高效液相色譜法測定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的含量

逯小萌，趙群濤

（1．濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽 457000；2．信陽市食品藥品檢驗所，河南 信陽 464000）

高效液相色譜法測定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的含量

逯小萌1，趙群濤2

（1．濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽 457000；2．信陽市食品藥品檢驗所，河南 信陽 464000）

目的：為完善筋骨痛寧膠囊質量標準，增加該制劑中梔子苷的含量測定項，建立梔子苷含量測定的方法。方法：色譜柱為Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：乙腈∶水（15∶85），流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為238 nm。結果：梔子苷進樣量在0.021 5～0.538 5 μg與峰面積呈良好線性關系，r＝0.999 7，平均回收率為99.05%，相對標準偏差（RSD）＝0.55%（n＝9）。結論：建立的方法準確度、靈敏度及重復性均較好，可用于筋骨痛寧膠囊中梔子苷含量的測定。

筋骨痛寧膠囊；梔子苷；高效液相色譜法；含量測定

筋骨痛寧膠囊是濮陽市中醫醫院協定處方［豫藥制字：H20120348（濮）］，由大黃、連翹、梔子（炒）、紅花、川芎、土鱉蟲、乳香（制）、當歸、冰片、沒藥（制）10味中藥組成。以上10味，大黃粉碎成細粉，冰片研細過80目篩，備用。連翹、梔子（照清炒法炒至黃褐色）等8味加水煎煮2次，煎煮2 h，合并藥液，濃縮至相對密度1.30～1.35（80℃），加入大黃細粉和適量淀粒，混勻，干燥（60～80℃），得干浸膏。干浸膏粉碎為細粉，加入冰片細粉配研，混勻，裝入膠囊，即得。功效：清熱涼血祛瘀，消腫止痛，用于骨折前期疼痛、腫脹，并促進骨折愈合。原質量標準較簡單，無含量測定項，不能準確把握產品內在質量，梔子在本制劑中的作用是清熱散結、消腫止痛，梔子苷作為本制劑中梔子的主要活性成分[6]有必要對其進行質量控制。故采用高效液相色譜法并參考有關文獻[1-5]，對筋骨痛寧膠囊中梔子苷成分進行了含量測定方法的研究，增加了本制劑梔子的含量測定項。

1 儀器和試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；G1314F型Agilent 1260可變波長檢測器（美國安捷倫公司）；Agilent chemstation（美國安捷倫公司）；XS205DU型電子天平（瑞士mettler公司）；UV-2550紫外可見分光光度計（日本島津公司）；KS-500E11型超聲儀（寧波海曙科生超聲設備有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）；梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110749-200714，供含量測定用）；筋骨痛寧膠囊（批號：20160501，20160601，20160901，規格均為0.35 g）；乙腈為進口色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶水（15∶85）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：238 nm；進樣量：10 μL，理論板數＞5 000。

2.2 溶液的制備

精密稱取梔子苷對照品10.77 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再取10 mL，置50 mL容量瓶中，準確稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液；取筋骨痛寧膠囊20粒，其內容物置研缽中研勻，取1.05 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得樣品溶液。按處方量及工藝制備方法制備缺梔子的陰性樣品，依樣品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗分別精密吸取經微孔濾膜濾過的對照品溶液、樣品溶液和陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件分析，記錄色譜圖。由圖1可見，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照溶液無干擾，證明方法可行。

2.3.2 線性關系考察精密吸取經微孔濾膜濾過的對照品溶液1，3，5，10，15，20，25 μL注入液相色譜儀，以對照品進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，

回歸方程：Y＝25.759X－4.674 5 r＝0.999 8。

結果表明，梔子苷在0.021 5～0.538 5 μg范圍內線性關系良好。

圖1 梔子苷含量測定高效液相色譜圖

2.3.3 精密度試驗精密吸取經微孔濾膜濾過的同一供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，重復6次。結果峰面積平均值為259.61，RSD＝0.33%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h進樣10 μL，結果峰面積的平均值為259.56，RSD＝0.29%（n＝8）。表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.3.5 重復性試驗取同一批樣品，按擬定方法平行制備6份供試品溶液，分別進行測定。結果得RSD＝0.38%（n＝6），表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗精密量取已知含量的同一批號的樣品（批號：20160901，平均裝量：0.370 6 g/粒）9份，加入適量對照品依“2.2”項方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個量級的樣品溶液，進行測定，計算回收率和RSD值，結果見表1。

