禽腫瘤病診斷

趙鵬建，朱文浩

（山東省沂南縣畜牧獸醫(yī)局，山東 沂南276300）

禽腫瘤病診斷

趙鵬建，朱文浩

（山東省沂南縣畜牧獸醫(yī)局，山東 沂南276300）

1 實驗材料與方法

1.1 病料來源 9只病雞均為某大型雞場的19周齡肉種雞。病雞精神沉郁、衰弱，漸行性消瘦，雞冠蒼白，腿部有黃豆大小的血管瘤，大部分血管瘤頂部結(jié)痂，呈黑色。

剖檢可見病雞肝臟、脾臟、腎臟、睪丸或者卵巢腫大，有的肝臟或者脾臟的體積是正常的2到3倍，其肝實質(zhì)易碎，被膜下和實質(zhì)中有大小不等的灰白色結(jié)節(jié)。

根據(jù)病理變化，懷疑雞患J亞型禽白血病（AL）或禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病（RE）。

1.2 病料處理 取病雞肝臟、脾臟、卵巢（睪丸）等組織，用滅菌PBS清洗掉組織外部的血液等雜質(zhì)，再加入適量的PBS研磨病料。將研磨的組織液反復(fù)凍融3次，以8 000 r/min離心后取上清液，用上清液提取病毒DNA。

1.3 PCR檢測 根據(jù)ALV、ALV-J和REV序列分別設(shè)計1對特異性引物。

按照天根DNA提取試劑盒說明提取組織上清液中的DNA，用設(shè)計的特異性引物檢測組織中是否含有ALV、ALV-J或REV的DNA。

將擴(kuò)增呈ALV、ALV-J或者REV陽性的PCR產(chǎn)物與pMD-18 Vecter連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，挑取陽性菌落進(jìn)行酶切和PCR鑒定，同時將陽性克隆送測。

1.4 血清學(xué)檢測 從發(fā)病雞場采病雞血12份，按照常規(guī)方法分離血清，用ALV-J和REV抗體檢測試劑盒檢測血清中的相應(yīng)抗體。

2 檢測結(jié)果

2.1 PCR檢測結(jié)果 以組織研磨液上清提取的DNA為模版，分別進(jìn)行ALV、ALV-J和REV的PCR擴(kuò)增，同時設(shè)陰陽性對照。檢測結(jié)果顯示，所檢測的4份樣品中，3份樣品為REV弱陽性，1份樣品為REV陽性。禽白血病通用引物檢測，4份樣品均為陽性，ALV-J亞型引物檢測中3份樣品呈陽性。

將PCR呈陽性的部分樣品轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌后測序，經(jīng)過序列對比分析，證實REV引物和ALV-J引物所擴(kuò)增出的產(chǎn)物確實為網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒和禽白血病病毒。

2.2 血清學(xué)檢測結(jié)果 抗體檢測結(jié)果表明所檢測的12份樣品中，REV抗體呈陰性，而同雞場的病料抗原檢測為陽性，其提示該雞場出現(xiàn)的RE可能是REV垂直傳播所致。

在所檢測的12份樣品中，2份樣品呈ALV-J抗體陽性，10份樣品呈ALV-J抗體陰性。抗原檢測發(fā)現(xiàn)該場存在ALV-J病毒。根據(jù)抗原檢測陽性而抗體陰性，初步推斷可能存在ALV-J垂直傳播情況，其父母代或祖代可能攜帶ALV-J。

3 結(jié)果分析

對REV和ALV-J亞型的混合感染僅從病理變化或肉眼上很難作出判定，對其需借助病原學(xué)檢測和抗體水平監(jiān)測加以確認(rèn)。

減少和消除REV、ALV-J的危害，做好種群的凈化工作非常必要。種雞場的凈化可以從以下幾個方面著手：淘汰REV和ALV-J陽性雞群，防止病毒擴(kuò)散；嚴(yán)格控制活疫苗中REV和ALV-J的污染。如果活疫苗有外源病毒污染，不僅達(dá)不到預(yù)期免疫效果，外源病毒還會給雞場帶來更大的危害。潔凈度高、無外源病毒污染的SPF雞胚生產(chǎn)出來的活疫苗相對可靠，制備活疫苗時應(yīng)做好SPF雞胚的篩選。

S858.36

C

1001-8964（2017）09-0047-02

2017-07-25