胸腔鏡切除術(shù)后組織EGFR和IGF-1R蛋白表達與胸腺瘤患者化療預(yù)后的關(guān)系分析

朱 銘 黃玉婷 鄒文蕙 趙吉星 李勇生

1.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院胸心外科，廣東惠州 516000；2.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院腫瘤放療科，廣東惠州 516000

胸腺瘤是前上縱隔原發(fā)性腫瘤之一，并非我國高發(fā)性腫瘤。WHO組織學(xué)類型A型AB型及B1型，通常被認(rèn)為是良性腫瘤或是低度惡性潛能性腫瘤，病程進展緩慢[1]。即便如此，也不能忽略其具有進展為惡心腫瘤的潛能。放射治療是一種通過損傷腫瘤細胞DNA，進而使細胞周期停止、細胞老化凋亡的治療方式，同時胸腺瘤治療的重要方法之一，尤其是對于具備高危風(fēng)險因素者[2-4]。臨床發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞較普通細胞有更強的耐受性，并且受損的腫瘤細胞DNA通常得到修復(fù)[5]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，腫瘤細胞具有更強耐受性的分子生物學(xué)機制被揭示，目前EGFR和IGF-1R所主導(dǎo)的抵抗性機制，以成為臨床研究腫瘤研究的重點與熱點[6-7]。為此，我院開展胸腔鏡切除術(shù)后組織EGFR和IGF-1R蛋白表達與胸腺瘤患者化療預(yù)后的關(guān)系分析研究，旨在探討胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R蛋白表達對患者化療預(yù)后的影響。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年7月～2017年7月我院收治50例胸腺瘤患者作為研究對象。所有病例均經(jīng)術(shù)后病理證實為胸腺瘤。男20例，女30例；年齡32～65歲，平均（56.31±6.15）歲；腫瘤直徑2.60～6.20cm，平均（4.61±1.56）cm；臨床病理分期[8]：MasaokaⅠ期14例，Ⅱ期16例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。WHO組織學(xué)類型：A型3例，AB型4例，B1型14例，B2型21例，B3型8例。合并單純紅細胞再生障礙性貧血11例、重癥肌無力8例、多發(fā)性肌炎4例、再生障礙性貧血3例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）術(shù)后病理證實為胸腺瘤。（2）具有完整的臨床病理資料和隨訪資料。（3）初治患者。（4）知情且簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）異位胸腺瘤。（2）其他惡性腫瘤病史。（3）妊娠期、哺乳期婦女。

1.3 方法

所有病例均先行胸腺瘤完整或部分切除術(shù)，單純胸腺瘤病例行標(biāo)準(zhǔn)的胸腺切除術(shù)，合并重癥肌無力病例行胸腺擴大切除術(shù)，周圍組織粘連或腫瘤巨大病例行腫瘤完整切除。胸腔鏡切除術(shù)術(shù)畢，行組織取材，組織經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，4μm厚切片，應(yīng)用免疫組化EnVision兩步法檢測50例胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的表達。EGFR標(biāo)記采用鼠抗人單克隆抗體EGFR（北京中杉金橋生物公司，工作液）；IGF1R標(biāo)記兔抗人多克隆抗體IGF1R（北京中杉金橋生物公司，濃縮液）。用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。再行三維適形放射治療，直線加速器（西門子（中國）有限公司，PRIMUS H），照射野大小依術(shù)前CT或術(shù)中所描述的腫瘤范圍而定，照射方式以前后對穿照射及兩前斜野照射為主，6MV-X射線照射，常規(guī)放療劑量為40～60Gy，常規(guī)分割1.80～2.00Gy/次，5次/周。隨訪：患者出院后每6個月復(fù)診復(fù)查胸部CT，通過電話或門診隨訪等途徑收集患者生存及復(fù)發(fā)狀況。

1.4 結(jié)果判斷[9]

由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法進行結(jié)果判斷。EGFR蛋白定位于腫瘤性上皮細胞的細胞膜，陽性細胞呈黃色或棕褐色；IGF-1R蛋白定位于腫瘤性上皮細胞的細胞膜或細胞質(zhì)，陽性細胞呈黃色或棕褐色。光學(xué)顯微鏡隨機觀察10個400倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，觀察染色強度和陽性細胞數(shù)。染色強度積分：基本無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞所占百分?jǐn)?shù)積分：陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。染色強度積分×陽性細胞所占百分?jǐn)?shù)積分＞2分判定為陽性，≤2判定為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。采用Kaplan-Meier繪制生存曲線，并采用log-rank檢驗分析IGF-1R和EGFR是否陽性對患者3年總生存率、3年無復(fù)發(fā)生存率的影響，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R表達的檢測結(jié)果

