桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃液態(tài)深層發(fā)酵的影響

姜福春，馮 杰，張赫男，吳 艷，吳 迪，唐傳紅，楊 焱*

（1農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家食用菌工程技術(shù)研究中心，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，上海201403；2上海海洋大學(xué)，上海 201306；3上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240）

桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃液態(tài)深層發(fā)酵的影響

姜福春1，2，馮 杰1，張赫男1，吳 艷3，吳 迪1，唐傳紅1，楊 焱1*

（1農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家食用菌工程技術(shù)研究中心，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，上海201403；2上海海洋大學(xué)，上海 201306；3上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240）

為研究?jī)煞N桑樹(shù)原料（桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝）水提物對(duì)桑黃液態(tài)深層發(fā)酵的影響，對(duì)平板培養(yǎng)基桑黃菌絲體生長(zhǎng)的關(guān)鍵影響因子進(jìn)行篩選，得出桑樹(shù)粉可作為生長(zhǎng)因子；通過(guò)種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)試驗(yàn)，探究桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝對(duì)桑黃液態(tài)發(fā)酵的影響。結(jié)果表明：3%桑樹(shù)粉及2%桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體在種子培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)具有促進(jìn)效果，且該條件下的菌絲體干重達(dá)到最大，分別為7.75 g/L和5.16 g/L，較空白對(duì)照分別提高了133.43%和55.42%。發(fā)酵培養(yǎng)基中，3%桑樹(shù)粉促進(jìn)桑黃菌絲體生長(zhǎng)作用最顯著，最大生物量達(dá)到17.15 g/L，較空白提高了16.43%，而桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。該兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃液態(tài)深層發(fā)酵的研究，能為桑黃液體發(fā)酵及規(guī)?；a(chǎn)提供參考依據(jù)。

桑樹(shù)水提物；桑黃；液態(tài)深層發(fā)酵；等離子體光譜儀

桑黃（Sɑnghuɑngporussɑnghuɑng）俗稱桑黃菇，桑耳，是近年來(lái)開(kāi)發(fā)的一種多年生藥用真菌［1-3］，最早收載于李時(shí)珍《本草綱目》中，據(jù)《藥性論》記載：桑黃性寒，味微苦，在傳統(tǒng)中醫(yī)藥中用于治療盜汗、痢疾、血淋、脫肛瀉血、臍腹?jié)础㈤]經(jīng)、帶下、脾虛泄瀉等［4］；現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，桑黃具有抗腫瘤［5-7］、抗氧化［8］、降血糖［9］、增強(qiáng)免疫力［10］等功效，是國(guó)際公認(rèn)的最佳抗癌真菌之一。

目前，獲得桑黃提取物的途徑主要有野生采摘，人工固體栽培和液態(tài)發(fā)酵三種方式。由于天然野生桑黃被大面積采集，使得桑黃資源嚴(yán)重匱乏。同時(shí)，人工栽培桑黃的技術(shù)，還不是很成熟，加之桑黃培養(yǎng)條件較為苛刻，生長(zhǎng)周期需要5—6個(gè)月，這使得桑黃來(lái)源不穩(wěn)定［11］。至今，適宜條件下的液體培養(yǎng)桑黃菌絲體需要10 d以上的時(shí)間，且其菌絲體生長(zhǎng)不良及菌絲體產(chǎn)量較少。同時(shí)，目前桑黃菌絲體深層發(fā)酵培養(yǎng)基僅僅是依靠碳氮源來(lái)篩選最佳培養(yǎng)基配方，急需開(kāi)發(fā)生長(zhǎng)周期短，產(chǎn)量高的培養(yǎng)基。有研究表明，Ma等［12］研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)Plackett-Burman設(shè)計(jì)法對(duì)影響桑黃液態(tài)培養(yǎng)7個(gè)營(yíng)養(yǎng)要素進(jìn)行篩選，并在此基礎(chǔ)上采用中心組合設(shè)計(jì)結(jié)合響應(yīng)面進(jìn)一步優(yōu)化得到最佳培養(yǎng)基配方，使得桑黃菌絲體干重提高到10.92 g/L。液體發(fā)酵培養(yǎng)具有菌絲體產(chǎn)量高、培養(yǎng)周期短、可控性好等優(yōu)點(diǎn)，更易于工業(yè)化持續(xù)大量生產(chǎn)，具有廣泛的市場(chǎng)前景。因此，采用液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)桑黃菌絲體代替子實(shí)體已成為當(dāng)務(wù)之急。

