不同儲存條件對血常規(guī)檢測結(jié)果的影響

劉茜，豆虎

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗科·重慶市兒科學(xué)重點實驗室·兒童發(fā)育疾病研究省部共建教育部重點實驗室，重慶 400014 )

不同儲存條件對血常規(guī)檢測結(jié)果的影響

劉茜，豆虎

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗科·重慶市兒科學(xué)重點實驗室·兒童發(fā)育疾病研究省部共建教育部重點實驗室，重慶 400014 )

目的：了解靜脈血標(biāo)本放置時間及儲存溫度對主要檢測結(jié)果的影響。方法：本院住院患兒EDTA-K2抗凝靜脈血標(biāo)本77例，其中20例放25 ℃室溫，20例放4 ℃冰箱，17例放10 ℃壞境，20例放37 ℃水浴箱，每個標(biāo)本于2 h、4 h、6 h、8 h、24 h、48 h、72 h用Sysmex-XE2100全自動血液分析儀進(jìn)行檢測仔細(xì)記錄不同時段測定結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：室溫條件下，僅血小板平均體積在6 h檢測結(jié)果變化有顯著性差異(P<0.05)，白細(xì)胞計數(shù)于24 h、紅細(xì)胞計數(shù)于24 h、血小板計數(shù)于24 h、紅細(xì)胞壓積于48 h開始有顯著性差異(P<0.05)，血小板平均體積和血小板分布寬度的測定結(jié)果最不穩(wěn)定。4 ℃條件下標(biāo)本可穩(wěn)定更長時間,10 ℃條件下相對穩(wěn)定，37 ℃水浴箱各個項目都不穩(wěn)定。結(jié)論：血細(xì)胞計數(shù)應(yīng)在6 h內(nèi)盡快完成 ,如不能及時送檢或檢測，應(yīng)該保存在4 ℃條件下。

血液標(biāo)本；保存時間；存放溫度；血細(xì)胞計數(shù)

隨著血液檢驗技術(shù)的發(fā)展及全自動血液細(xì)胞分析儀在臨床上的推廣使用，血常規(guī)檢驗被臨床廣泛應(yīng)用[1]。其準(zhǔn)確性直接影響臨床診斷，因此對于血液標(biāo)本的存放時間和條件都提出了更高的要求。血常規(guī)的檢測一般受到溫度、時間、抗凝劑、采集方式等多種因素的影響[2]。這就要求必須對標(biāo)本層層把關(guān)，以便得到最準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,本實驗旨在研究放置時間及儲存溫度對主要檢測結(jié)果的影響，分別對4個儲存溫度下的靜脈血標(biāo)本進(jìn)行檢測和對比，初步得出靜脈血標(biāo)本的放置時間及存儲溫度對檢測結(jié)果的影響，為標(biāo)本保存或結(jié)果復(fù)查做出指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院住院部患兒標(biāo)本77例，年齡2個月～12歲 ,性別未計。

1.1.2 儀器與試劑 Sysmex-XE2100全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控物。近幾年參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評成績優(yōu)秀。靜脈血采血管為BD紫頭管。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 靜脈血穿刺采集血液標(biāo)本1.5～2 mL,采血后將紫頭真空采血管顛倒7～8次，使抗凝劑與血液充分混合。

1.2.2 檢測方法 77例標(biāo)本分為4組。室溫組:標(biāo)本20例,每份標(biāo)本在送往檢驗科后即刻、2 h、4 h、6 h、8 h、24 h、48 h、72 h進(jìn)行測定；4 ℃組標(biāo)本20例、10 ℃組標(biāo)本17例、37 ℃組標(biāo)本20例,操作同室溫組。每次檢測完畢立即存入4 ℃冰箱、10 ℃環(huán)境、37 ℃水浴箱中，下次檢測前10 min拿出，恢復(fù)至室溫再檢測。本次試驗探討項目包括白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、血小板計數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)10項，檢測結(jié)束后做好記錄。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

各個檢測項目均以即刻檢測結(jié)果作為參考，進(jìn)行組間配對t檢驗，以P<0.05表示為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 室溫條件下

WBC在即刻、2 h、4 h、6 h、8 h的結(jié)果變化率較小，總體趨于穩(wěn)定，即刻過后，結(jié)果有增高的趨勢，1～4 h檢測最穩(wěn)定，直到24 h開始，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。PLT在所統(tǒng)計的72 h內(nèi)，隨著時間延長先逐漸降低后緩慢升高，但波動的趨勢不大，直至第24 h，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MPV隨放置時間延長逐漸增高，在6 h時檢測結(jié)果與即刻測定相比便具有顯著性差異(P<0.05)，是最先出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義的項目。PDW可以穩(wěn)定48 h。RBC總趨勢為下降，24 h內(nèi)變化無統(tǒng)計學(xué)意義，直到24 h時差異開始具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MCV可以穩(wěn)定24 h，RDW可以穩(wěn)定48 h。MCH 隨時間的變化也不大，可以穩(wěn)定48 h。HCT在72 h內(nèi)總體呈下降趨勢，48h內(nèi)無統(tǒng)計學(xué)意義，48 h開始差異顯著。HGB總體變化不大 72 h時差異開始顯著。見表1-表3。

