林曉龍,佳木泰,郭海燕,王全喜,芒 來,賀銀鳳,吳 敬,*
(1.內蒙古農業大學食品科學與工程學院,內蒙古 呼和浩特 010018;2.內蒙古農業大學動物科學學院,內蒙古 呼和浩特 010018)
副干酪乳桿菌Q-1-4的篩選鑒定及抗菌物質特性分析
林曉龍1,佳木泰2,郭海燕1,王全喜2,芒 來2,賀銀鳳1,吳 敬1,*
(1.內蒙古農業大學食品科學與工程學院,內蒙古 呼和浩特 010018;2.內蒙古農業大學動物科學學院,內蒙古 呼和浩特 010018)
為獲得應用潛力較高的抗菌菌株,對內蒙古地區傳統乳制品中分離的8 株乳酸桿菌進行抗菌菌株篩選,獲得了一株具有廣譜抗菌活性的菌株(編號為Q-1-4)。經常規生理生化及分子生物學實驗,鑒定該菌為副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)。通過實驗排除有機酸和過氧化氫干擾后,L. paracasei Q-1-4發酵離心后的無細胞發酵上清液(cell-free fermentation supernatant,CFS)對鼠傷寒沙門氏菌Salmonella typhimurium CMCC50115仍具有抑制作用,且經蛋白酶處理后抗菌活性下降,說明L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質中含有蛋白類物質。其在pH 2.0~5.5范圍內對鼠傷寒沙門氏菌有抑制作用,且在此pH值范圍內該抗菌物質對熱穩定,對紫外線不敏感;與十二烷基硫酸鈉、乙二胺四乙酸共同作用效果好于單一作用,而其他的表面活性劑、有機溶劑、金屬離子對其無明顯影響;該抗菌物質具有一定的貯藏穩定性且抑菌譜較廣。
副干酪乳桿菌;抗菌物質;特性
近年來從干酪乳桿菌中劃分出一個新種即副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei),但對其在分類學中的地位一直存有爭議。L. paracasei具有耐酸和耐膽鹽能力,某些菌株還有抗過敏作用,能夠調節人體腸道菌群平衡、增強免疫功能、預防疾病等。另外,許多研究表明,在發酵干酪成熟的過程中,L. paracasei可以控制并促進幾種重要的芳香物質和風味物質形成[1-4], 改善乳制品質量。
目前對L. paracasie的研究多數集中在利用其益生特性開發新的乳制品方面,對其產生的細菌素的研究相對較少。Sa等[5]從生驢奶中分離篩選得到了1 株L. paracasei,并通過實驗證明了這株菌的細菌素粗提物對傷寒沙門氏菌Salmonella typhi有很強的抑制作用,其最小抑菌濃度為128 μL/mL;Hassan等[6]發現副干酪乳桿菌堅韌亞種L. paracasei ssp. tolerans L17不但可以作為酸面包發酵劑,而且還可以有效地抑制層生鐮刀菌Fusarium proliferatum M5689,禾谷鐮刀菌Fusarium graminearum R4053和白曲霉Aspergillium candidus C25等產毒素真菌。Lozo等[7]通過大量的實驗,從塞爾維亞高原地區自然發酵的半硬質干酪中分離得到的一株L. paracasei subsp. paracasei BGSJ2-8,能夠產生第2類細菌素BacSJ,是一種具有熱穩定性的未經修飾的的小分子肽。這些資料表明L. paracasei具有產生具有抑菌作用的蛋白類細菌素。L. paracasei所產細菌素具有很多優良特性,具有天然食品防腐劑的潛力,如某些菌株產生的細菌素在pH 3~12均有抑菌活性,對熱有極好的耐受性,在可在4 ℃條件下可貯藏6 個月或-20 ℃條件下貯藏長達12 個月[8]。
本研究通過抑菌實驗對分離自內蒙古傳統乳制品中的乳酸桿菌進行篩選,得到受試菌株L. paracasei Q-1-4,對其進行生理生化和分子生物學鑒定,并確定所產抗菌物質的性質,為開發具有新型生物防腐劑功能的細菌素產生菌提供了理論依據。
1.1 菌株、培養基與試劑
供試菌株:內蒙古牧民家庭手工制作的酸馬奶樣品中分離得到8 株乳酸桿菌;其他11株菌由內蒙古農業大學食品科學與工程學院提供,分別為:Bacillus cerecus CGMCC1.1686、Geobacillus stearo thermophilus GMCC1.1923、Streptococcus thermophilus CICC6038、Staphylococcus aureus CMCC(B)26112、Micrococcus luteus CMCC(B)28001、Listeria monocytogenes CMCC54002、Bacillus subtilis CGMCC1(B)63501、Pseudomonas fluarescens CGMCC1.1802、Salmonella enterica subsp. enterica CGMCC1.1859、Escherichia coli ATCC25922、Salmonella typhimurium CMCC50115。
MRS液體培養基、LB液體培養基、營養瓊脂培養基根據文獻[9-10]方法配制,固體培養基均添加1.5%~2%的瓊脂。制備培養基使用的試劑均為國產分析純。
蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、過氧化氫酶、溶菌酶 美國Sigma公司;其他化學試劑均為分析純;細菌基因組DNA提取試劑盒、普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 天根生化科技(北京)有限公司;DNA Marker 寶生物工程(大連)有限公司;單盒生化鑒定管 廣東環凱微生物科技有限公司。
1.2 儀器與設備
