復方黃葵顆粒的薄層鑒別研究

賀 婕，張愛榮,姜建芬

(山西華元醫藥集團有限公司,太原 030032;*通訊作者,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

復方黃葵顆粒的薄層鑒別研究

賀 婕*，張愛榮,姜建芬

(山西華元醫藥集團有限公司,太原 030032;*通訊作者,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

目的 建立復方黃葵顆粒的定性鑒別方法。 方法 采用薄層色譜方法,對復方黃葵顆粒中黃蜀葵花、粉萆薢、虎杖、大黃、何首烏、姜黃進行定性鑒別。 結果 建立了復方黃葵顆粒中所含以上6種藥材薄層鑒別方法,供試品色譜中,在與對照物質相應的位置上顯相同顏色的斑點,且陰性無干擾。 結論 本試驗所確定的鑒別方法簡便、重復性好,可用于復方黃葵顆粒的質量控制。

復方黃葵顆粒； 薄層色譜； 黃蜀葵花； 粉萆薢； 虎杖； 大黃

復方黃葵顆粒的源處方是山東中醫藥大學附屬醫院張兆峰主任醫師治療前列腺炎的經驗方,臨床療效顯著。山西天星制藥有限公司開發,該方由黃蜀葵花、敗醬草、粉萆薢、虎杖、劉寄奴、姜黃、柴胡、大黃、白術、何首烏10味中藥組成,經提取加適量輔料制成顆粒劑,具有清熱解毒、利濕清濁、活血通絡、散瘀止痛的功效,適用于慢性前列腺炎及前列腺增生癥狀的改善。證見尿頻、尿急、尿痛、尿道灼熱,陰囊潮濕,尿后滴瀝,舌紅,苔黃或黃膩,脈滑等。為了有效控制該制劑產品的質量,以保證產品療效,我們對處方中相關藥材進行研究,建立包括黃蜀葵花[1,2]、粉萆薢[3]、虎杖、大黃[4]、何首烏、姜黃薄層鑒別方法。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

ZF-2三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠);AL204電子天平(Mettler公司)。

1.2 試藥

金絲桃苷對照品(批號111521-201205),大黃素對照品(批號110756-200110),大黃酚對照品(批號110796-201017),大黃對照藥材(批號121249-201304),虎杖對照藥材(批號120980-201005),何首烏對照藥材(批號120934-201104),粉萆薢對照藥材(批號121159-201103),姜黃對照藥材(批號121188-201103),以上對照品和對照藥材均購于中國食品藥品檢定研究院;甲醇、乙醇、乙醚、石油醚、冰醋酸、硫酸、三氯甲烷、氫氧化鈉、氨水、三氯化鋁均購自北京化工廠,正丁醇購自天津申泰化學試劑有限公司,茴香醛購自廣東翁江化學試劑有限公司,甲酸乙酯、甲酸購自天津市大茂化學試劑廠,以上均為分析純;復方黃葵顆粒(批號20140501、20140502、20140503),由山西天星制藥有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 黃蜀葵花的薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取復方黃葵顆粒1 g,研細,加甲醇10 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 取金絲桃苷對照品,加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 除黃蜀葵花外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.1.1項下方法制成陰性對照溶液。

2.1.4 黃蜀葵花的鑒別 按照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗,吸取上述三種溶液各2 μl,分別點于同一聚酰胺薄膜上,以50%冰醋酸為展開劑,展開,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,陰性對照液無干擾(見圖1)。

1.金絲桃苷對照品溶液;2-4.復方黃葵顆粒三批樣品;5.缺黃蜀葵花的陰性對照溶液圖1 黃蜀葵花的薄層色譜圖Figure 1 Thin layer chromatogram of Abelmoschi Corolla

2.2 粉萆薢的薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取復方黃葵顆粒6 g,研細,加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20 ml使溶解,用水飽和的正丁醇提取3次,每次20 ml,合并正丁醇液,用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次,每次15 ml,棄去堿液,再用正丁醇飽和的水洗滌3次,每次15 ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘渣加甲醇5 ml使溶解,作為供試品溶液。

2.2.2 對照藥材溶液的制備 取粉萆薢對照藥材1 g,按2.2.1項下方法制成對照藥材溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 除粉萆薢外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.2.1項下方法制成陰性對照溶液。2.2.4 粉萆薢的鑒別 按照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗,吸取上述三種溶液各10 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13 ∶7 ∶2)10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以新鮮配制的茴香醛-冰醋酸-硫酸(1 ∶100 ∶0.2)溶液,在100 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照液無干擾(見圖2)。

1.粉萆薢對照藥材溶液;2-4.復方黃葵顆粒三批樣品;5.缺粉萆薢的陰性對照溶液圖2 粉萆薢的薄層色譜圖Figure 2 Thin layer chromatogram of Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma

2.3 虎杖、大黃、何首烏的薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 取復方黃葵顆粒5 g,研細,加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20 ml使溶解,再加鹽酸2 ml,加熱回流30 min,立即冷卻,用乙醚提取3次,每次20 ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加三氯甲烷2 ml使溶解,作為供試品溶液。

2.3.2 對照藥材溶液的制備 分別取虎杖對照藥材0.2 g,大黃對照藥材0.2 g,何首烏對照藥材0.5 g,按2.3.1項下方法制成對照藥材溶液。

2.3.3 對照品溶液的制備 分別取大黃素、大黃酚對照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作為對照品溶液。