EGFR的陽性表達率為52.00%（26/50），IGF-1R的陽性表達率為56.00%（28/50）。見表1。

表1 EGFR和IGF-1R表達的檢測結(jié)果[n（%）]

2.2 IGF-1R和EGFR是否陽性表達對患者3年總生存率的影響

EGFR陽性表達病例的3年總生存率為69.23%（18/26），EGFR陰性表達病例的3年總生存率為95.83%（23/24），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=21.342，P＜ 0.05）；IGF-1R 陽性表達病例的3年總生存率為67.85%（19/28），IGF-1R陰性表達病例的3年總生存率為100.00%（22/22），兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=24.411，P＜0.05）。見圖1。

2.3 IGF-1R和EGFR是否陽性表達對患者3年無復(fù)發(fā)生存率的影響

圖1

EGFR陽性表達病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為53.84%（14/26），EGFR陰性表達病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為91.66%（22/24），兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=28.593，P＜0.05）；IGF-1R陽性表達病例的3年總生存率為53.57%（15/28），IGF-1R陰性表達病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為95.45%（21/22），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=47.218，P＜0.05）。見圖2。

圖2

3 討論

EGFR是I型酪氨酸蛋白激酶，具有配體誘導(dǎo)的活性，是ErbB受體家族的成員之一，基因定位于人染色體7p13-p12之上。IGF-1R是胰島素樣生長因子家族的成員之一，一種糖蛋白跨膜受體。文獻報道胸腺瘤中EGFR和IGF-1R的陽性表達率分別為50.80%、55.60%。本研究胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的陽性表達率分別為52.00%、56.00%，與文獻報道相仿[10]。

既往研究發(fā)現(xiàn)，EGFR和（或）IGF-1R過度表達均可干擾細胞核正常轉(zhuǎn)錄，引起一系列的生物學(xué)行為，進而促進腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[11-13]。新近一項研究發(fā)現(xiàn)，EGFR陽性表達率隨著腫瘤Masaoka分期進展而增高，說明EGFR蛋白表達與腫瘤Masaoka分期不完全吻合，MasaokaⅠ期病例可能是EGFR陽性表達，MasaokaⅣ期也可能是EGFR陰性表達；在同一項研究中發(fā)現(xiàn)，IGF-1R陽性表達率與腫瘤Masaoka分期也有類似的線性關(guān)系[10]。眾多研究指出胸腔鏡切除術(shù)后輔以放射治療并不能改善胸腺瘤患者的生存情況，但可其復(fù)發(fā)情況，研究者將胸腺瘤放射治療預(yù)后不良的原因歸結(jié)于臨床病理特征[14]。綜上，本研究有不同的歸因，認(rèn)為EGFR和IGF-1R所主導(dǎo)的抵抗性機制，在其中發(fā)揮了重要的作用。

本研究結(jié)果提示，EGFR陽性表達病例的3年總生存率顯著低于EGFR陰性表達病例（P＜0.05）；IGF-1R陽性表達病例的3年總生存率顯著低于EGFR陰性表達病例（P＜0.05）；EGFR陽性表達病例的3年無復(fù)發(fā)生存率顯著低于EGFR陰性表達病例（P＜0.05）；IGF-1R陽性表達病例的3年無復(fù)發(fā)生存率顯著低于EGFR陰性表達病例（P＜0.05）。說明，EGFR和IGF-1R陽性表達對胸腺瘤患者化療預(yù)后產(chǎn)生不利影響，存在EGFR和IGF-1R陽性表達的胸腺瘤患者往往預(yù)后不佳。我們認(rèn)為這種結(jié)局的形成是因為EGFR和IGF-1R均可激活PI3K/AKT通路修復(fù)放射治療等造成的DNA損傷，故對放射治療產(chǎn)生抵抗性。同時，EGFR和IGF-1R并不止存在單一的線性關(guān)系，兩者信號通路之間一并存在cross-talk現(xiàn)象或是協(xié)同作用。Liang等[15]研究者有過類似報道，其在研究中指出腫瘤細胞中的EGFR蛋白表達水平與放射治療的預(yù)后密切相關(guān)，EGFR蛋白表達水平與腫瘤細胞對放射的敏感性呈負相關(guān)，EGFR蛋白表達水平與腫瘤細胞對放射的抵抗性呈正相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，胸腺瘤組織中存在EGFR和IGF-1R陽性表達的患者往往預(yù)后不佳。抑制腫瘤細胞DNA的修復(fù)，或可增加放射治療的療效，新一階段可考慮深化研究EGFR和IGF-1R抑制劑對胸腺瘤EGFR和IGF-1R陽性表達病例化療預(yù)后的影響。

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