HPS-250生化培養箱 哈爾濱市東明醫療儀器廠;PB-10 pH計 賽多利斯科學儀器有限公司;HH.S1-Ni電熱恒溫水浴鍋 北京長安科學儀器廠;BPG-9240A精密鼓風干燥箱 上海一恒科學儀器有限公司;BCN-1360型生物超凈工作臺 哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司;KDC-140HR高速冷凍離心機 安徽中科中佳科學儀器有限公司。
1.3 方法
1.3.1 乳酸桿菌的活化及無細胞發酵上清液的制備
將半固體穿刺保存的實驗菌株接種于MRS液體培養基中,37 ℃培養24 h,按2%接種量傳3代,將最后一代液體培養物在冷凍離心機中以6 000 r/min的轉速離心15 min后,旋轉蒸發儀濃縮10倍,0.45 μm孔徑的濾菌器過濾除菌,得無細胞發酵上清液,置于4 ℃保存備用[11]。
1.3.2 指示菌菌懸液的制備
將保存的指示菌挑單菌落接入LB液體培養基中,37 ℃培養24 h后,以2%的接種量再活化兩代,第3代培養24 h后。用0.85%無菌生理鹽水梯度稀釋至菌懸液濃度為106CFU/mL,置于4 ℃保存待用。
1.3.3 抑菌活性的測定
抑菌實驗采用雙層瓊脂平板擴散法[12]。以Salmonella typhimurium CMCC50115為指示菌,測待檢菌中是否具有抑菌活性。
1.3.4 產抗菌物質乳酸桿菌的篩選及鑒定
1.3.4.1 菌株個體形態和生理生化鑒定
將半固體保存的實驗菌株接種于MRS液體培養基培養兩代。在固體培養基上劃線培養,挑取單菌落,革蘭氏染色后在光學顯微鏡下觀察形態并對篩選出的乳酸桿菌做生理生化實驗和糖發酵實驗。根據《常見細菌系統鑒定手冊》[13]和《乳酸細菌分類鑒定及實驗方法》[14]中描述的特征進行分析鑒定。
1.3.4.2 分子生物學鑒定
根據細菌基因組D N A提取試劑盒中說明書進行總D N A提取,并以此D N A為模板,加入通用引物進行P C R擴增,正向引物為2 7 f:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’;反向引物為1495r:5’-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3’。PCR擴增體系為25 μL:上下游引物各1 μL,DNA模板1 μL,Ex Taq mix 12.5 μL,ddH2O 9.5 μL,PCR的反應條件:94 ℃預變性5 min,94 ℃變性1 min,58 ℃復性1 min,72 ℃延伸2 min,30 次循環,最后72 ℃延伸5 min。
將PCR擴增產物委托上海生工生物工程股份有限公司測序及雙向拼接后,在NCBI上用BLAST模塊進行同源性比對,獲得數據后使用DNAStar軟件中Megalign程序繪制系統發育樹并進行分析。
1.3.5 Q-1-4所產抗菌物質的確定
1.3.5.1 酸及酸性末端產物作用的排除
為排除酸性末端產物的干擾,將濃縮10倍的無細胞發酵上清液(cell-free fermentation supernatant,CFS)pH值調至5.0,以相同pH值的乳酸和乙酸為對照,進行抑菌實驗。
1.3.5.2 過氧化氫作用的排除
乳酸桿菌代謝產生的過氧化氫也可抑制細菌的生長[15]。將過氧化氫酶溶解并按終質量濃度為1 mg/mL加入到排酸后的CFS中,37 ℃水浴2 h后沸水煮沸5 min使酶滅活,進行抑菌實驗。
1.3.5.3 蛋白酶對抗菌物質活性的影響
取5份等量的CFS,分別將pH值調至7.6、6.5、6.2、7.0、2.0,依次為胰蛋白酶、溶菌酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K和胃蛋白酶的最適pH值,按終質量濃度1.0 mg/mL加入各酶液,37 ℃溫浴2 h后,沸水煮沸5 min使酶失活。將pH值調至排酸pH值,以未經酶處理的CFS為對照,進行抑菌實驗。
1.3.6 Q-1-4所產抗菌物質的特性測定
1.3.6.1 pH值穩定性
分別用1 mol/L的HCl溶液和1 mol/L的NaOH溶液將CFS的pH值調為2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0,以相同pH值的MRS液體培養基為對照,進行抑菌實驗。
1.3.6.2 熱穩定性
將調至不同pH值的CFS分別于60、80、105、121 ℃條件下處理30 min,冰浴急冷后,以未溫度處理的CFS為對照,進行抑菌實驗。
1.3.6.3 紫外線敏感性
取等量的CFS 加到滅菌平皿中,于40 W紫外燈下距離40 cm分別輻照不同時間,以未經紫外處理的CFS為對照[16],進行抑菌實驗。
1.3.6.4 有機溶劑對抑菌活性的影響
按1.0%(V/V)添加甲醇、乙醇、丁醇、丙酮、氯仿到CFS中。以未經有機溶劑處理的CFS、加入相同用量有機溶劑處理的MRS液體培養基為對照[16],進行抑菌實驗。
1.3.6.5 表面活性劑對抑菌活性的影響
按1.0%(V/V)添加Tween-20、Tween-80、 TritonX-100、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、尿素到CFS中。以未經表面活性劑處理的CFS、加入相同用量表面活性劑處理的MRS液體培養基為對照[17],進行抑菌實驗。
1.3.6.6 金屬離子對抑菌活性的影響
將CFS與溶解在50 mmol/L磷酸鈉緩沖液(pH 7.0)中的不同金屬離子溶液分別按1∶1體積比混合。以未經金屬離子處理但加入相同體積超純水的CFS及加入相同金屬離子濃度處理的MRS液體培養基為對照[18],進行抑菌實驗。
1.3.6.7 貯藏穩定性
將CFS分別在25、4、-20 ℃條件下貯藏0、20、40、60 d,檢測不同溫度條件下貯藏不同時間后對指示菌抑菌活性的變化。
1.3.6.8 抑菌譜的測定
將不同的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌活化3 代,第3代的培養菌數進行梯度稀釋調節至106CFU/mL,進行抑菌實驗。
1.4 數據處理
2.1 產抗菌物質乳酸桿菌的篩選

