FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內膜異位囊腫組織中的表達及意義

李曉貽，時燕萍，夏親華

(江蘇省中醫院，南京210039)

卵巢子宮內膜異位囊腫是指子宮內膜異位癥發病過程中，異位的子宮內膜進入卵巢皮質生長，逐步發展而導致的囊腫型病變[1]。研究發現，子宮內膜異位癥的發病可能與T細胞介導的免疫逃逸有關，被認為是子宮內膜異位癥最重要的機制之一[2]。調節性T細胞(Treg)在腫瘤、器官移植、自身免疫病和病毒性感染等疾病中發揮著重要作用，而叉頭狀轉錄因子3(FOXP3)是調控Treg細胞功能的主要轉錄因子[3]。B7同源體4(B7-H4)作為B7超家族的新成員，可通過抑制IL-2及T細胞增殖來抑制T細胞的免疫應答[4]，調節免疫活性，在腫瘤的發生發展中起著重要作用。但FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內膜異位囊腫發病中的作用尚不明確。2014年1月～2016年1月，我們檢測了30例卵巢子宮內膜異位囊腫患者囊腫組織FOXP3與B7-H4的表達，并與二者在卵巢癌組織及卵巢良性腫瘤組織中的表達進行比較，探討二者在卵巢子宮內膜異位囊腫發病中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院行手術治療的卵巢子宮內膜異位囊腫患者囊腫組織30例作為囊腫組，患者年齡(35.37±9.55)歲，囊腫直徑>5 cm，r-AFS分期>Ⅲ期，術后均經病理檢查證實為卵巢子宮內膜異位癥囊腫。選取行手術治療的卵巢癌患者卵巢癌組織20例作為癌癥組，患者年齡(37.95±12.73)歲，術后均經病理檢查證實為卵巢癌，臨床分期Ⅰc～Ⅱ期7例、Ⅲ～Ⅳ期13例。選擇行手術治療的良性卵巢腫瘤患者腫瘤組織20例作為良性組，患者年齡(37.80±10.65)歲，術后均經病理檢查證實為良性卵巢腫瘤。三組患者的年齡具有可比性。

1.2 病變組織FOXP3及B7-H4檢測方法 采用免疫組化Envision兩步法。將組織標本做成蠟塊后進行切片，采用二甲苯脫蠟，微波抗原修復后，加入一抗(1∶100稀釋鼠抗人FOXP3單抗或1∶150稀釋鼠抗人 B7-H4單抗)封閉4 ℃過夜；加入Envision后進行DAB顯色，蘇木素復染，樹脂封片。陰性對照采用PBS作為一抗。FOXP3主要表達于淋巴細胞的細胞核中，B7-H4 主要表達于上皮細胞的胞質和細胞膜中，二者均以出現棕黃色或黃色顆粒為陽性表達。首先按陽性細胞面積占全片的比例計分，≤5%計0分，>5%～25%計1分，>25～50%計2分，>50%～75%計3分，>75%計4分。其次按著色強度計分，無色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕色為3分。二者相加為最終得分，以≥3分判定為陽性表達。

1.3 統計學方法 應用SPSS21.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組病變組織FOXP3及B7-H4表達比較 囊腫組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為76.7%(23/30)、80.0%(24/30)，癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為85.0%(17/20)、90.0%(18/20)，良性組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率分別為0、5.0%(1/20)。囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率均高于良性組(P均<0.05)，囊腫組與癌癥組病變組織FOXP3、B7-H4陽性表達率差異均無統計學意義(P均>0.05)。

2.2 FOXP3、B7-H4在卵巢子宮內膜異位囊腫組織中表達的相關性 卵巢子宮內膜異位囊腫組織中FOXP3、B7-H4表達呈正相關(r=0.915，P<0.05)。

3 討論

子宮內膜異位癥雖屬良性病變，卻具有近似惡性腫瘤的行為學特點，如侵襲、種植、遠處轉移等。研究發現，子宮內膜異位癥發病后，有15%的內膜細胞可在離開宮腔后避開機體的免疫監視，而在子宮體以外的地方存活，導致各種異位病變的發生，這一組織學變化被認為與免疫逃逸機制有關。如異位子宮內膜進入卵巢皮質生長，長期發展則可導致卵巢子宮內膜異位囊腫的發生[1]。但卵巢子宮內膜異位囊腫的發病是否與免疫逃逸有關，尚不明確。

