小酸棗湯對小鼠自主活動及睡眠時間影響的拆方研究Δ

張立峰，劉燦仿（邢臺醫學高等專科學校藥劑教研室，河北 邢臺 054000）

小酸棗湯對小鼠自主活動及睡眠時間影響的拆方研究Δ

張立峰＊，劉燦仿（邢臺醫學高等專科學校藥劑教研室，河北 邢臺 054000）

目的：考察小酸棗湯對小鼠自主活動及睡眠時間的影響，并進行拆方研究。方法：將小酸棗湯組方中7味藥材（酸棗仁、茯苓、川芎、知母、甘草、生姜、桂心）作為實驗因素，每個因素選取有或無2個水平，按L8（27）正交表安排試驗。采用直觀分析法和方差分析法比較小酸棗湯組方和方中各單味藥對小鼠2 min內自主活動及閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間的影響。結果：小酸棗湯組方中對小鼠自主活動具有明顯影響作用的是酸棗仁和知母；對閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間有明顯影響的是酸棗仁。結論：小酸棗湯具有抑制小鼠自主活動及延長閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間的作用，方中酸棗仁作用最強。

小酸棗湯；拆方研究；正交試驗；自主活動；睡眠時間；小鼠

小酸棗湯出自唐代王燾根據歷代文獻輯錄而成的綜合性醫書《外臺秘要》第十七卷《深師方》，主治虛勞不得眠、煩不可寧[1]。該方組成來源于張仲景《金匱要略》中的治療失眠之名方——酸棗仁湯。小酸棗湯是在酸棗仁湯處方基礎上加入了生姜和桂心2味中藥而成，此2味中藥可補肝腎不足，用于治療心血之虛[2-3]。相關學者研究了酸棗仁湯對小鼠自主活動及閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間的影響[4-5]，結果提示酸棗仁湯可明顯抑制小鼠自主活動及延長閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間。但針對小酸棗湯還無此方面的研究。故本研究采用正交試驗分析小酸棗湯和方中各單味藥對小鼠自主活動以及對閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間的影響，從而探討該方的藥理作用，為該方在失眠疾病的臨床應用和處方優化提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

ZH-YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀（安徽省濉溪正華教學實驗器械廠）。

1.2 藥材與試劑

方中所有藥材飲片均購自河北合慶堂大藥房，經邢臺醫學高等專科學校生藥學副教授劉燦仿鑒定均為正品；戊巴比妥鈉原料藥（國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20141117，純度：≥99%）。

1.3 動物

昆明種清潔級小鼠160只，♂，體質量（25±30）g，由河北醫科大學動物實驗中心提供[合格證號：140305，許可證號：SCXK（冀）2008-1-003]。

2 方法與結果

2.1 小鼠自主活動的正交試驗設計

將藥材粉碎，過60目篩，按《資師方》原方所載的藥味和配方比例[酸棗仁18 g、知母10 g、甘草（炙）3 g、茯苓10 g、川芎10 g、桂心10 g、生姜10 g]，以小酸棗湯組方中7種單味藥即酸棗仁（A）、知母（B）、甘草（C）、茯苓（D）、川芎（E）、桂心（F）、生姜（G）為因素，每個因素設有或無2個水平，參考相關研究方法[6-10]制備小酸棗湯8種不同配方的提取液（3.6 g/mL，以生藥計，pH 7.0）。因素與水平見表1。

表1 因素與水平（g）Tab 1 Factors and levels（g）

取小鼠80只，隨機分為8組，每組10只。分別ig上述8種配方的提取液，每天1次，連續6 d。末次給藥1 h后，在安靜、通風、室溫為26℃、濕度為45%的環境下進行曠野實驗[11]。依次將小鼠投入自主活動箱中，先適應2 min，然后觀察小鼠2 min內的自主活動次數（即小鼠2 min內經過的格子數）。以小鼠自主活動次數為指標，按L（827）正交表安排試驗。正交試驗設計與結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 小鼠自主活動的正交試驗設計與結果Tab 2 Design and results of orthogonal test of spontaneous motion in mice

表3 小鼠自主活動的方差分析結果Tab 3 Results of variance analysis of spontaneous motion in mice

根據表2中直觀分析可知，各因素作用主次順序為A＞B＞D＞E＞C＞F＝G，提示配方中對小鼠自主活動抑制作用較強的是酸棗仁。根據表3結果可知，A、B因素均對小鼠自主活動具有明顯的抑制作用（P＜0.05），而其余因素的作用均不明顯（P＞0.05）。結果提示，對小鼠自主活動抑制作用最強的為酸棗仁，其次是知母。