另外，吳亞召等［13］采用袋料栽培對(duì)秦巴山區(qū)野生桑黃進(jìn)行人工馴化研究，發(fā)現(xiàn)添加桑樹(shù)木屑的栽培培養(yǎng)基，培養(yǎng)結(jié)束獲得桑黃干品36 g/袋。呂英華［14］發(fā)現(xiàn)在桑黃原種培養(yǎng)基和栽培培養(yǎng)基中分別添加桑樹(shù)木屑45%和35%，對(duì)桑黃菌種的培育及出菇都有顯著的促進(jìn)作用。但桑樹(shù)木屑及其提取物是否對(duì)桑黃液態(tài)深層發(fā)酵有影響，目前還尚無(wú)研究報(bào)道?；诖?，本研究以桑黃菌絲體生物量為考察指標(biāo)，通過(guò)添加桑樹(shù)枝或桑樹(shù)粉水提物到平板培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)進(jìn)行研究，為大規(guī)模生產(chǎn)富含功能活性成分的優(yōu)質(zhì)桑黃菌絲體提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌種

桑黃（Sɑnghuɑngporus sɑnghuɑng）SH1，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所栽培獲得，菌種保存于中國(guó)微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心，標(biāo)本存放于上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所加工技術(shù)與發(fā)酵工程研究室。

1.2 試驗(yàn)材料和主要設(shè)備

桑樹(shù)粉（桑樹(shù)粉為新鮮桑樹(shù)去皮的木質(zhì)部，粉碎為60—80目，購(gòu)自安徽亳州馬力藥業(yè)有限公司）、桑樹(shù)枝（桑樹(shù)枝為曬干放置一段時(shí)間的枝條，且枝條大小不均一，直徑0.1—0.5 cm，購(gòu)自浙江淳安千島湖桑都食用菌專業(yè)合作社）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂、馬鈴薯葡萄糖肉湯（均購(gòu)自美國(guó)BD公司）、酵母自溶粉（購(gòu)自安琪酵母股份有限公司）、葡萄糖、七水硫酸鎂、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、無(wú)水乙醇（均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、高壓滅菌鍋SS-325型（TOMY公司）、酶標(biāo)儀Biotek-Synergy HT型（美國(guó)Bio-Tek公司）、ZWY-2102雙層恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器制造有限公司）、Centrifuge 5810R高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司）、iCAP 6000等離子體發(fā)射光譜儀（美國(guó)Thermo Fisher公司）。

1.3 培養(yǎng)基

平板培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂3.9%，桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物，混合均勻，并用蒸餾水定容，于121℃，滅菌35 min。其中，桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物配制：將桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）添加到蒸餾水中，其固液比（g∶mL）1∶100，100℃提取1 h，棄渣，濾出的煮出液備用。

種子培養(yǎng)基：桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物，馬鈴薯葡萄糖肉湯2.4%，pH自然，于滅菌鍋中121℃，滅菌35 min。其中，桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物配置，方法同上。

發(fā)酵培養(yǎng)基：桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物，葡萄糖2%、酵母自溶粉1%、磷酸二氫鉀0.1%、七水硫酸鎂0.1%，pH自然，于滅菌鍋中121℃，滅菌35 min。其中，桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝（1%—3%）水提物配置，方法同上。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 培養(yǎng)條件

平板培養(yǎng)：從保存的母種試管中挑取0.03 cm2大小的桑黃菌絲塊接種于PDA培養(yǎng)基平板中部，于26℃恒溫培養(yǎng)15 d。

種子培養(yǎng)：用直徑為8 mm的打孔器取平板培養(yǎng)的桑黃菌塊6—7塊接種于種子培養(yǎng)基中。其中，250 mL三角瓶中裝液量100 mL，在26℃、150 r/min下培養(yǎng)7 d，即得種子液。

發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的種子液勻漿后以10%接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基中，其中，250 mL三角瓶中裝液量100 mL在26℃、150 r/min培養(yǎng)7 d，即得發(fā)酵培養(yǎng)液。

