月夜菌菌絲生長特性的初步研究

陸 珠 李 玉* 張 波 王 旭

（1 吉林農業大學，教育部食藥用菌工程研究中心，吉林長春130118；2 延邊農業科學院，吉林延邊133000）

月夜菌（Lampteromyces japonicus）為擔子菌門（Basidiomycota）傘菌綱（Agariomycetes）傘菌目（Agaricales）小皮傘科（Marasmiaceae）臍菇屬（Lampteromyces）。新鮮子實體在黑暗條件下發熒光得名，因此特性又名發光菌[1]、月光菌[2]。因其毒性極強又被稱為毒側耳[3]，食后1 h 即可發病，主要癥狀為吐瀉、腹痛、下痢頻繁，眩暈、沉悶、呼吸緩慢，脈弱，心音微弱，嗜睡，重者呼吸困難等，如不及時搶救，會導致死亡[4]。月夜菌夏秋季生長于闊葉樹干或倒木上，主要分布于亞洲[5]。日本學者在月夜菌的子實體中提取出月夜菌素（illudin S），它是一類倍半萜類抗生素[6]，有研究表明月夜菌素具有抗菌和抗腫瘤效果，可醫治小白鼠的腹水癌[7～11]。月夜菌中提取的菌醇對霉菌具有明顯的抑制作用[12，13]，月夜菌菌絲體及其丙酮粗提物對線蟲有毒殺作用，是一類有應用前景的食線蟲真菌資源[14]。目前對月夜菌的藥理藥性研究較多，但尚未有人對夜月菌的生物學特性進行研究，導致月夜菌的人工栽培方面也進展緩慢，后續研究進展緩慢。筆者對月夜菌的生物學特性進行研究，以期為后續月夜菌人工栽培提供研究基礎。

1 材料與方法

1.1 供試材料供試月夜菌于2014年9月9日采于吉林省白山市撫松縣露水河，通過組織分離，PDA培養基純化獲得，菌種現存放于吉林農業大學菌物研究所。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同碳源對月夜菌菌絲生長的影響 分別設置葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精、乳糖各20 g為碳源處理，每個處理重復3次，用打孔器打出直徑為7 mm 的菌種塊，接于內徑為90 mm 的培養皿中央。利用十字交叉法測定菌落直徑，每隔24 h 觀察一次，并對菌絲生長速度、菌絲長勢等菌落特征進行詳細描述和記錄，直至菌絲長滿整個培養皿。采用WPS 表格對獲得數據進行整理，用SPSS Statistics V17.0軟件進行數據分析。

1.2.2 不同氮源對月夜菌菌絲生長的影響 分別設置硝酸銨、酵母浸粉、蛋白胨、尿素、氯化銨各2 g為氮源處理。每個處理重復3 次。接種、記錄、測定、分析方法同1.2.1。

1.2.3 不同溫度對月夜菌菌絲生長的影響 分別設置10℃、15℃、20℃、25℃、30℃六個處理。每個處理重復3次。接種、記錄、測定、分析方法同1.2.1。

1.2.4 不同pH 對月夜菌菌絲生長的影響 分別設置pH 5、6、7、8、9。每個處理重復3次。接種、記錄、測定、分析方法同1.2.1。

1.2.5 正交試驗 以碳源、氮源、pH和溫度為因素，根據四因素五水平的正交試驗設計原理，設計四因素五水平的正交試驗，具體方案見表1。（除溫度試驗外其他同1.2.1）通過極差分析獲得最佳組合。

2 結果與分析

2.1 不同碳源對月夜菌菌絲生長的影響由圖1可以看出月夜菌在葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、糊精和乳糖6 種碳源上均能生長，在乳糖培養基上菌絲長勢明顯減弱。由表2可以看出菌絲生長速度除果糖較慢以外，其他處理菌絲生長速度雖有差別但相差并不大。綜合菌絲長勢和菌絲生長速度認為葡萄糖、蔗糖和糊精是月夜菌可利用的較好碳源。

2.2 不同氮源對月夜菌菌絲生長的影響由圖2和表3 可以看出酵母浸粉是比較優良的氮源，氯化銨雖然菌絲生長速度較快但菌絲長勢偏弱。蛋白胨、尿素、硝酸銨菌絲生長速度較慢，菌絲長勢偏弱均不適宜作為夜月菌培養基的氮源。

表1 L25（54）正交試驗設計方案

表2 不同碳源對月夜菌菌絲生長的影響

表3 不同氮源對月夜菌菌絲生長的影響

2.3 不同溫度對月夜菌菌絲生長的影響由圖3和表4可以看出月夜菌在10～30℃均能生長，但不宜在10～20℃溫度培養。最適溫度為30℃，此溫度培養菌絲生長速度最快，菌絲長勢最強。由此可見，溫度對月夜菌菌絲生長影響較大。

圖1 不同碳源培養基上月夜菌菌絲生長情況

圖2 不同氮源培養基上月夜菌菌絲生長情況

圖3 不同培養溫度月夜菌菌絲生長情況

表4 不同培養溫度對月夜菌菌絲生長的影響

表5 不同pH對月夜菌菌絲生長的影響

2.4 不同pH 對月夜菌菌絲生長的影響由圖4 和表5 可以看出月夜菌在pH5.0～9.0 均能生長，pH 對夜月菌菌絲的生長影響較小，但月夜菌喜歡堿性環境，隨著pH 上升菌絲長勢和菌絲生長速度都有加強、加快，在pH 9.0 時菌絲生長速度最快，菌絲長勢最強。

2.5 正交試驗單因素試驗不能考慮到交互作用的影響作用，需要進行正交試驗，才能得出最終結果。試驗以碳源、氮源、溫度、pH組建四因素五水平的正交試驗，各試驗菌絲生長情況見圖5。由圖5可見第9 和第16 組菌絲均沒有生長，試驗結果直觀分析見表6。由表6 可以看出，溫度的極差最大為1.61，溫度是影響月夜菌菌絲生長速度的最主要因素，月夜菌菌絲生長的最佳組合為溫度25℃、pH5、糊精、蛋白胨。

表6 菌絲生長的正交試驗結果的直觀分析

圖4 不同pH月夜菌菌絲生長情況

圖5 不同組合菌絲生長情況

由表7 可以看出，溫度的F 值最大，然后依次為pH、碳源、氮源。四因素的顯著性差異大小為:溫度＞pH＞碳源＞氮源，這與直觀分析結果一致。

表7 菌絲生長的正交試驗結果的方差分析

3 小 結

通過對月夜菌菌絲生長所需的碳源、氮源、溫度和pH 的單因素試驗和正交試驗，得出月夜菌最佳生長條件是溫度25℃、pH5、碳源為糊精、氮源為蛋白胨。

月夜菌作為一種毒菌和藥用菌，研究者對其藥理藥性方面研究較多，藥理作用方面對抗腫瘤和抑菌活性、殺蟲作用研究較多[15]。但在其生物學特性、栽培配方、栽培方式等方面研究較少。對月夜菌生物學特性進行研究為更深入的研究及開發利用月夜菌提供基礎研究數據。