2.2 小鼠睡眠時間的正交試驗

另取80只小鼠，分組及給藥方法均同“2.1”項下，每天給藥1次，連續給藥5 d。末次給藥30 min后，各組小鼠均按35 mg/kg的劑量ip 0.25%戊巴比妥鈉溶液，記錄各組小鼠的睡眠時間（以翻正反射消失為睡眠開始，至翻正反射恢復作為小鼠的睡眠時間）。以小鼠睡眠時間為指標，按L8（27）正交表安排實驗。正交試驗設計與結果見表4，方差分析結果見表5。

表4 小鼠睡眠時間的正交試驗設計與結果Tab 4 Design and results of orthogonal test of sleep time in mice

表5 小鼠睡眠時間的方差分析結果Tab 5 Results of variance analysis of sleep time in mice

由表4中直觀分析可知，各因素對小鼠睡眠時間具有一定延長作用，作用主次順序為A＞E＞B＞D＞F＞C＞G，其中酸棗仁作用最為明顯。由表5結果可知，A因素對小鼠睡眠時間有明顯的影響（P＜0.05），而其余因素的作用均不明顯（P＞0.05）。這提示在小酸棗湯組方各單味藥中，發揮延長小鼠睡眠時間作用的主要是酸棗仁。

3 討論

中醫對方劑配伍的認識主要集中在對處方中君、臣、佐、使組成分析的論述上。方劑的配伍研究試驗設計方法很多，很多學者為研究《金匱要略》中酸棗仁湯中君、臣、佐、使的作用和地位進行了大量的實驗[12-13]。但對處方增添2味藥材后的小酸棗湯藥效研究基本沒有。增加的桂心、生姜2味藥材味辛入肝，與其余5味藥材組合則心煩之病可除。本研究采用逆向思維，從小酸棗湯處方整體出發，分別去掉相應的各味中藥，采用曠野實驗法和閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠法[11，14]研究各味中藥在原處方中發揮的鎮靜、安神的作用和地位。本研究發現，原處方中如果去掉酸棗仁，其對小鼠自主活動及睡眠時間的影響較小，而有酸棗仁藥材的處方對小鼠自主活動及睡眠時間的影響較大，這說明作為君藥的酸棗仁在處方中對小鼠鎮靜安神的功效為最大。酸棗仁性平，味酸甘，養肝血、安心神，為治療失眠之主藥。酸棗仁藥材的藥理實驗也證實其含有的酸棗仁皂苷為鎮靜安神的有效成分[15-17]。同時本研究還表明，原處方在去掉知母藥材后其鎮靜、安神的藥效也有所下降，說明知母作為臣藥在全方中起鎮靜安神的作用僅次于酸棗仁，其可滋陰清熱，起到了輔助君藥酸棗仁加強鎮靜安神的作用。處方中川芎具有調暢氣機、疏達肝氣功效，與君藥酸棗仁配伍，一辛散一酸收，相反相成，以達養血調肝之妙。使藥甘草起到了調和諸藥的作用。另外，閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間實驗表明，酸棗仁湯的催眠作用是君、臣、佐、使各味藥材搭配共同起作用的結果，從中醫理論上來講，酸棗仁味酸入肝，桂心、生姜、川芎味辛也入肝，4味藥辛酸相合入肝以平木；知母味苦入腎，甘草茯苓味甘也入腎，3味藥苦甘相合入腎以補水；7味藥組合共達水生木而木生火之效。去掉原方中任何一味藥，其催眠的作用都有明顯的減弱。雖然這種具體機制有待通過藥理研究進一步闡明，但本實驗研究體現了中醫方劑嚴謹配伍的原則，只有在君、臣、佐、使搭配得當的條件下，處方才能達到原方的功效。同時，該處方比酸棗仁湯多加了2味藥材，具體藥效比較有待于后續實驗的進一步研究。

中藥復方制劑講究的是在病因病機基礎上，采用辨證論治的原則，結合中藥藥性理論，以處方所含多種活性成分通過多途徑、多靶點以及整體調節而發揮綜合其治療作用的，因此考察配方本質不但要考慮其單味藥的作用，還需考察組方各藥物的交互作用以及各藥性之間的調節作用，這樣才能從整體上闡明中藥復方的配伍本質，所以小酸棗湯各藥味之間的交互作用對小鼠睡眠時間的影響有待進一步探討。

綜上所述，本實驗證明了小酸棗湯具有抑制小鼠自主活動及延長閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間的作用，其中酸棗仁作用最強，但是與酸棗仁湯作用大小之間的比較還有待進一步考察。

[1] 王燾.外臺秘要[M].北京：人民衛生出版社，1955：92.