1.4.2 分析方法

1.4.2.1 菌絲體生長(zhǎng)速率測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法［15］。將接種于無(wú)菌的培養(yǎng)平板（Φ9 cm）內(nèi)的桑黃菌絲體培養(yǎng)第0—7天、第8—15天和第0—15天，通過(guò)十字交叉法測(cè)量菌絲體直徑，并計(jì)算第0—7天、第8—15天和第0—15天的桑黃菌絲體生長(zhǎng)速率。其計(jì)算公式為：

1.4.2.2 菌絲體生物量的測(cè)定

將發(fā)酵培養(yǎng)液于5 000 r/min離心20 min，用蒸餾水洗滌菌絲體重復(fù)離心3次，收集菌絲體沉淀，將所得菌絲體于60℃烘干至恒重，計(jì)算菌絲體干重。

1.4.2.3 礦物元素的分析

準(zhǔn)確稱取0.25 g試樣（精確至0.000 1 g），試樣置于150 m L PFA燒杯中，用PFA移液管沿杯壁加入2.5 mL氫氟酸，將壁上的樣品沖洗到燒杯底部，輕輕搖動(dòng)燒杯，使樣品和氫氟酸混在一起，然后緩慢滴加2 mL硝酸使樣品逐漸溶解，待劇烈反應(yīng)停止后，再加入1 mL高氟酸。在可控溫電熱板，95℃左右的溫度下，加熱約30 min，使樣品完全溶解至清亮，再加入5 mL鹽酸，用少許水沖洗燒杯壁，繼續(xù)加熱5 min，取下，冷卻至室溫，移入100 m L PFA容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，待測(cè)。

1.4.3 動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算及數(shù)據(jù)處理

添加不同濃度桑樹(shù)水提物的桑黃菌絲體比生長(zhǎng)速率根據(jù)參考文獻(xiàn)［16］計(jì)算得出。用Origin 8.5軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行插值計(jì)算，并求解兩種桑樹(shù)水提物添加下的菌絲體比生長(zhǎng)速率。采用Excel 2013軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Origin 8.5軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)繪圖分析。

2 結(jié)果與分析

研究表明，在桑黃菌株的培養(yǎng)過(guò)程中，菌株的生長(zhǎng)較緩慢，菌絲體生物量低，且較易染菌，是該領(lǐng)域研究者一直較為關(guān)注的問(wèn)題。本研究將兩種桑樹(shù)水提物添加到液體培養(yǎng)基對(duì)桑黃進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝對(duì)桑黃的菌絲生長(zhǎng)均具有一定的促進(jìn)作用。

2.1 兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)影響

以不同濃度的桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝加于PDA培養(yǎng)基中，每隔一定時(shí)間觀察桑黃菌株在平板培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況（圖1）。

圖1 桑黃菌株在平板上生長(zhǎng)情況Fig.1 Grow th characteristics of Sanghuangporus sanghuang on PDA medium

從圖1可以看出，在添加桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝的桑黃菌絲體生長(zhǎng)情況均優(yōu)于PDA培養(yǎng)基（即為空白對(duì)照組），且培養(yǎng)第15天時(shí)添加桑樹(shù)粉的桑黃菌落基本長(zhǎng)滿整個(gè)平板，而桑樹(shù)枝和空白對(duì)照均未長(zhǎng)滿，同時(shí)添加桑樹(shù)粉的菌絲體顏色比較亮黃。由此可知，桑樹(shù)粉對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的促進(jìn)作用比較顯著。同時(shí)，通過(guò)計(jì)算桑黃菌株在15 d培養(yǎng)周期中菌體生長(zhǎng)速度，發(fā)現(xiàn)其生長(zhǎng)速度存在較大差異（表1）。

由表1可知，由于桑黃菌絲體在第0—7天處于生長(zhǎng)適應(yīng)期，造成其生長(zhǎng)速度較緩，而桑黃菌株在第8—15天生長(zhǎng)速度較快，且菌絲體生長(zhǎng)速度最快為添加3%桑樹(shù)粉，達(dá)到0.70 cm/d，較空白對(duì)照提高了34.62%。且在第0—15天的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)，添加不同質(zhì)量濃度桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝的桑黃菌絲體生長(zhǎng)速度均大于空白對(duì)照。由此說(shuō)明，兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用，且桑樹(shù)粉的促進(jìn)效果優(yōu)于桑樹(shù)枝。