表1 乳酸桿菌的抑菌活性Table1 Antimicrobial activity of the screened strains
表1結果顯示,8 株乳酸桿菌對S. typhimurium CMCC 50115均有抑制作用。但Q-1-4所產CFS對其的抑菌直徑較大,故選定菌株Q-1-4為最終實驗菌株。
2.2 菌株個體形態和生理生化鑒定
菌株分離純化后,光學顯微鏡下菌體形態見圖1。菌株Q-1-4生理生化鑒定結果見表2,表中這些生理生化特征與文獻[19]中描述的L. paracasei的特征相同,初步將菌株Q-1-4歸入L. paracasei。L. paracasei的分類學地位一直飽受爭議。2007年,在公布的乳桿菌屬和種的分類中,德國微生物與細胞培養物保藏中心將L. paracasei直接劃分為干酪乳桿菌菌群[20]。由于L. paracasei與鼠李糖乳桿菌以及干酪乳桿菌中的其他亞種具有很高的相似性,需要結合分子生物學實驗對其進行鑒定。

圖1 菌株Q-1-4的菌體形態(10×100)Fig.1 Mycelial morphology of strain Q-1-4

表2 菌株Q-1-4的生理生化特征Table2 Physiological and biochemical characteristics of strain Q-1-4
2.3 分子生物學鑒定
以菌株Q-1-4的細菌基因組DNA為模板,PCR擴增獲得長度為1 500 bp的16S rDNA堿基序列。與GenBank中已知菌株的基因序列進行同源性比較,結果見表3,系統發育樹見圖2。

