雙致病菌混合感染引起家兔發病的調查分析

翁順太高昔英徐海濱姚堯林鍵詹先強潘晶晶*（.福建省人獸共患病研究重點實驗室福建省疾病預防控制中心，福州35000；.福州大北農生物技術有限公司，福州35004）

雙致病菌混合感染引起家兔發病的調查分析

翁順太1高昔英2徐海濱1姚堯2林鍵1詹先強2潘晶晶2*
（1.福建省人獸共患病研究重點實驗室福建省疾病預防控制中心，福州350001；2.福州大北農生物技術有限公司，福州350014）

2017年1月，某單位清潔級日本大耳白兔生產繁殖群體，有15只種兔（5♂、10♀）及其4窩33只25~30日齡哺乳仔兔先后混合感染大腸桿菌病及霉菌病。從觀察患兔的臨床癥狀與剖檢病變入手，結合實驗室檢查，找出發病原因，為預防該病提供建議。采用保溫、按摩、補液、抗菌、促胃腸蠕動、環境消毒等手段聯合進行干預。聯合干預次日，3只癥狀較輕微母兔即排出些許膠凍樣液體或兩頭尖的黑便；5 d后，除7只重度感染大兔、15只仔兔死亡外，其余26只患兔均緩慢恢復。感染早期進行聯合干預有一定效果，重癥感染者療效不佳。該病應以加強日常管理入手，預防為主。

清潔級日本大耳白兔繁殖群體大腸桿菌霉菌混合感染聯合干預病因分析

某單位在培育清潔級日本大耳白實驗兔過程中（生產許可證號：SCXK（閩）-2016-****），有15只（5♂、10♀）9月齡左右日本大耳白種兔同時感染大腸桿菌病和霉菌病，隨后4窩33只25~30日齡哺乳仔兔也染病。出現病例時，采取給仔兔斷乳、患兔隔離、實驗室檢查、調查研究、聯合干預等措施，26只大兔及仔兔得以康復。現將結果報道如下。

1 臨床癥狀

被毛松亂，腹部圓鼓，輕敲有“砰砰”響聲，精神差、基本趴著不動。大兔飲少量水、尿量少色偏紅。患兔飼料廢食、便秘，偶排出些許淡黃色膠凍樣黏液和粒小質硬兩頭尖糞便。仔兔腹瀉、肛門口附著稀便。發病初期體溫38.7~40.0℃，正常或稍偏高，發病后期體溫低至38℃以下。后期消瘦、脫水、貧血，全身冰冷、耳朵透光觀察僅見微弱血絲，大兔后肢內側呈淡青色，從發病至衰竭死亡全程7~10 d。少數大兔出現皮膚淺表潰瘍、陰囊紅腫、角膜炎、乳房附近皮膚紅暈等炎癥癥狀，個別仔兔頭部、頸部、背部皮膚脫毛。

2 剖檢病變

3 培養鑒定

取3只病死兔胃內容物、盲腸內容物，加生理鹽水稀釋，分別接種于血平板37℃溫箱培養24 h[1]。結果顯示，接種2只病死兔內容物血平板上的菌落為白色、直徑1 mm、凸起、圓形，經革蘭氏染色鏡檢為G+橢圓形，為酵母樣真菌；另1只血平板上的菌落為灰色、直徑1~3 mm、扁平、圓形，革蘭氏染色鏡檢為G-長桿菌或G-桿菌，經VITEK2GN卡檢測，為大腸桿菌，再經EPEC多價、ETEC多價、EIEC多價、EHEC多價檢測均為陰性。