表1 不同培養(yǎng)基中桑黃菌絲生長(zhǎng)速度Table1 Differentmedium on the grow th rate of Sanghuangporus sanghuang mycelia cm·d－1

2.2 兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體在種子培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)影響

基于桑黃菌株在平板培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，考察不同濃度桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝添加于PDB培養(yǎng)基中對(duì)桑黃菌絲體液體生長(zhǎng)狀況（圖2）。

從圖2可以看出，兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)的促進(jìn)作用與平板培養(yǎng)一致，桑樹(shù)粉對(duì)桑黃菌絲體生物量產(chǎn)量的促進(jìn)效果優(yōu)于桑樹(shù)枝。同時(shí)，添加1%桑樹(shù)粉的菌絲體干重為7.28 g/L，相對(duì)于3%桑樹(shù)粉的最大菌絲體干重7.75 g/L相差甚小，兩者較空白對(duì)照分別提高了119.28%和133.43%。添加2%桑樹(shù)枝的菌絲體生物量達(dá)到5.16 g/L，較空白對(duì)照提高了55.42%。由此說(shuō)明，兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃液體菌絲體生長(zhǎng)均具有一定的促進(jìn)作用，1%桑樹(shù)粉的促進(jìn)效果要優(yōu)于2%桑樹(shù)枝?；诖耍M(jìn)一步探究添加1%桑樹(shù)粉及2%桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)的影響，通過(guò)階段取樣測(cè)試桑黃液體深層培養(yǎng)菌絲體的生長(zhǎng)曲線及菌絲體的比生長(zhǎng)速率（圖3）。

由圖3A可以看出，添加1%桑樹(shù)粉的桑黃菌絲體生長(zhǎng)遲緩期為第1—2天，第2—5天達(dá)到對(duì)數(shù)期，而2%桑樹(shù)枝對(duì)數(shù)期為第2—4天，且后期一直處于穩(wěn)定期。而空白對(duì)照組的桑黃菌絲體第1—2天為遲緩期，第2—4天為對(duì)數(shù)期，之后菌絲體的生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期。同時(shí)，對(duì)添加1%桑樹(shù)粉和2%桑樹(shù)枝的桑黃菌絲體的比生長(zhǎng)速率進(jìn)行求解（圖3B），所謂比生長(zhǎng)速率就是指每小時(shí)單位質(zhì)量的菌絲體所增加的菌絲體量，它是表征微生物生長(zhǎng)速率的一個(gè)參數(shù)，也是發(fā)酵動(dòng)力學(xué)中的一個(gè)重要參數(shù)。發(fā)現(xiàn)桑黃菌絲體達(dá)到最大比生長(zhǎng)速率先后順序分別為：1%桑樹(shù)粉＞2%桑樹(shù)枝＞空白對(duì)照，桑樹(shù)粉促進(jìn)桑黃菌絲體生長(zhǎng)最早達(dá)到最大比生長(zhǎng)速度，對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)促進(jìn)效果尤為顯著。

圖2 不同濃度桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝對(duì)種子培養(yǎng)基中菌絲體干重的影響Fig.2 Effect of different concentration ofm ulberry pow der and mulber ry branches on dry weight ofmycelia in the seed m edium

圖3 種子培養(yǎng)基中桑黃菌絲體生長(zhǎng)曲線Fig.3 Grow th curve of Sanghuangporus sanghuang mycelia in the seed medium

2.3 兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體在發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)影響

將不同濃度的桑樹(shù)粉及桑樹(shù)枝分別添加于發(fā)酵培養(yǎng)基中探究其對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)的影響（圖4）。

由圖4分析可知，不同濃度的桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)的促進(jìn)效果不同。不同質(zhì)量濃度桑樹(shù)粉對(duì)桑黃菌絲體干重影響由大到小的排序依次為：3%＞2%＞1%，且3%桑樹(shù)粉促進(jìn)桑黃菌絲體干重達(dá)到最大為17.15 g/L，且不同濃度桑樹(shù)粉促進(jìn)菌絲體生長(zhǎng)效果均優(yōu)于空白對(duì)照。同時(shí)，不同質(zhì)量濃度桑樹(shù)枝對(duì)菌絲體干重影響由大到小的排序依次為：2%＞1%＞3%，且2%桑樹(shù)枝的桑黃菌絲體干重達(dá)到最大為13.87 g/L?；诖?，同樣選擇添加2%桑樹(shù)枝和1%桑樹(shù)粉分析桑黃菌絲體在發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線及菌絲體的比生長(zhǎng)速率（圖5）。