表3 菌株Q-1-4的同源性比較Table3 Homology alignment of strain Q-1-4
由表3、圖2可直觀地看出實驗菌株和已知菌的親緣關系,菌株Q-1-4與L. paracasei同源性均高達99.2%,在進化樹中處于同一分支,由此可判定Q-1-4為L. paracasei,這同生理生化鑒定得到的結果一致,由此進一步驗證了菌株Q-1-4為L. paracasei。

圖2 菌株Q-1-4系統發育樹Fig.2 Phylogenetic tree based on the sequences of strain Q-1-4
2.4 L. paracasei Q-1-4產抗菌物質的確定
2.4.1 酸與過氧化氫作用的排除

表4 酸與過氧化氫作用的排除Table4 Acids and hydrogen peroxide in CFS were not responsible for its antimicrobial activity
由表4可以看出,pH 5.0的乳酸、乙酸對S. typhimurium CMCC50115沒有抑制作用,而 pH 5.0的L. paracasei Q-1-4產生的CFS對其有明顯的抑制作用,說明CFS的抑菌活性不是由有機酸引起的,仍然存在其他的抗菌物質。CFS經過氧化氫酶處理后,抑菌能力比未處理的CFS略有下降,但還存在較強的抑菌作用,從而說明CFS中的過氧化氫不是主要的抗菌物質,還有另其他物質對指示菌起抑制作用。
2.4.2 蛋白酶對抗菌物質抑菌活性的影響

表5 抗菌物質對蛋白酶的敏感性Table5 Sensitivity of the antimicrobial substances of strain Q-1-4 to protease
由表5可以看出,CFS經過胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K和胃蛋白酶處理之后對指示菌的抑菌活性分別下降了25.79%、19.50%、22.80%、25.73%,且顯著差異,根據Luo Fan等[21]的判斷標準,確定CFS含有對蛋白酶敏感的蛋白類物質或肽類抗菌物質。而經過溶菌酶處理之后抑菌活性沒有明顯變化,仍具有抑菌活性,原因可能是L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質不僅僅含有蛋白類物質,還有其他具有抑菌效果的代謝產物,如胞外多糖[22]等。
2.5 L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質的特性
2.5.1 pH值穩定性

表6 抗菌物質的pH值穩定性Table6 pH Stability of the antimicrobial activity
由表6可知,與空白對照比較,L. paracasei Q-1-4產生的抗菌物質在pH 2.0~5.5時對指示菌有抑制作用,但抑菌活性隨pH值升高而逐漸降低,pH 3.0、4.0、4.5、5.0、5.5分別較pH 2.0時活性下降了3.2%、13.72%、27.82%、43.81%、53.35%,當pH值大于5.5時對指示菌的抑菌作用消失,這可能是由于pH值既是肽鏈上氨基質子化程度的決定性因素,同時也間接地影響著乳酸菌素在介質中的溶解性并影響該細菌素對指示菌的表面吸附作用,因而pH值對乳酸菌素的活性會產生影響[23]。該抗菌物質在pH 2.0時抑菌活性較強,所以它適合應用于偏酸性食品中,不同于周佳等[24]認為的pH值過高或過低都會影響細菌素結構,從而降低或喪失抑菌活性,本實驗表明細菌素產生的最佳pH值條件具有一定的菌株特異性[25]。
2.5.2 熱穩定性