4 聯合干預

4.1 隔離將所有患兔進行隔離，置于隔離觀察室或設施內壓強梯度較小的區域，并遠離門縫、進風口、回風口等風速較大處。

4.2 保溫隔離觀察室內采用保溫燈取暖，室溫保持在25℃或更高，利于患兔保暖。

4.3 腹部按摩每天上午、下午給患病大兔各施予腹部順時針按摩1次，30 min/次。

4.4 補液患兔灌服葡萄糖注射液或生理鹽水20 mL/只·次（仔兔2 mL/只·次），2次/d，連用5~7 d。4.5促胃腸蠕動每只每次用嗎丁琳5 mg、木香順氣丸2 g研末兌水灌服（可結合補液同時進行，仔兔用量減半），2次/d，連用5~7 d。

4.6 抗菌每只每次用青霉素20萬IU、慶大霉素2萬IU進行肌肉注射，2次/d；飲水中添加恩諾沙星或諾氟沙星膠囊，100 mg/只·d，連用5~7 d。檢查結果出來后更換為每只每次口服制霉菌素50萬IU、慶大霉素4萬IU、土霉素0.25 g，2次/d，連用7~ 10 d。仔兔用量減半。

4.7 環境消毒干預期間，每天對屏障設施內的各區域及外環境用0.5%過氧乙酸溶液進行噴霧消毒，注意不能噴灑到動物身上。

本設計介紹了主要模具的材料的選擇原則，材料選擇時必須要全面考慮此種材料的各方面因素，當材料在在某些特性如硬度、脆性、抗光氧化率等不符合設計所需的原則時，我們必須加以調整，選擇用加入添加劑的方式，使其效果達到令人滿意的程度。準備工作完成之后，介紹了零件的設計的內容，其中，壁厚、尺寸精度、表面質量都非常關鍵，看似簡單，實則復雜。在介紹注塑成型時，著重介紹了注塑機的校核。

聯合干預后次日，3只癥狀較輕微母兔即排出少許膠凍樣液體或兩頭尖的油狀細小黑便；5~7 d后，除7只重度感染大兔（1♂、6♀）、15只仔兔死亡外，其余患兔均有一定恢復。

5 原因分析

1）與兔生產設施同樓底層的豬舍引進未斷乳仔豬，最先感染致病雙菌。時處寒冷冬季，氣溫僅4~ 6℃，因科研需要從外地購進未斷乳仔豬，仔豬年齡小、體溫調節不穩定、長途運輸應激、豬舍保溫能力差等綜合因素的作用，導致仔豬出現發燒、腹瀉、排血尿等大腸桿菌、霉菌感染癥狀。仔豬感染雙致病菌是引發交叉感染的罪魁禍首。

2）本試驗利用IVC模式進行生產繁殖，國產IVC制作材料上的缺陷，無法保證籠盒經常性得到高壓滅菌。由于飼養管理人員少，普通級豬舍管理人員兼職屏障區域的保潔人員，于是工作人員便成了疾病的傳播者。工作人員無菌意識、防范意識、隔離意識的欠缺成為疾病傳播的關鍵因素。

3）營養過剩致消化不良。疫病傳染時，正值母兔處于哺乳后期，為了提高母兔的泌乳能力，保證仔兔得到充足的營養，在日糧基礎上每只母兔補充200 mL乳粉水及30~50粒煮熟黃豆。之前應用并未出現任何問題，但可能受到大腸桿菌的刺激，導致營養過剩、消化不良，食物在胃腸道內發酵、產氣。積食直接誘導了對病因的判斷。

4）母嬰傳播。染病的哺乳母兔通過乳汁將疾病傳播給仔兔，導致仔兔呈現同樣的食欲廢絕、精神差、肚大如鼓、骨瘦如柴、腹瀉等典型大腸桿菌感染癥狀。母嬰傳播成為仔兔大面積感染的絕佳途徑。

5）房間溫度過低。空調系統電熱棒功率低，房間溫度上限只達22℃，顯然不能滿足染病動物保暖的需要；處于進風口、回風口、門縫等地方的動物，由于風力大、風速高，更增加其寒冷感。由于飼養管理不妥和氣候突變等應激因素，使腸道的正常菌群受到破壞，使腸道內的大腸桿菌數量急劇增加[2]。發病初期，低溫加劇了疾病的進程。