圖4 不同濃度桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基中菌絲體干重的影響Fig.4 Effect of different concentration ofmulberry powder and mulberry branches on dry weight ofmycelia in the fermentation medium

圖5 種子培養(yǎng)基中桑黃菌絲生長(zhǎng)曲線Fig.5 Grow th curve of Sanghuangporus sanghuang mycelia in the ferm entation m edium

由圖5A可以看出，添加1%桑樹(shù)粉的桑黃菌絲體生長(zhǎng)遲緩期為培養(yǎng)前2 d，第2—6天處于對(duì)數(shù)期，而第2—6天2%桑樹(shù)枝為對(duì)數(shù)期，且后期兩者一直處于穩(wěn)定期。而空白對(duì)照組的桑黃菌絲體在前2 d為遲緩期，第2—5天為對(duì)數(shù)期，之后處于穩(wěn)定期。通過(guò)對(duì)桑黃菌絲體比生長(zhǎng)速率進(jìn)行求解（圖5B），發(fā)現(xiàn)桑黃菌絲體達(dá)到最大生長(zhǎng)速率先后順序分別為：1%桑樹(shù)粉＞2%桑樹(shù)枝＞空白對(duì)照，且1%桑樹(shù)粉促進(jìn)桑黃菌體生長(zhǎng)維持對(duì)數(shù)期周期較長(zhǎng)。由此可知，桑樹(shù)粉對(duì)于桑黃菌絲體液態(tài)生長(zhǎng)的促進(jìn)效果比較顯著，與平板培養(yǎng)和液體種子培養(yǎng)的效果一致。

2.4 桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝成分分析

采用等離子體光譜儀（Inductively coupled plasma，ICP）對(duì)桑樹(shù)粉水提物、桑樹(shù)枝水提物和添加兩種桑樹(shù)水提物培養(yǎng)獲得菌絲體中礦物元素的含量進(jìn)行分析（表2）。

表2 ICP測(cè)定樣品中礦物元素含量Table 2 Determ ination of m ineral elem ent content in the samp le by ICP%

由表2可以看出，桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝的水提物中的Ca、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Na、Zn這8種礦物元素的K、Mg含量存在較大差異，且桑樹(shù)粉水提物中的K、Mg元素含量高于桑樹(shù)枝水提物，而其他6種元素含量相當(dāng)。同時(shí)，添加桑樹(shù)粉水提物培養(yǎng)的桑黃菌絲體中K、Mg和Na這三種元素含量高于桑樹(shù)枝培養(yǎng)的菌絲體。由此說(shuō)明，礦物元素K、Mg對(duì)桑黃菌絲的生長(zhǎng)有很大的促進(jìn)作用，菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中易富集此類元素，但其促進(jìn)生長(zhǎng)的機(jī)理還有待探究。

3 結(jié)論與討論

本研究考察了兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)狀況的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種桑樹(shù)水提物可明顯促進(jìn)桑黃菌絲生長(zhǎng)，且不同濃度兩種桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)速度影響存在明顯差異，菌絲體生長(zhǎng)速度最大為添加2%桑樹(shù)粉，為0.70 cm/d，較空白對(duì)照提高了34.62%；桑黃種子培養(yǎng)基中，3%桑樹(shù)粉和2%桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體的生長(zhǎng)具有最優(yōu)的促進(jìn)效果，菌絲體干重分別達(dá)到為7.75 g/L和5.16 g/L，較空白對(duì)照分別提高了133.43%和55.42%。發(fā)酵培養(yǎng)基中，添加3%桑樹(shù)粉促進(jìn)桑黃菌絲體生長(zhǎng)最為顯著，達(dá)到最大生物量17.15 g/L，較空白對(duì)照提高了16.43%，而桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。