表7 抗菌物質的熱穩定性Table7 Thermal stability of the antimicrobial substance
從表7可以看出,CFS在同一處理溫度、不同pH值條件下,隨著pH值的升高抑菌活性逐漸下降,且有顯著差異,與2.5.1節結果相一致,這與許多細菌素相似,如Mason等[23]研究了含有組氨酸的陽離子型抑菌肽在中性條件下的抑菌性一般,而在酸性條件下的抑菌性會增強很多。
CFS在同一pH值、不同處理溫度條件下,隨著處理溫度的升高,抑菌活性逐漸降低。選取抑菌活性最高的pH 2.0時,60、80、105、121 ℃處理后分別較5 ℃時的活性下降了1.91%、2.69%、3.1%、5.13%,這可能是由于高pH值環境會脅迫細菌素的蛋白質結構構象發生變化,從而導致抑菌活性下降。但總體來說,該抗菌物質表現出了良好的熱穩定性,Miao Jianxin等[26]從L. paracasei subsp. tolerans FX-6菌株中分離出的新型細菌素同樣耐高溫。耐高溫是抗菌物質的有利優點,食品經巴氏殺菌處理后,其抑菌活性不受影響。
2.5.3 紫外線敏感性

表8 抗菌物質對紫外線的敏感性Table8 Ultraviolet sensitivity of the antimicrobial substances
由表8可知,經紫外線輻照不同時間的抗菌物質的抑菌活性與對照組無顯著差異,說明L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質對紫外線不敏感。由于有些食品不耐高溫高壓殺菌,便可以通過紫外殺菌的方式來達到滅菌的目的,且該抗菌物質對紫外有良好的耐受性,為其應用到食品生產和銷售環節提供了有力的依據。
2.5.4 有機溶劑對抑菌活性的影響

表9 有機溶劑對抑菌活性的影響Table9 Effect of organic solvents on the inhibitory activities
由表9可知,上述有機溶劑對CFS的抑菌活性沒有明顯影響,說明該抗菌物質對有機溶劑具有良好的耐受性。與Mi等[27]的研究結果相一致。
2.5.5 表面活性劑對抑菌活性的影響由表10可知,經表面活性劑處理的CFS的抑菌活性沒有明顯影響。L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質與EDTA

表10 表面活性劑對抑菌活性的影響Table10 Effect of surfactants on the antimicrobial activity
共同作用效果好于單一作用,說明EDTA對抗菌物質有一定的協同增效作用且效果顯著(P<0.05)。EDTA是一種金屬離子的螯合劑,它可以與介質中的金屬離子通過共價鍵相結合,消耗溶液中的金屬離子,從而增強乳酸菌素的抑菌活性[28]。
2.5.6 金屬離子對抑菌活性的影響

表11 金屬離子對抑菌活性的影響Table11 Effect of metal ions on the antimicrobial activity
由表11所示,上述二價金屬離子對CFS的抑菌活性并沒有明顯影響(P>0.05),說明對上述金屬離子有一定的耐受性。
2.5.7 貯藏穩定性

圖3 抑菌活性在貯藏過程中的變化Fig.3 Effect of storage temperature on the antimicrobial activity
由圖3可以看出,CFS貯藏20 d后,其抑菌活性基本沒有明顯的變化。40 d后,抑菌活性略微降低一點,基本保持穩定。60 d 后,其抑菌活性均有不同程度的降低,其中-20 ℃的損失最小,具體機理還有待于進一步研究。可見L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質在貯藏過程中對冷凍和冷藏有較好的耐受性,且冷凍比冷藏效果更好。韓雪等[29]曾提出冷凍比冷藏對乳酸片球菌產生的細菌素活性的損害小,與本實驗結果相類似。
2.5.8 抑菌譜的測定結果
由表12可以得出,L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質對所選的指示菌均顯示了較強的抑菌活性,其中對Bacillus cerecus CGMCC1.1686、Geobacillus stearo thermophilus GMCC1.1923、Micrococcus luteus CMCC(B)28001、 Listeria monocytogenes CMCC54002、Bacillus subtilis CGMCC1(B)63501、Salmonella typhimurium CMCC50115這6 株指示菌顯示了很強的抑菌活性,抑菌圈直徑達到16 mm以上;對其他的指示菌(Streptococcus thermophilus CICC6038、Staphylococcus aureus CMCC(B)26112、Pseudomonas fluarescens CGMCC1.1802、Salmonella enterica subsp. enterica CGMCC1.1859、Escherichia coli ATCC25922)均顯示了較強的抑菌活性,抑菌圈直徑為13~16 mm,其中陳飛龍等[30]已經對L. paracasei FX-6對Staphylococcus aureus的抑菌機理做了一定的解釋:前者所分泌的抗菌肽能與后者細胞內的DNA結合,阻礙其遺傳信息正常表達繼而使相應的大分子產物活性減弱,使生長代謝無法順利進行。L. paracasei Q-1-4對包括食品常見的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌均有良好的抑制作用,與馬迎濤[31]所研究的L. paracasei S-2相似。