表1 梔子苷加樣回收實驗結果 （n＝9）

2.4 樣品含量測定

取樣品3批（批號：20160501，20160601，20160901）樣品適量，按“2.2”項方法制得供試品溶液，按擬定方法測定樣品含量，梔子苷含量分別為0.47 mg/粒，0.49 mg/粒，0.46 mg/粒。

3 討論

3.1 實驗檢測波長的選擇

取對照品溶液在UV-2550紫外可見分光光度計200～300 nm波長范圍內進行掃描，測得在238 nm波長處有最大吸收，故選擇238 nm為檢測波長。

3.2 流動相及比例的選擇

流動相及其比例的選擇分別采用了甲醇–水、乙腈–水及甲醇–1%冰醋酸溶液進行實驗對比，結果顯示用乙腈–水（15∶85）作為流動相，樣品主成分峰型良好，與其他苷類分離效果滿意，保留時間合理，且陰性對照溶液峰對其無干擾，故選擇乙腈–水（15∶85）作為流動相。

3.3 超聲溶解時間的選擇

超聲處理是藥品檢驗中常用的樣品處理方法，有著簡便、快捷、溶解效果好等特性，本實驗同樣采用對同一樣品，分別超聲15，30，45，60 min的方法進行實驗對比，結果表明超聲30 min即可將梔子苷提取完全。

高效液相色譜法作為測定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的方法，操作簡單易行，重現性好，準確度高，線性關系良好，可用于筋骨痛寧膠囊中梔子苷含量質量標準的完善。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2015年版)一部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2015:248.

[2] 趙劍,唐燦,蒲清榮,等.HPLC法測定江西紅梔子中梔子苷含量[J].四川中醫,2009,27(4):52-53.

[3] 朱曉靜,朱文娟,宋粉云,等.RP-HPLC法小兒止咳清肺片中梔子苷的含量[J].海峽藥學,2015,27(8):63-65.

[4] 姜勇.HPLC法測定丹梔逍遙散中梔子苷的含量[J].中國藥房,2014,25(12):1125-1127.

[5] 胡亞男.清開靈滴丸中梔子苷的HPLC含量測定研究[J].中國實用醫藥,2004,9(2):252-253.

[6] 陳紅,肖永慶,張村,等.梔子炒制過程中梔子苷和藏紅花素的含量變化[J].中國中藥雜志,2007,32(10):990-992.

本文編輯：魯守琴

Determination of Geniposide Content in Jingu Tongning Capsules by HPLC

Lu Xiao-meng1, Zhao Qun-tao2
(1. Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center, Henan Puyang 457000, China; 2.Xinyang Food and Drug Inspection Institute, Henan Xinyang 464000, China)

Objective：To determine the gardenoside content in jingu tongning capsules, improve the quality standard of this Chinese patent medicine for pain in bones and muscles, and set up the gardenoside content determination method.Methods：The gardenoside content in Jingu Tongning capsules was determined by HPLC using Waters-C18column (4. 6 mm × 250 mm, 5 μm), serving the mixture of acetonitrile and water (15︰85) as mobile phase at a f ow rate of 1. 0 mL / min, a column temperature of 30℃, and a detection wavelength of 238 nm.Results：Geniposide sample load at a range of 0.021 5 ～ 0.538 5 μg showed good linear relationship to the peak area (r＝0.999 7). The average recovery rate was 99.05%, with a RSD of 0.55% (n＝9).Conclusion：To developed method has high accuracy, sensitivity and reproducibility, which may be used for the determination of geniposide content in jingu tongning capsules.

Jingu Tongning Capsules; Geniposide; HPLC; Content Determination

R917；R926

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.02.007

2016 - 09 - 27

逯小萌，男，主管藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：lumeng911@163.com