2.3.4 陰性對照溶液的制備 除虎杖、大黃、何首烏外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.3.1項下方法制成陰性對照溶液。

2.3.5 鑒別 按照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗,吸取供試品溶液、大黃素對照品溶液、大黃酚對照品溶液、大黃對照藥材溶液、虎杖對照藥材溶液各3 μl,何首烏對照藥材溶液6 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30-60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ∶5 ∶1)上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視,再置氨蒸氣中熏至斑點顯色清晰,日光下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上,日光下顯相同顏色的斑點,紫外光下顯相同顏色的熒光斑點,陰性對照液無干擾(見圖3)。

A.紫外光 B.日光1.大黃素對照品溶液;2.大黃酚對照品溶液;3.大黃對照藥材溶液;4.虎杖對照藥材溶液; 5.何首烏對照藥材溶液;6-8.復方黃葵顆粒三批樣品;9.缺大黃、虎杖、何首烏的陰性對照溶液圖3 虎杖、大黃、何首烏的薄層色譜圖Figure 3 Thin layer chromatogram of Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix,Rhei Radix Et Rhizoma and Polygoni Multiflori Radix

2.4 姜黃的薄層鑒別

2.4.1 供試品溶液的制備 取復方黃葵顆粒5 g,研細,加乙醚50 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加無水乙醇2 ml使溶解,作為供試品溶液。

2.4.2 對照藥材溶液的制備 取姜黃對照藥材0.2 g,按2.4.1項下方法制成對照藥材溶液。

2.4.3 陰性對照溶液的制備 除姜黃外,按處方取其他藥材制備陰性樣品,按2.4.1項下方法制成陰性對照溶液。

2.4.4 鑒別 按照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗,吸取上述三種溶液各10 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(96 ∶4 ∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照液無干擾(見圖4)。

1.姜黃對照藥材溶液; 2-4.復方黃葵顆粒三批樣品;5.姜黃的陰性對照溶液圖4 姜黃的薄層色譜圖Figure 4 Thin layer chromatogram of Curcumae Longae Rhizoma

3 討論

試驗對處方中的敗醬草、劉寄奴、柴胡、白術藥材也進行薄層鑒別方法的研究,但通過篩選,特征斑點不明顯或專屬性不強,故未在正文中列入。

曾參考《中國藥典》黃蜀葵花薄層鑒別項下方法,樣品用鹽酸乙醇溶液加熱回流,硅膠G薄層板上展開,展開劑選擇甲苯-乙酸乙酯-甲酸混合溶液,過程復雜且效果不理想。經摸索,樣品經甲醇超聲處理,選用聚酰胺薄膜,以50%冰醋酸為展開劑,斑點清晰,陰性無干擾,故最終確定此方法。

通過本實驗,對復方黃葵顆粒中黃蜀葵花、粉萆薢、虎杖、大黃、何首烏、姜黃六味藥材制定了薄層鑒別方法,方法操作簡便、專屬性強、重復性好,對復方黃葵顆粒的質量控制及質量標準的進一步研究具有指導意義,也為類似制劑或成分的鑒別和含量測定提供參考。

[1] 李春梅,王濤,張祎,等.中藥黃蜀葵花化學成分的分離與鑒定(iv)[J].沈陽藥科大學學報,2010,27(9):712-714.

[2] 李春梅,安雅婷,王濤,等.中藥黃蜀葵花化學成分的分離與鑒定(III)[J].沈陽藥科大學學報,2011,28(7):520-525.

[3] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2015:289.

[4] 陳巧華,范世明,包國榮,等.一清顆粒薄層鑒別的改進[J].中國藥品標準,2005,6(4):53-56.

[5] 王利麗,周志遠,陳隨清.敗醬草質量標準研究[J].中醫學報,2012,27(172):1150-1152.

[6] 李春梅,吳春華,王濤,等.中藥北劉寄奴中化學成分的分離與鑒定[J].沈陽藥科大學學報,2012,29(5):331-336.

Study on the TLC of compound Huangkui granule

HE Jie*,ZHANG Airong,JIANG Jianfen

(ShanxiHuayuanPharmaceuticalGroupCo.,Ltd,Taiyuan030032,China;*Correspondingauthor,E-mail:hejie_huayuan@163.com)

ObjectiveTo establish qualitative identification methods of compoud Huangkui granules.MethodsThin layer chromatography(TLC)was used to qualitatively identify Abelmoschi Corolla,Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma,Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix,Rhei Radix Et Rhizoma,Polygoni Multiflori Radix,Curcumae Longae Rhizoma in compoud Huangkui granules.ResultsThe identification methods of six components were successfully established.The chromatography of samples and standard sample showed that spots with same color were observed in same position, and no interference was found in negative sample.ConclusionThe method is simple,reproducible,and can be used for quality control in compound Huangkui granules.

compound Huangkui granules； thin layer chromatography； Abelmoschi Corolla; Dioscoreae Hypoglaucae Rhizoma;Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix; Rhei Radix Et Rhizoma

賀婕，女，1978-12生，碩士，藥師，E-mail:hejie_huayuan@163.com

2016-12-17

R927.2

A

1007-6611(2017)03-0260-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.03.013

河北省衛生計生委辦公室醫學科學研究重點課題計劃項目(20150449)