表12 L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質的抑菌譜Table12 Antimicrobial spectrum of the antimicrobial substances from L. paracaseiQ-1-4
采用雙層瓊脂平板擴散法,從分離自內蒙古傳統乳制品的8 株乳酸桿菌中篩選出有較好抑菌效果的菌株Q-1-4,通過生理生化實驗和分子學鑒定認定為L. paracasei。
將L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質經排酸、排過氧化氫后對S. typhimurium CMCC50115仍具有明顯的抑制作用,且經過不同蛋白酶處理后,抑菌活性均有不同程度的下降,說明該抗菌物質中含有蛋白類物質。L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質在pH值小于5.5范圍內對S. typhimurium CMCC50115有抑制作用。在此pH值范圍內抗菌物質對熱有耐受性,對紫外不敏感,耐貯藏,有機溶劑、金屬離子、表面活性劑對其影響不顯著,但與EDTA共同作用效果好于單一作用。且L. paracasei Q-1-4所產抗菌物質抑菌譜較廣。
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Screening and Identif i cation of Lactobacillus paracasei Q-1-4 and Analysis of Antimicrobial Substances Produced by It
LIN Xiaolong1, JIA Mutai2, GUO Haiyan1, WANG Quanxi2, MANG Lai2, HE Yinfeng1, WU Jing1,*
(1. College of Food Science and Engineering, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China; 2. College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China)
To isolate Lactobacillus with great application potential from traditional homemade dairy products in Inner Mongolia, eight strains of Lactobacillus were screened for their antimicrobial activity. Strain Q-1-4 was found to have a broad spectrum of antimicrobial activity and was identif i ed as Lactobacillus paracasei by physiological and biochemical characterization and 16S rDNA sequencing analysis. The antimicrobial activity of the cell-free culture supernatant (CFS) of L. paracasei Q-1-4 against Salmonella typhimurium CMCC50115 still existed after eliminating the interference factors such as lactic acid, acetic acid, and hydrogen peroxides. However, the CFS of L. paracasei Q-1-4 was inactivated after treatment with proteolytic enzymes. Inhibitory activity of the CFS against S. typhimurium CMCC50115 was observed in the pH range from 2.0 to 5.5. The antimicrobial substance had good thermal stability in this pH range and was not sensitive to ultraviolet. SDS and EDTA could enhance the antimicrobial activity, but surfactants, organic solvents and metal ions had no effect on the antimicrobial activity. In addition, the antibacterial activity had good storage stability with a broad inhibitory spectrum.
Lactobacillus paracasei; antimicrobial activity; characteristics
10.7506/spkx1002-6630-201704003
TS201.4
A
1002-6630(2017)04-0013-07
林曉龍, 佳木泰, 郭海燕, 等. 副干酪乳桿菌Q-1-4的篩選鑒定及抗菌物質特性分析[J]. 食品科學, 2017, 38(4): 13-19.
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201704003. http://www.spkx.net.cn
LIN Xiaolong, JIA Mutai, GUO Haiyan, et al. Screening and identif i cation of Lactobacillus paracasei Q-1-4 and analysis of antimicrobial substances produced by it[J]. Food Science, 2017, 38(4): 13-19. (in Chinese with English abstract)
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201704003. http://www.spkx.net.cn
2016-06-30
國家自然科學基金地區科學基金項目(31260391);內蒙古自治區自然科學基金項目(2014MS0392);內蒙古農業大學博士科研啟動基金項目(BJ2013D-19;BJ2014D-20)
林曉龍(1989—),男,碩士研究生,研究方向為食品微生物與分子生物學。E-mail:nevsaynev3@163.com
*通信作者:吳敬(1969—),女,副教授,博士,研究方向為食品生物技術及功能食品。E-mail:wujing2003825@163.com