[2] 丹波康賴.醫心方[M].上海：上海科學技術出版社，1998：546-547.

[3] 吳巧敏，趙藝初，韓藝凡，等.基于古今醫家論著對酸棗仁湯中“酸棗仁”實質的思考[J].遼寧中醫雜志，2016，43（2）：262-264.

[4] 陳鶯，陳少玫.酸棗仁湯臨床應用及藥理實驗研究進展[J].山西中醫，2014，30（12）：41-43.

[5] 李玉娟，劉雯，楊靜玉，等.酸棗仁湯的鎮靜催眠作用[J].沈陽藥科大學學報，2002，19（2）：115-117.

[6] 劉瑩，陳曉偉，李健，等.茵陳蒿湯拆方對非酒精性脂肪性肝炎的正交實驗研究[C]//第二十五屆全國中西醫結合消化系統疾病學術會議論文集.北京：中國中西醫結合學會，2013：182-188.

[7] 汪海鴻，狄留慶，陸茵，等.通塞脈片治療急性腦缺血的拆方研究[J].南京中醫藥大學學報，2011，27（1）：55-57.

[8] 張繼平，劉俊娥，姚暉，等.正交試驗法研究補陽還五湯中保護OGD損傷PC12細胞的主要藥味[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（11）：134-138.

[9] 龍旭陽，鄭攀.方劑拆方研究現狀[J].浙江中醫藥大學學報，2010，34（1）：120-121.

[10] 徐智，薛梅苓，單升高，等.中藥及其成分配伍組方的研究方法探析[J].中國衛生產業，2013，10（20）：86-87.

[11] 陳奇，鄧文龍，張世瑋，等.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛生出版社，1994：67.

[12] 封碩.酸棗仁湯君臣佐使配伍的藥效學研究[D].沈陽：遼寧中醫藥大學，2007.

[13] 沈鴻，黃芳，竇昌貴，等.酸棗仁湯處方的配比研究[J].中國藥科大學學報，2002，33（1）：21-23.

[14] 詹愛萍，王平，陳科力.半夏、掌葉半夏和水半夏對小鼠鎮靜催眠作用的比較研究[J].中藥材，2006，29（9）：964-965.

[15] 譚云龍，孫暉，孫文軍，等.酸棗仁化學成分及其藥理作用研究進展[J].時珍國醫國藥，2014，25（1）：186-188.

[16] 張妍，解軍波，張彥青，等.鎮靜催眠藥物的主要作用機制研究進展[J].中國藥房，2011，22（41）：3906-3908.

[17] 崔思嬌，賈英，羅潔，等.酸棗仁鎮靜催眠活性部位的篩選[J].中國藥房，2013，24（23）：2128-2129.

Study on the Effects of Disassembled Formulation of Xiaosuanzao Decoction on Spontaneous Motion and Sleep Time in Mice

ZHANG Lifeng，LIU Canfang（Pharmacy Teaching and Research Section，Xingtai Medical College，Hebei Xingtai 054000，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of Xiaosuanzao decoction on spontaneous motion and sleep time in mice，and to study its disassembled formulation.METHODS：Seven ingredients of Xiaosuanzao decoction were selected as the influential factors，includingZiziphus jujuba，Poria cocos，Ligusticum chuanxiong，Anemarrhena asphodeloides，Glycyrrhiza uralensis，Zingiber officinaleandCortex cinnamoni.Two levels of with or without were designed for each factor，and the experiment was arranged according to L8（27）orthogonal test table.The effects of Xiaosuanzao decoction and each ingredient on spontaneous motion within 2 min and sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium were compared by visual analysis method and analysis of variance.RESULTS：Z.jujubeandA.asphodeloideswere the main active ingredients of Xiaosuanzao decoction on spontaneous motion；Z.jujubewas the main active ingredient of Xiaosuanzao decoction on sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium.CONCLUSIONS：Xiaosuanzao decoction can inhibit spontaneous motion and prolong sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium，andZ.jujubeis the main ingredient of Xiaosuanzao decoction.

Xiaosuanzao decoction；Disassembled formulation；Orthogonal test；Spontaneous motion；Sleep time；Mice

R285.5

A

1001-0408（2017）04-0487-03

2016-06-07

2016-11-07）

（編輯：林靜）

河北省教育廳河北省高等學校科學技術研究項目（No.ZC2016121）

＊副教授，碩士。研究方向：中藥新藥開發及藥效物質。電話：0319-2233365。E-mail：816601@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.04.15