6）屏障設施設計上的缺陷。屏障環境沒有做到“恒溫恒濕”。發病時恰逢冬季，室內寒冷干燥，即使加裝了電熱棒，但未安裝“加濕器”，溫度有所提高但相對濕度卻更低了；通風換氣設計也不合理，換氣次數偏低，不能完全將室內污濁空氣及時排出，使有毒物質與病原在室內堆積；回風管沒有安裝止逆閥，不可避免會出現排風逆流造成區間的相互污染現象。設計上的缺陷為疾病的擴散蔓延提供了便利。

7）經驗不足未能準確判斷。發病初期，僅考慮是氣溫低動物感冒而腹瀉，沒有深入分析病因，也沒有綜合進行干預與治療，導致疫病進一步擴散。管理經驗的不足，成了貽誤治療時機的最好噱頭。

6 討論

6.1 病原大腸桿菌是人和許多動物腸道中最主要且數量最多的一種細菌，周身鞭毛，能運動，無芽胞，能發酵多種糖類產酸產氣，主要生活在大腸內。大腸桿菌病屬人畜共患性疾病，一年四季均可發生，各種年齡兔均易感，尤其以1~2月齡仔兔易感[3]。此次由仔豬引發的大腸桿菌病蔓延到大兔及其哺乳仔兔，也驗證了這一觀點，說明其毒性大，兩者的大腸桿菌病具有同源性與關聯性。分離鑒定結果為陰性，是由于前期使用了抗生素治療的原因，可見大腸桿菌對大部分抗生素高度或中度敏感[4]。

動物皮膚霉菌病是一種真菌傳染病。霉菌不是疾病的直接病原體，而是通過毒害飼料而引起的，侵害動物的皮膚和被毛[5]。主要通過接觸傳染，兔舍采光和通風不良均可導致發病[6]。可見疾病的擴散與該兔舍換氣次數低、通風不暢不無關系。種兔往往隱性感染，不表現臨床癥狀，難以辨別認識[7]。在繁殖期，母兔乳腺發育，利于真菌繁殖，從而在乳房周圍形成病灶。仔兔在哺乳時與母兔接觸，易被感染，幾天后表現臨床癥狀[7]。也與臨床發病順序哺乳母兔→哺乳仔兔→種公兔相吻合。該病對大部分抗生素和磺胺類耐藥，很大程度上加大了治療難度，且收效甚微。

6.2 加強日常管理

6.2.1 日糧營養不可過高基礎飼料中粗蛋白含量達18%，粗脂肪含量為3%，已能滿足大兔的日常需求。哺乳期母兔率先發病，說明與添加黃豆、營養過剩有關系。黃豆本就是一種產氣的食物，富含蛋氨酸、吸收卻低，吃多了就會脹氣。為了提高哺乳母兔泌乳能力，適量短期添加便可達到目的，不可貪多求長。家兔作為草食性動物，營養應盡量滿足其自然習性與天性，不可操之過急，正所謂“拔苗助長”會導致“欲速則不達”，當引以為鑒。

6.2.2 進入屏障所有物品應徹底消毒滅菌屏障設施內所需物品都應經過嚴格的滅菌處理，不能高壓的物品應制定科學的滅菌程序。提醒國產IVC籠盒生產廠家注意IVC材料的選擇，提高產品質量，確保IVC籠盒能經常性地承受高溫高壓滅菌。

6.2.3 防交叉感染不同設施之間、不同樓層之間、同一樓層不同房間之間都應制定嚴格的隔離防范措施，是防止疫病在動物間交叉感染的前提。動物自然感染疾病是由于全體直接接觸而傳播，也可以通過刷拭用具和飼養人員而間接傳播[2]。不同微生物控制等級的設施、動物、房間應有相對固定的工作人員進行操作、管理，切不可越俎代庖或身兼數職。飼養管理人員無菌概念的培養與防范隔離意識的提高是保證動物質量和動物試驗結果的關鍵因素。

