EP9-A2的方法進行。在EP9-A2方法中明確規定了所用樣本必須為臨床樣本，同時在其內容還包含了《方法學比較試驗中數據分布建議表》，表中列出了多種常見臨床生化試劑應滿足的試驗條件，即所測樣本的數據應能涵蓋整個臨床意義的范圍，并且能盡量均勻分布。如申報尿素檢測試劑盒，其樣本分布應為小于2.50 mmol/L的樣本10%、2.50～4.16 mmol/L之間的樣本40%、4.33～8.33mmol/L之間的樣本 20%、8.50～16.65 mmol/L之間的樣本20%、16.65 mmol/L以上樣本10%，總的樣本例數不能少于40例，同時對檢測結果進行合理的統計學分析。

1.6.3 回收試驗 即在人源樣本中加入一定體積的標準溶液或純品，進行檢測并計算回收率。如果臨床已上市產品數量較少，或者產品申報企業認為已上市產品質量不高，則可采用回收試驗。回收試驗需要注意的關鍵點為加入的標準溶液體積和臨床樣本的體積比，應保證加入的標準溶液不會產生明顯的基質效應，影響檢測結果的準確性。對于部分臨床生化試劑而言，加入的生理鹽水或緩沖液不會影響基質變化，從目前申報產品的研究資料來看，加入的標準溶液體和臨床樣本的體積比不超過1∶20對大部分產品來講不會有明顯的基質效應。回收實驗所評估標準一般為90%～110%。

1.7 干擾實驗

干擾實驗主要是考慮非檢測物對檢測結果的影響，通過對樣本中添加不同種類、不同濃度的干擾物質進行檢測，以判斷在產品性能指標范圍內可接受的干擾物質極限濃度。血液樣本一般須考慮膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等常見干擾物質及溶血等因素；檢測樣本為血漿的試劑，還應充分考慮不同抗凝劑對檢測結果的影響。尿液樣本則一般考慮pH值、血尿、蛋白尿等的影響。

1.8 樣本保存

在臨床實驗室中，檢測樣本的保存條件一般為2～8℃或-20℃，通過分別對不同保存條件下、不同時間段的樣本進行檢測，可確定樣本的保存期，以保證檢測結果的準確性。對于穩定性較差、易降解的臨床樣本，建議采樣后及時檢測。

1.9 穩定性

穩定性研究主要包括效期穩定性、開封穩定性、復溶穩定性（凍干粉）、運輸穩定性等。效期穩定性研究一般又包括加速穩定性研究和實時穩定性研究，對臨床生化試劑而言，不建議企業進行加速穩定性研究。而在實時穩定性研究過程中，需要注意應將運輸穩定性研究穿插于其中，即將實時穩定性研究的產品按照企業運輸管理規程模擬日常運輸環境，并充分考慮各種極端情況，進行運輸穩定性研究之后，檢測不同保存時間的產品是否符合性能指標要求來制定最終的產品有效期。注意須提供至少3批產品的相應研究資料。

1.10 參考區間

參考區間即正常人群的檢測值范圍，在研究過程中，企業應詳細說明所采用樣本來源及試驗方法，并明確參考人群的篩選標準。根據文獻資料等判斷檢測結果在不同性別、年齡、樣本類型之間是否有顯著性差異，如有須分別進行研究，同時所研究樣本例數應符合統計學要求，建議采用至少120例以上樣本進行研究（可滿足90%置信限），198例樣本則可滿足99%的置信限，在檢測結果統計分析過程中，結合不同產品的臨床意義確定最終的參考區間，在研究過程中由于所選樣本受地區或人種限制，因此在臨床應用時建議各臨床實驗室建立參考區間。

1.11 其他應注意的問題

申報產品中如包含校準品、質控品，則校準品、質控品也應有相應性能指標，一般包括外觀、裝量、準確性、均一性、穩定性等。校準品須根據GB/T 21415體外診斷醫療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質的要求，提供相應的溯源信息，定值質控品須提供相應的定值資料，根據國內法規規定，非定值質控品不作為醫療器械管理。同時在評估過程中，試劑和校準品、質控品以及適用機型應作為一個系統整體進行評估。且在研發過程中應充分考慮基質效應的影響。

2 結語

伴隨著科技的不斷進步，體外診斷試劑領域的發展日新月異，對企業和相關監督管理部門都提出了嚴峻挑戰。希望通過本文對臨床生化體外診斷試劑研發過程中的要點分析，為企業提供一定的指導性建議，有益于為醫療市場提供高質量的診斷試劑產品。

[1]國家食品藥品監督管理總局令第5號.體外診斷試劑注冊管理辦法[Z].2014-07-30．

[2]國家食品藥品監督管理總局公告2014年第43號.關于公布醫療器械注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告[Z].2014-09-05．

[3]國家食品藥品監督管理總局通告2014年第16號.關于發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告[Z]. 2014-09-11．

Overview of the Evaluation Points for In Vitro Diagnostic Reagents of Clinical Chemistry

CUI Tao*,CHEN Hong-Zhong,ZHANG Yun-Juan

Shandong Food and Drug Administration for Evaluation and Certification,Jinan 250000,China

*Corresponding author,E-mail:cuitao19842006@163.com

According to the policies and regulations of the state food and drug supervision and administration department and my experience ofin vitrodiagnostic products technical review,the evaluation points of clinical chemistry kits were discussed，to provide recommendations for products development and research and registration declaration of such reagents．

clinical chemistry;detection;in vitrodiagnostic reagents

R197

A

1009-0002（2017）03-0356-04

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.023

2016-11-29

崔濤（1984-），男，碩士

崔濤，（E-mail）cuitao19842006@163.com