FOXP3作為除CD4、CD25分子外的T細胞特征性標志物，可以調節T細胞的功能[5]。研究發現，FOXP3可以抑制T細胞因子轉錄，可以通過直接抑制核轉錄因子κB(NF-κB)和T細胞核因子(NFAT)的活性，或通過競爭性結合NFAT的DNA結合位點，從而抑制T細胞的細胞因子表達[6]。FOXP3在腫瘤細胞中可起到T細胞的作用，是腫瘤細胞免疫逃逸的機制之一[7]。研究表明，FOXP3可通過影響調節性T細胞的抑制功能，發揮免疫抑制的作用[8]。本研究發現，囊腫組及癌癥組病變組織FOXP3陽性表達率均高于良性組，考慮其原因可能為子宮內膜異位囊腫與卵巢癌在轉移行為學上相似、與FOXP3免疫逃逸有關所致。

B7-H4是通過生物信息學新發現的屬于B7家族的一種協同刺激因子[9]。B7-H4 mRNA在人體的腎、肝等器官中廣泛存在[10]，作為細胞弱化因子，可通過負向調節T細胞來讓腫瘤細胞避免被攻擊，為腫瘤生長提供條件。B7-H4與一個未知的T細胞受體結合，進而抑制腫瘤特異性T細胞的活化和增殖，從而幫助腫瘤細胞逃過機體免疫系統的監視及殺傷。Shi等[11]研究發現，腫瘤上皮細胞過表達B7H4蛋白不僅具有免疫抑制的作用，還能促使上皮細胞突變，導致腫瘤形成。雖然 B7H4 mRNA分布廣泛，然而正常組織中B7-H4蛋白的轉錄或翻譯過程受到嚴格調控，因此其表達的蛋白在正常組織中表達較少[12]。研究表明， B7-H4蛋白移植入小鼠體內后，可使小鼠的腫瘤細胞增殖，并抑制腫瘤細胞的凋亡，表明其具有抑制腫瘤細胞凋亡的作用。相關研究表明，阻斷 B7-H4 表達可增強癌組織內免疫細胞的殺傷力[13]。另外，B7-H4抗體也可通過抑制IL-10/Treg依賴性來抑制小鼠或人體T細胞反應，從而達到治療自身免疫性疾病的目的，也說明B7-H4有削弱機體免疫反應的作用[14]。研究表明，B7-H4可通過促進上皮惡性轉化、腫瘤形成及抑制腫瘤細胞凋亡等作用促進卵巢癌的發生發展。但B7-H4在卵巢子宮內膜異位囊腫發病中的作用尚不明確。本研究發現，囊腫組及癌癥組病變組織B7-H4陽性表達率均高于良性組，表明卵巢子宮內膜異位囊腫及卵巢癌組織中B7-H4均明顯高于卵巢良性腫瘤組織，考慮B7-H4也可能通過免疫逃逸使子宮內膜上皮細胞逃過機體免疫從而種植轉移。

大量研究證實，在卵巢癌組織中，巨噬細胞及卵巢癌細胞均表達B7-H4。巨噬細胞表面的B7-H4可將FOXP3+、CD25+、CD4+T細胞的抑制信號傳遞給外來抗原，此外巨噬細胞分泌的趨化因子22也可以讓T細胞定向轉移至腫瘤微環境中。因此，FOXP3及B7-H4在免疫逃逸機制中具有協同作用。本研究結果顯示，OXP3和B7-H4在卵巢子宮內膜異位囊腫和卵巢癌中均為高表達，且二者表達呈正相關。因此，FOXP3和B7-H4可能成為診斷子宮內膜異位囊腫的新靶點。