2.2 4 ℃冰箱組

結(jié)果穩(wěn)定時間較長，WBC于72 h，PLT于72 h，MPV于24 h，PDW 于48 h，RBC于72 h，MCV于72 h開始有顯著差異(P<0.05)。RDW在72 h內(nèi)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。MCH 72 h內(nèi)均穩(wěn)定。HCT 72 h隨著時間延長無規(guī)律波動，變化均無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果也較為穩(wěn)定。HGB 72 h內(nèi)結(jié)果變化較小，結(jié)果穩(wěn)定。見表1-表3。

2.3 10 ℃保存條件下

標(biāo)本相對較穩(wěn)定，WBC于72 h， PLT于48 h，MPV于24 h，PDW 于48 h， MCV于72 h開始有顯著差異(P<0.05)。RBC隨著時間延長有輕微減少，72 h內(nèi)差異不大，無統(tǒng)計學(xué)意義；RDW、 MCH、HCT在72 h內(nèi)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果也較為穩(wěn)定。HGB 72 h內(nèi)結(jié)果變化較小，結(jié)果穩(wěn)定。見表1-表3。

2.4 37℃水浴箱組

各項檢測指標(biāo)都不穩(wěn)定， WBC呈下降趨勢，于8 h與即刻檢測有統(tǒng)計學(xué)意義； PLT隨著時間逐漸下降，2 h有顯著差異，MPV、PDW于48 h后有統(tǒng)計學(xué)意義； RBC于8 h，MCV于2 h，HCT于2 h,MCH于8 h,RDW于2 h開始有顯著差異(P<0.05)。HGB總體變化不大，72 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1-表3。

表1 WBC、HGB及HCT檢測結(jié)果與即刻檢測差異分布

注：“*”表示該檢測結(jié)果與即刻檢測有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；“-”代表此刻檢測結(jié)果與即刻檢測無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2 PLT及相關(guān)參數(shù)檢測結(jié)果與即刻檢測差異分布

注：“*”表示該檢測結(jié)果與即刻檢測有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；“-”代表此刻檢測結(jié)果與即刻檢測無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 RBC及相關(guān)參數(shù)檢測結(jié)果與即刻檢測差異分布

注：“*”表示該檢測結(jié)果與即刻檢測有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；“-”代表此刻檢測結(jié)果與即刻檢測無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

在本次研究中，隨著時間的延長，標(biāo)本檢測結(jié)果在不斷地變化。時間越長，血細(xì)胞形態(tài)改變的可能性就越大，使檢測指標(biāo)出現(xiàn)誤差[3]；另外血細(xì)胞的代謝活動、微生物、化學(xué)反應(yīng)都會對血液樣本質(zhì)量造成很大的影響[4]。無論是在中低溫(4～25 ℃)，還是在高溫(37 ℃)條件下，血小板相關(guān)參數(shù)變化最快，特別是在高溫(37 ℃水浴箱)條件，PLT在2 h時與即刻有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，說明血小板相關(guān)參數(shù)最易受溫度和時間的影響。這與艾衛(wèi)軍等[5]研究相符,可能與血小板本身生理機(jī)制和結(jié)構(gòu)有關(guān)[6]，血小板離開機(jī)體環(huán)境后，由于滲透壓、溫度、抗凝劑及試管壁等影響，形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，隨著保存時間的延長，標(biāo)本出現(xiàn)巨大PLT，血小板聚集， PLT碎片，裂片紅，而血液分析儀根據(jù)電阻抗原理無法正確區(qū)分這些成分，從而導(dǎo)致血小板相關(guān)參數(shù)不穩(wěn)定，此種情況只有靠有經(jīng)驗的檢驗者在顯微鏡下區(qū)分。

紅細(xì)胞在不同存放條件下，相關(guān)參數(shù)也在不斷的變化。紅細(xì)胞處在不同的滲透壓皺縮變形、腫脹、破碎，不被儀器識別，導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果下降[7]。紅細(xì)胞皺縮、紅細(xì)胞碎片、紅細(xì)胞腫脹導(dǎo)致紅細(xì)胞大小不均，使得紅細(xì)胞分布寬度(RDW)變大、MCV也不斷變化,RDW結(jié)合MCV對貧血分類診斷和鑒別有重要臨床意義[8]。血紅蛋白(HGB)較穩(wěn)定，變化很小,是血常規(guī)中最為穩(wěn)定的一個指標(biāo)。

