組蛋白去乙酰化酶5在腦膠質瘤中的表達及臨床分析

劉 全

廣西醫科大學第四附屬醫院，廣西柳州 545005

膠質瘤是發病率最高的原發性腦腫瘤，預后不佳[1]。目前高級別膠質瘤患者1年生存率僅40%[2]。目前膠質瘤的臨床治療包括放療、化療和外科手術[3]。腦膠質瘤患者治療費用高并且治療效果差，尤其對于高級別膠質瘤，手術后常規放化療后患者預后仍很差，目前臨床研究的熱點是組蛋白去乙酰化抑制劑對腫瘤抑制的作用。組蛋白去乙酰化酶 5（histone deacetylase 5，HDAC5）屬于 II類，并已被證明對于調節細胞增殖、細胞周期和凋亡具有重要的作用[4-5]。有研究表明，HDAC5與髓母細胞瘤、骨肉瘤等相關[6-7]。本研究通過前期研究發現，HDAC5可促進神經膠質瘤細胞的增殖，因此HDAC5可能是膠質瘤潛在的治療位點，但HDAC5的表達水平與臨床病理、腫瘤分化及患者生存周期等臨床表現的相關程度尚不明確。本研究通過觀察HDAC5蛋白在不同級別的腦膠質瘤中的表達，探討腦膠質瘤中HDAC5蛋白的表達與患者臨床病理、腫瘤分化及患者生存周期的相關性，為腦膠質瘤患者的個體化治療提供參考，并為后續選擇使用組蛋白去乙酰化酶抑制劑抗腫瘤治療研究提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年1月～2015年12月確診為腦膠質瘤并在柳州市工人醫院和柳州醫學高等專科學校第一附屬醫院進行手術治療并留有蠟塊標本的患者100例，男57例，女43例，年齡2～78歲，平均（41.3±12.5）歲，病例分型：單純普通型29例，單純急診型6例，復雜疑難型56例，復雜危重型9例。按照WHO分型Ⅰ～Ⅳ級分為兩組，Ⅰ～Ⅱ級屬于低級別組，Ⅲ～Ⅳ屬于高級別組，每組各50例。對所有患者的臨床病理、腫瘤分化及患者生存周期等臨床特點進行調查隨訪。腦膠質瘤診斷標準符合神經外科學（2012年第二版）。入選標準：（1）WHO病理分級I-IV級各型腦膠質瘤；（2）有明確的病理診斷；（3）在我院，保存有腦膠質瘤蠟塊標本；（4）滿足隨訪。本研究經醫院倫理委員批準，所有患者及其家屬簽署知情同意書，同意參與實驗。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

表1 兩組患者HDAC5表達比較[n（%）]

1.2 免疫組織化學法

采用免疫組織化學法檢測HDAC5在腦膠質瘤中的表達，HDAC5蛋白在膠質瘤標本中的表達：按著色程度評分，0分無著色，1分淺黃色，2分棕黃色，3分褐棕色；按陽性細胞占比例評分，無陽性細胞為0分，＜10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，＞80%為4分；二者乘積判定陽性結果，0分為陰性（-），1～4分為低度陽性（+），5～ 8 分為中度陽性（++），9 ～ 12 分為強陽性（+++）。

1.3 觀察指標

腦膠質瘤臨床病理、腫瘤分化按2007年WHO分級劃分為Ⅰ～Ⅳ級及病理結果分低、中、高度分化。患者生存周期由第一次發現原發腦膠質瘤時開始計算，隨訪終止時間為2016年12月31日。

1.4 統計學處理

采用SPSS16.0軟件進行統計學處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者生存率比較

隨訪終止時間為2016年12月31日，低級別組2例死亡，生存率96.0%，高級別組死亡18例，生存率64%，明顯低于低級別組，差異有統計學意義（χ2=16.324，P ＜ 0.05）。

2.2 兩組患者HDAC5表達比較

高級別組HDAC5表達陽性率顯著高于低級別組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

組蛋白去乙酰酶根據蛋白的同源性和結構分為I～IV類 。其中組蛋白去乙酰酶5于II類的組蛋白去乙酰化酶，它已被證明是細胞增殖的重要調節劑，控制細胞周期進程和凋亡[8]。膠質瘤是中樞神經系統最常見的原發性腦腫瘤，當前常規的臨床治療包括放射療法、化學療法和外科手術治療，但其預后不良。神經膠質瘤細胞對于化療藥物的耐藥性越來越成為影響治療效果的主要因素。因此，迫切需要開發新的有效地膠質瘤治療方法。近期，在一個基于12個中心的隨機臨床試驗薈萃分析中，包括膠質母細胞瘤和間變性星形細胞瘤在內的高級別膠質瘤患者的1年整體生存率僅為40%，其中進行了系統的聯合放療和化療后的患者生存率也僅為46%。而本研究中兩組生存率都較高，這可能與本研究樣本數較少有關，有待進一步擴大樣本量進行相關性研究。

組蛋白去乙酰化酶家族在腫瘤發生、擴散和轉移中扮演著關鍵角色。目前的研究發現多種組蛋白去乙酰化酶抑制劑具有促進細胞凋亡，抑制腫瘤細胞在動物模型中增殖的能力。因此組蛋白去乙酰化酶抑制劑有望成為新型的抗癌治療藥物。目前HDAC5在人腦膠質瘤的生物學功能鮮有研究與報道。近期，我們的一項研究發現HDAC5可通過上調Notch 1信號的表達促進神經膠質瘤細胞的增殖，但該生物學功能是否與臨床病理、腫瘤分化及患者生存周期等臨床表現存在相關性，尚無相關報道。Notch家族在細胞增殖、分化和凋亡中起重要作用。Notch 1蛋白與該家族的其他成員共享結構特征，例如存在由多個表皮生長因子樣重復組成的胞外結構域和由多個不同域類型組成的胞內結構域[9]。許多研究表明，Notch 1在腫瘤細胞系中過度表達，包括膠質瘤[10]。RNA干擾下調Notch 1及其配體誘導膠質瘤細胞凋亡及抑制增殖。因此，Notch 1已提出了構成在腦膠質瘤治療的一個靶點[11-12]。

終上所述，HDAC5蛋白在腦膠質瘤細胞中的表達與膠質瘤的病理級別、腫瘤分化及患者生存周期可能具有相關性，這為腦膠質瘤患者的個體化治療提供參考，以期為后續抗腫瘤研究提供新的思路，具有較大的社會效益。本研究的局限之處在于，作為單中心研究，患者樣本量較少。需要未來進行多中心、擴大樣本量的研究，從而獲得更準確科學的研究結果。

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