6.2.4 切斷母嬰傳播途徑一旦發現母兔出現食欲廢絕、無排便等現象，立即離乳并隔離仔兔，盡早切斷母嬰傳播途徑。注意觀察仔兔精神狀況，發現問題及時處理。

6.2.5 提高日糧中粗纖維含量，適當補充青綠飼料或干草料家兔腸道發達，小腸與大腸的總長超過家兔體長的10倍以上，盲腸特別發達，對粗纖維消化能力強，所以，其日糧中粗纖維含量應不低于10%～15%[8]。日糧中粗纖維含量增加了，可增強胃腸蠕動能力，滿足家兔本身的習性。

6.3 及時查明原因、對癥治療將所有患病動物進行隔離、觀察，禁止與健康動物混居一籠或混居一室，以免造成交叉感染、疫情蔓延；對死亡動物剖檢，觀察其病理變化，同時采集胃內容物、腸內容物等樣本送實驗室培養、鑒定，及時查明發病原因，制定治療方案；除了藥物治療，要注意動物的保暖、補液和腹部按摩。保溫工作做得好，動物腹部就不會受涼，也可緩解腹痛。腹瀉者大多脫水，應及時給患病動物補液。給患病大兔早期做腹部按摩對幫助胃腸恢復蠕動、解決便秘、疏通胃腸積食或堵塞，是完全必要的措施，連續長時間的按摩往往會收到意想不到的奇效。通過聯合干預，除7只大兔、15只仔兔病情嚴重治療無效死亡外，其余26只均得以緩慢恢復，病程7~40 d。說明感染早期進行聯合干預有一定效果，重癥感染者療效不佳。

6.4 完善實驗動物設施的設計與布局實驗動物屏障設施的設計與建設是開展實驗動物工作的前提和基礎。各內環境指標應在設計圖紙中予以具體標明，以免留下管理隱患[9]。實踐表明，規范的布局和良好的建設對保證設施的正常運作、實施科學化管理、減少疾病的發生與傳播、提高實驗動物與動物試驗的質量意義重大。

6.5 混合感染事故由多因素共同作用引起這些因素包括設施設計因素、氣候因素、營養因素、管理因素等。如何加強日常管理，做到防患于未然，是防止動物疫病發生的重要舉措。

[1]國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T 14926.11-2001實驗動物大腸埃希菌0115a,c:K(B)檢測方法[S].2001.

[2]蔣金書.兔病學[M].北京:北京農業大學出版社,1991:248-249.

[3]方喜業.醫學實驗動物學[M].北京:人民衛生出版社,1995: 137.

[4]韓梅紅.兔大腸桿菌病病原分離鑒定與藥敏試驗[J].長江大學學報:自然科學版,2014,35(12):39-41.

[5]許家強.豬霉菌病和霉菌中毒[J].廣東畜牧獸醫科技,1986 (3):43.

[6]鮑文龍.家兔皮膚霉菌病的防治[J].四川畜牧獸醫,2000,27 (11):45.

[7]張景奎,白彥飛.家兔傳染性皮膚霉菌病的防治措施[J].養殖技術顧問,2009(10):142.

[8]孫靖.實驗動物學基礎[M].北京:北京科學技術出版社, 2005:132.

[9]翁順太,鄭忠東,蔡武衛,等.設計實驗動物屏障系統時存在的問題及對策[J].海峽預防醫學雜志,2008,14(6):76-78.

B

1003-4331（2017）03-0041-03

福建省引導性項目(No.2015Y0048)資助。

翁順太(1966-)，男，主任技師，實驗動物科研與管理，E-mail:wengshuntai@163.com。

*通信作者：潘晶晶，女，助理獸醫師，E-mail:ptcd0816@126. com。