相比血小板，白細(xì)胞分類及計數(shù)相對比較穩(wěn)定，在中低溫組中白細(xì)胞計數(shù)及分類在24 h內(nèi)無明顯影響。雖然白細(xì)胞隨放置時間的延長受滲透壓的影響，體積也會發(fā)生不同程度的改變，但Sysmex-XE2100全自動血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞計數(shù)和分類，采用的是半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)，結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)[9]，這一技術(shù)有效地保證了白細(xì)胞參數(shù)的基本穩(wěn)定。在室溫和37℃條件下，白細(xì)胞計數(shù)分別可以穩(wěn)定24 h和8 h，部分標(biāo)本在48 h和24 h出現(xiàn)無法分類的情況。隨著時間的延長，細(xì)胞分層，分層的細(xì)胞產(chǎn)生不同代謝產(chǎn)物，形成一個微環(huán)境，同時白細(xì)胞體積也會發(fā)生一些變化[10]；再者，本次標(biāo)本主要來自于12歲以下的兒童，淋巴細(xì)胞較成人明顯偏高，這是兒童正常生理現(xiàn)象。淋巴細(xì)胞在不同時間溫度下，細(xì)胞核會發(fā)生變化，出現(xiàn)變異淋巴細(xì)胞[11]。而血液分析儀不能辨認(rèn)這些變性的白細(xì)胞，從而無法準(zhǔn)確分類。

不同的溫度下標(biāo)本穩(wěn)定性也不一樣，4 ℃和10 ℃標(biāo)本都可以穩(wěn)定24 h，但10 ℃時白細(xì)胞和血小板先于4 ℃開始有統(tǒng)計學(xué)差異。室溫下標(biāo)本放置6 h，各項檢測參數(shù)還比較穩(wěn)定，結(jié)果無顯著差異，6 h開始MPV有顯著差異，即血小板的形態(tài)已開始發(fā)生變化；24 h內(nèi)除MPV外，其余各項檢測結(jié)果均無顯著性差異。37 ℃保存條件下標(biāo)本最不穩(wěn)定，但冷凝集標(biāo)本在37 ℃短時間的溫育，其血常規(guī)結(jié)果有所改善[12]。保存條件對血液標(biāo)本中的各指標(biāo)有重要的影響，良好的保存條件能減少其他因素的影響。送檢過程的環(huán)境溫度最好小于25 ℃，及時送檢，能夠有效的控制血常規(guī)測定中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板及其各項參數(shù)的穩(wěn)定性。因此血液標(biāo)本采集后，應(yīng)盡量縮短送檢時間盡快檢測，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性[13]。如果因為種種原因不能及時送檢或不能及時檢測，應(yīng)將標(biāo)本保存于低溫條件下，待問題解決后立即檢測。

綜上所述，血常規(guī)標(biāo)本在室溫(25 ℃左右)下，血常規(guī)指標(biāo)除MPV外均可穩(wěn)定24 h，24 h內(nèi)可以進(jìn)行除MPV外其余指標(biāo)的復(fù)檢。在低溫(4～10 ℃)條件下，血常規(guī)各項指標(biāo)相對穩(wěn)定，更有利于標(biāo)本的保存。因此，血液分析靜脈血標(biāo)本必須在6 h內(nèi)完成分析與復(fù)檢，室溫保存最多24 h，且只能進(jìn)行部分指標(biāo)的復(fù)檢；4 ℃冰箱要求保存72 h，但只能進(jìn)行HGB的復(fù)檢及標(biāo)本的溯源。

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(學(xué)術(shù)編輯：趙明才)

Effects of different storage conditions on blood routine test

LIU Xi， DOU Hu

(ClinicalLaboratoryinChildren'sHospitalofChongqingMedicalUniversity,KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing,MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders,Chongqing,400014,China)

Objective：To investigate the effect of sample storage time and temperature on results of automatic blood sample analysis.Methods:77 cases blood samples with EDTA-K2 anticoagulant venous in our hospital,including 20 cases of 25 ℃ at room temperature,20 cases of 4 ℃ refrigerator,17 cases 10 ℃ environment,20 cases of 37 ℃ water bath box,each specimen use Sysmex-XE2100 automatic blood analyzer to detect carefully recorded results and statistical analysis at 2 h,4 h,6 h,8 h,24 h,48 h,72 h .Results:When whole blood specimens were stored at normal room temperature only MPV had significant difference (P<0.05) at 6 h.White blood cell count in 24 h,the red blood cell count in 24 h,the platelet count in 24 h,the red blood cells deposited in 48 h began to have significant difference (P<0.05),the determination results of mean platelet volume and platelet distribution width of the most unstable,when blood specimens were stored at 4 ℃,the objectives may be stable for a longer time,at 10 ℃,the specimen was relatively stable;and under 37 ℃ every project was not stable.Conclusion:Blood routine analysis should be completed with in 6 h.,if not ,it should be stored at 4 ℃condition.

Blood sample;Storage time;Storage temperature;Blood cell count

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.01.014

重慶市衛(wèi)生局課題(2012-2-100)

2016-09-21

劉茜(1988-)，女，檢驗師。E-mail:liuxi19881109@foxmail.com

豆虎,E-mail:375009808@qq.com

時間：2017-3-6 21∶07

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170306.2107.028.html

1005-3697(2017)01-0049-04

R446.11

A