視黃醇結合蛋白4在妊娠期糖尿病孕婦中表達與胰島素抵抗關系

郭 永，付竹梅

（山東省濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

視黃醇結合蛋白4在妊娠期糖尿病孕婦中表達與胰島素抵抗關系

郭 永，付竹梅

（山東省濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

目的妊娠期糖尿病產婦機體中視黃醇結合蛋白4（RBP4）的表達及其與胰島素抵抗之間的關系分析。方法用酶聯免疫吸附法檢測妊娠期糖尿病孕婦32例（GDM組）、糖耐量正常孕婦30例（正常妊娠組）血液中的RBP4濃度，借助葡萄糖氧化酶法、放射免疫法對兩組產婦空腹狀態下的胰島素（FINS）濃度、血糖（FPG）濃度等進行測量，然后對胰島素的抵抗指數（HOMA-IR）進行計算。采用熒光定量PCR技術、蛋白免疫印跡法對兩組產婦胎盤RBP4 mRNA、蛋白表達等進行檢測，并且分析GDM組胎盤組織RBP4 mRNA及蛋白表達與產婦血清RBP4、HOMA-IR之間的關聯。結果（1）對照組產婦血清RBP4以及FINS、FPG等水平、HOMA-IR均低于GDM組，有統計學差異，P＜0.05；（3）對照組產婦胎盤組織RBP4 mRNA、蛋白表達顯著低于GDM組，有統計學差異，P＜0.05；（3）GDM組胎盤組織RBP4 mRNA、蛋白表達與HOMA-IR均具備相關性，同時血清RBP4和HOMA-IR也具備顯著的相關性，P＜0.05；但是胎盤組織RBP4 mRNA、蛋白表達與產婦血清RBP4水平未表現出相關性，P＞0.05。結論GDM產婦胎盤組織內的RBP4 mRNA出現高表達，且血清RBP4異常升高，提示產婦可能發生了胰島素抵抗機制，臨床應給予高度重視。

妊娠期糖尿病；視黃醇結合蛋白4；胎盤；胰島素抵抗

妊娠期糖尿病（GDM）是指妊娠期間首次發生或發現糖代謝異常[1]，是妊娠期常見的并發癥之一，嚴重危害母兒健康。GDM的發病機制比較復雜，尚未完全闡明，其中胰島素抵抗、胰島β細胞功能異常是GDM重要的發病機制。RPB4屬于最新發現的一種細胞因子，主要由機體中的脂肪細胞所分泌，與胰島素抵抗密切相關[2]，但其與GDM的關系報道較少。本研究對GDM孕婦血清及胎盤中RPB4的表達進行檢測，以探討其在不同組織中與胰島素抵抗的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年12月至2016年4月在濰坊市婦幼保健院產科門診進行前檢，并選擇期剖宮產手術的32例GDM孕婦，視為GDM組，平均年齡是（28.0±1.9）歲，平均孕周（38.3±1.2）周，平均體重指數（27.3±1.2）kg/m2；隨機抽取同期血糖正常，且行剖宮產手術的30例產婦作為對照組，平均孕周（37.8±0.9）周，平均年齡（26.5±1.5）歲，平均體重指數（27.3±1.3）kg/m2。在年齡、體重指數、孕周等資料上，兩組孕婦比較基本一致（P＞0.05），具有可比性。兩組產婦均為單胎，且未合并其他疾病及并發癥，無糖尿病家族史，剖宮產手術指征為臀位、巨大兒或瘢痕子宮[3]。此次研究通過我院倫理委員會的批準，且所有對象均已經知情，簽訂了同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 本次研究所有的標均采集時間為剖宮產術前24 h內，分別在兩組產婦空腹狀態下抽取4 mL肘靜脈血，對血清進行分離，-80℃保存待測。分娩后30 min內取約1 cm× 1 cm×1 cm的胎盤母體面中央組織，反復漂洗后分裝于無菌離心管中，-80℃保存待用。

1.2.2 實時熒光定量PCR技術檢測兩組孕婦胎盤組織中RBP4 mRNA的表達：首先，提取胎盤組織樣本的總RNA，然后再將其逆轉錄為cDNA后，以此作為一個新的模板；按照cDNA的序列來對熒光定量PCR引物進行設計，并對RBP4基因表達情況進行測定；RBP4上游引物為5′-TACTCCTTCGTGTTTTCCCGG-3′，下游引物5′-TAACCGTTGTGGACGATCAGC-3′；β-actin上游引物為5′-CTTTTCCAGCCTTCCTTCTTGG-3′，下游引物為5′-CAGCACTGTGTTGGCATAGAGG-3′。以上引物均由上海生工生物丁程有限公司合成。按照熒光定量試劑盒標準操作方法操作。

1.2.3 蛋白印跡法檢測RBP4蛋白表達蛋白樣本按蛋白裂解液說明書抽提、濃縮后取得，對其進行電泳后，將蛋白樣本轉到硝酸纖維素膜上（4℃，275 mA，120 min），采取4℃的封閉液進行封閉，然后在加入比例為1：100的抗4℃孵育進行過夜，第二天將一抗棄去后進行洗滌；然后再次加入比例為1:2000二抗（羊抗兔抗體為北京博奧森生物技術有限公司產品）孵育2小時后洗滌。增強化學發光法（ECL顯影），X線曝光30秒，顯影后清水漂洗、定影，洗片后用激光掃描儀進行定量分析。以葡萄糖磷酸脫氫酶（GAPDH）為內參照物，RBP4蛋白與GAPDH的條帶灰度值的比值表示RBP4蛋白表達水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析處理，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對比兩組產婦血清指標水平情況