不同質(zhì)量濃度的桑樹(shù)粉或桑樹(shù)枝對(duì)桑黃菌絲體的生長(zhǎng)影響不同，桑樹(shù)粉對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)促進(jìn)作用尤為顯著。通過(guò)等離子體光譜儀對(duì)桑樹(shù)粉水提物、桑樹(shù)枝水提物和添加兩種桑樹(shù)水提物培養(yǎng)獲得的菌絲體中常規(guī)8種礦物元素含量進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)桑樹(shù)粉和桑樹(shù)枝的水提物中的礦物元素K、Mg含量存在較大差異，且桑樹(shù)粉水提物中的K、Mg兩種元素含量高于桑樹(shù)枝水提物，而其他6種元素含量相當(dāng)。同時(shí)，添加桑樹(shù)粉培養(yǎng)獲得的菌絲體中K、Mg、Na三種元素的含量要高于桑樹(shù)枝獲得的菌絲體。這將很有可能是導(dǎo)致平板培養(yǎng)、種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)中桑樹(shù)粉對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)促進(jìn)作用均優(yōu)于桑樹(shù)枝的原因。

另外，現(xiàn)代藥理學(xué)已經(jīng)證明桑樹(shù)水提物中含有三大營(yíng)養(yǎng)成分，即蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素，以及五大功能活性物質(zhì)，即黃酮類、植物甾醇、γ-氨基丁酸、生物堿、有益有機(jī)酸［17-21］。本研究中桑樹(shù)水提物對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，與桑樹(shù)水提物的營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)密切相關(guān)。

桑樹(shù)水提物促進(jìn)桑黃菌絲體生長(zhǎng)機(jī)理還需進(jìn)一步研究，同時(shí)對(duì)于菌絲體生物量的增產(chǎn)還需要更優(yōu)更完善的培養(yǎng)基配方，如篩選碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和桑樹(shù)水提物最優(yōu)組合培養(yǎng)基。這將為大規(guī)模生產(chǎn)富含功能活性成分的優(yōu)質(zhì)桑黃菌絲體提供參考。

［1］戴玉成.藥用擔(dān)子菌-鮑氏層孔菌（桑黃）的新認(rèn)識(shí)［J］.中草藥，2003，34：94-95.

［2］戴玉成，崔寶凱.藥用真菌桑黃種類研究［J］.北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（5）：1-6.

［3］ZHOU L W，JOSEF V，CONY D，et al.Global diversity and taxonomy of the Inonotus linteus complex（Hymenochaetales，Basidiomycota）：Sɑnghuɑngporus gen.nov.，Tropicoporus excentrodendri and T.guɑnɑc-ɑstensi s gen.et spp.nov.，and 17 new combinations［J］.Fungal Diversity，2016，77（1）：335-347.

［4］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2005：1-1264.

［5］DONGW，NING L，LUW D，et al.Tumor-inhibitory and liver-protective effects of Phellinus igniɑrius extracellular polysaccharides［J］.World Journal ofMicrobial Bioethanol，2009，25（4）：633-638.

［6］JEON T I，JUNG CH，CHO JY，et al.Identification of an anticancer compound against HT-29 cells from Phellinus linteus grown on germinated brown rice［J］.Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine，2013，3（10）：785-789.

［7］SUN J，CHEN Q J，ZHU M J，et al.An extracellular laccase with antiproliferative activity from the sɑnghuɑng mushroom Inonotus bɑumii［J］. Journal of Molecular Catalysis B：Enzymatic，2014，99：20-25.

［8］WANG Y，YU J X，ZHANG C L，et al.Influence of flavonoids from Phellinus igniɑrius on sturgeon caviar：Antioxidant effect and sensory characteristics［J］.Food Chemistry，2012，131（1）：206-210.

［9］ZOU X，GUO X，SUN M.pH control strategy in a shakenmini-bioreactor for polysaccharide production bymedicinalmushroom Phellinus linteus and its anti-hyperlipemia activity［J］.Bioprocess Biosyst Eng，2009，32（2）：277-281.

［10］LUO JG，LIU J，KE C，et al.Optimization ofmedium composition for the production of exopolysaccharides from Phellinus bɑumii Pilát in submerged culture and the immune-stimulating activity of exopolysaccharides［J］.Carbohydrate Polymers，2009，78（3）：409-415.

［11］LUO JG，LIU J，SUN Y，etal.Medium optimization，preliminary characterization and antioxidantactivity in vivo ofmycelialpolysaccharide from Phellinus bɑumii Pilát［J］.Carbohydrate Polymers，2010，（81）：533-540.

［12］MA X K，ZHANG H，PETERSON E C，et al.Enhancing exopolysaccharide antioxidant formation and yield from Phellinus species through medium optimization studies［J］.Carbohydrate Polymers，2014，107：214-220.