妊娠期糖尿病組32例產婦血清中的RBP4水平、FPG水平以及FINS水平分別是（27.4±1.5、5.5±0.8、12.2±1.3）及HOMA-IR（2.6±0.4）均顯著高于對照組（18.7±2.1、3.8±0.5、7.9±0.6、1.7±0.3，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 比較兩組孕婦胎盤組織中RBP4 mRNA以及RBP4的蛋白表達情況

妊娠期糖尿病組32例產婦胎盤組織RBP4mRNA的表達水平是（0.79±0.16），對照組為（0.48±0.05）；對照組孕婦胎盤組織中RBP4蛋白水平為（0.50±0.07），GDM組為（0.78±0.11），GDM組相比于對照組顯著要高（P＜0.05）。

2.3 GDM組產婦不同組織RBP4表達水平及其與HOMAIR的關系分析

GDM組30例產婦胎盤組織中RBP4蛋白水平及RBP4 mRNA表達水平與HOMA-IR均呈正相關（r=0.541、0.832，P＜0.05），而其與血清RBP4水平無相關性（r=0.045 P＞0.05）；血清RBP4水平與HOMA-IR呈正相關（r=0.793，P＜0.05）。

3 討 論

3.1 GDM孕婦血清RBP4水平變化及意義

RBP4基因位于染色體10q23～q24區域，含有6個外顯子和5個內含子，其是視黃醇結合蛋白家族成員，是一種單一肽鏈的蛋白質，主要由肝臟合成和分泌，其次是脂肪組織，其主要負責結合、轉運全反式視黃醇及其衍生物[4]。但RBP4參與胰島素抵抗的機制尚不明確，有研究表明，RBP能夠對胰島素所刺激的IRS1307號絲氨酸磷酸化進行抑制，可能通過干預IRS1-Ras-MAPK信號轉導通路，從而對酪氨酸磷的酸化發揮抑制作用，促進磷酸烯醇式丙酮酸激酶的基因表達而增加肝糖的輸出量，降低肌肉糖攝取量，進而影響胰島細胞的分泌等多種途徑引發胰島素抵抗[5]。

GDM組30例產婦血清RBP4濃度依舊存有爭議，在此次研究中，GDM組血清RBP4明顯比對照組的高，并且和HOMA-IR呈現出顯著的相關性關系，提示RBP4可能參與可GDM患者胰島素抵抗的發生。

3.2 GDM孕婦胎盤組織中RBP4的表達及臨床意義

血清中RBP4主要由肝臟合成和分泌，其次是脂肪組織[6]。有研究表明[7]GDM患者血清中RBP4的表達水平與皮下脂肪中RBP4-mRNA的表達水平有明顯相關性。關于GDM孕婦胎盤組織中RBP4表達變化的報道極少，本研究結果表明，與正常孕婦相比較，GDM組的RBP4 mRNA、蛋白表達水平等明顯高得多，且和HOMA-IR表現出相關性，由此可以看出，胎盤RBP4在GDM孕婦胰島素抵抗形成過程中可能發揮著重要作用。但其與血清RBP4水平變化無明顯相關性，考慮原因為胎盤組織并非視黃醇結合蛋白4唯一來源有關。而目前臨床尚不清楚GDM孕婦胎盤組織中視黃醇結合蛋白4表達升高的機制，仍需進一步深入探討。

總之，GDM孕婦胎盤組織及血清中RBP4表達水平均較高，提示其可能參與妊娠期糖尿病胰島素抵抗的形成，但其具體的發病機制仍需深入研究。

[1] American Diabetes Association.Standards of medical care in diabetes-2011[J].Diabetes Care,2011,34(01):s11-s61.

[2] Yan H,Chang X,Xia M.Serum retinol binding protein 4 is negatively related to beta cell function in Chinese women with non-alcoholic fatty liver disease: a cross-sectional study[J].Lipids Health Dis,2013,27(12):157.

[3] American Diabetes Association.Standards of medical care in diabetes-2011[J].Diabetes Care,2011,34(01):s11-s61.

[4] 董金華,薛麗麗.視黃醇結合蛋白4在妊娠期糖尿病患者血清、臍血及胎盤組織中的表達及意義[J].中國醫藥導報,2016.13(35):80-83.

[5] 孫玉秀,魯云霞,王朝紅,等.視黃醇結合蛋白4與胰島素抵抗及2型糖尿病關系研究進展[J].山東醫藥,2014,54(12):87-89.

[6] 高秀秀,甘旭培,徐先明.妊娠期糖尿病孕婦胎盤中視黃醇結合蛋白4表達與胰島素抵抗和胰島素分泌功能的相關性.現代婦產科進展[J].2016,25(10):750-753.

[7] Kuzmicki M,Telejko B,Wawrusiewicz-Kurylonek N,et al. Retionalbinding 4 in adipose and placental tissue of women with gestational diabetes[J].Gynecol Endocrinol,2011,27(12):1065-1069.

本文編輯：劉帥帥

R714.256

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ISSN.2095-8803.2017.07.60.02

郭永，男，山東省臨朐縣人，主任醫師，大學本科，研究方向：婦產科高危疾病的診療