［13］吳亞召，吳未鳴，張文雋，等.秦巴山區(qū)野生桑黃人工栽培技術(shù)研究［J］.中國(guó)食用菌，2014，33（3）：20-22.

［14］呂英華.桑黃菌固體栽培和液體培養(yǎng)基優(yōu)化及人工栽培研究［D］.楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010.

［15］陳年春.農(nóng)藥生物測(cè)定技術(shù)［M］.北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1991.

［16］JIX J，HE H，JUN D，et al.Enhanced 2.3-butanediol production by Klebsiellɑoxytocɑusing a two-stage sgitation speed control strategy［J］. Bioresour Technol，2009，100：3410-3414.

［17］YOHJIE，SHIGEAKEM，KATSUNORIM，et al.Moranoline（1-deoxynojirimycin）fermentation and its improvem-ent［J］.Agric.Biol.Chem.，1985，49（4）：1119-1125.

［18］YOHJIE.Enzymatic synthesis of4-o-a-D-glucopyranosylmoranoline［J］.Agric.Biol.Chem.，1985，49（7）：2159-2165.

［19］YOHJIE，SHIGEAKIM，BOBUTOSHIO，et al.Enzymatic preparation of N-substituted 4-o-a-D-glucopyranosylm-oranoline derivatives［J］. Agric.Biol.Chem.1989，53（1）：61-68.

［20］YOSHIAKIY.Inhibition of intestinal a-glucosidase activity and postprandialhyperglycemiabymoranolineand its N-alkylderivatives［J］.Agric. Biol.Chem.，1988，52（1）：50-52.

［21］代君君，吳傳華，肖林珍，等.桑樹(shù)不同組織的水提物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（5）：466-469.

（責(zé)任編輯：張睿）

Effects ofmulberry extracts on liquid submerged fermentation of Sanghuangporus sanghuang

JIANG Fu-chun1，2，F(xiàn)ENG Jie1，ZHANG He-nan1，WU Yan3，WU Di1，TANG Chuan-hong1，YANG Yan1*
（1Key Lɑborɑtory of Edible Fungus Resourcesɑnd Utilizɑtion（South），Ministry of Agriculture，Nɑtionɑl Engineering Reseɑrch Center of Edible Fungi，Institute of Edible Fungi，Shɑnghɑi Acɑdemy of Agriculturɑl Sciences，Shɑnghɑi201403，Chinɑ；2Shɑnghɑi Oceɑn University，Shɑnghɑi201306，Chinɑ；3School of Agricultureɑnd Biology，Shɑnghɑi Jiɑo Tong University，Shɑnghɑi200240，Chinɑ）

To explore the effects of two kinds ofmulberry（mulberry powder andmulberry branches）extracts on liquid submerged fermentation of Sɑnghuɑngporus sɑnghuɑng，the key factor of the growth ofmycelia on PDA medium were investigated，and the result was mulberry powder extracts.Then seed culture and fermentation experimentswere done to explore the impact of mulberry powder and mulberry branches extracts on liquid submerged fermentation of Sɑnghuɑngporus sɑnghuɑng.The results showed thatmulberry powder and mulberry branches extracts had significant impacts on the growth of Sɑnghuɑngporus sɑnghuɑng.The yield ofmycelia was the highest when mulberry powder and mulberry branches extracts were 3%and 2%，reached 7.75 g/L and 5.16 g/L，which were 133.43%and 55.42%higher than the control.Highest yield of mycelia was reached 17.15 g/L when mulberry powder extracts were reached 3%in fermentation medium，while mulberry branches extracts had inhibitive effect.Moreover，this study presented a scientific basis for further liquid fermentation and facilitate production on larger scales.

Mulberry extracts；Sɑnghuɑngporus sɑnghuɑng；Liquid submerged fermentation；Inductively coupled plasma

S567.39

A

1000-3924（2017）01-056-07

2016-08-15

國(guó)家十二五科技支撐課題（2012BAD36B05）

姜福春（1990—），男，在讀碩士，研究方向：藥用真菌發(fā)酵。E-mail：fchjiang120＠163.com

*通信作者，楊焱（1970—），女，博士，研究員，研究方向：藥用真菌發(fā)酵與活性。E-mail：yangyan＠saas.sh.cn