蛹蟲(chóng)草菌絲液體培養(yǎng)條件研究

郭星

摘 要：本試驗(yàn)對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，確定最佳的培養(yǎng)條件是：PH值7.0，振蕩培養(yǎng)時(shí)間7天，培養(yǎng)溫度22℃，培養(yǎng)基裝液量100ml/瓶，搖床振頻120～140r/min。菌絲體表現(xiàn)為菌球分布均勻，密度疏密適中，大小適宜，菌球組織緊實(shí)，干重可達(dá)到0.5g/100ml。

關(guān)鍵詞：蛹蟲(chóng)草 液體發(fā)酵 菌絲干重

蛹蟲(chóng)草，是真菌和蟲(chóng)體相互結(jié)合的一種藥用真菌，多寄生在鱗翅目蛹和幼蟲(chóng)體內(nèi)。經(jīng)研究，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值可以和冬蟲(chóng)夏草相媲美，甚至有些成分還要高于冬蟲(chóng)夏草。但由于冬蟲(chóng)夏草產(chǎn)量低，價(jià)格昂貴，所以蛹蟲(chóng)草的人工栽培顯得尤為重要，且極具商業(yè)價(jià)值。[1]

經(jīng)大量研究表明，人工液體發(fā)酵獲得的蟲(chóng)草菌絲體和冬蟲(chóng)夏草的成分基本一致，可代替其入藥。另外，在生產(chǎn)上液體菌種所發(fā)揮的功效顯而易見(jiàn)，為研究蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵條件，本人進(jìn)行了試驗(yàn)研究，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下：

一、材料和方法

1.材料

1.1菌種 蛹蟲(chóng)草固體菌種。

1.2主要儀器 高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，遠(yuǎn)紅外恒溫干燥箱，分析天平等。

1.3培養(yǎng)基 （1）菌種活化培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2g，硫胺素10mg，瓊脂20g，水1000ml。（2）液體發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，硫酸鎂1g ，磷酸二氫鉀2g，硫胺素15mg，核黃素 15mg ，水1000ml。[2]

2.方法

菌種活化 將斜面固體菌種接種在活化平板培養(yǎng)基上， 20～22℃培養(yǎng)一周，菌絲長(zhǎng)滿平板后即可轉(zhuǎn)色備用。

不同PH值對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響 按液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方制備液體培養(yǎng)基，用1mol/L HCL或1mol/L NAOH將培養(yǎng)基PH值分別調(diào)制4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。液體培養(yǎng)基分裝在250ml三角瓶?jī)?nèi)，每瓶100ml，各處理重復(fù)五次，常規(guī)滅菌。培養(yǎng)條件： 20～22℃，閉光，130r/min振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)7天后過(guò)濾菌液，菌絲用蒸餾水沖洗數(shù)次，60℃烘干稱重。以下方法同1.2.2。

不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響 培養(yǎng)時(shí)間分別為5、6、7、8、9天。

不同培養(yǎng)溫度對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響 培養(yǎng)溫度分別為18、20、22、24、26℃。

不同裝液量對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響 在250ml三角瓶中培養(yǎng)基裝液量分別為80、100、120、140、160ml。

不同振頻對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響 搖床振頻分別為80、100、120、140、160r/min。

二、結(jié)果分析

1.不同PH值對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明：不同PH值對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響不同。在其他條件相同的情況下，菌絲生長(zhǎng)起始期其生長(zhǎng)量隨著PH值的升高而增加，當(dāng)PH值為7.0時(shí)菌絲干重最大（0.4407g/100ml），菌球分布均勻，大小適中，密度最佳。達(dá)到8.0時(shí)菌絲生長(zhǎng)量開(kāi)始下降，菌球密度也明顯減小。說(shuō)明菌絲在弱酸條件下隨著PH值升高而升高，而堿性條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)有抑制作用。[3]

2.不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響

菌絲在接種后2天內(nèi)要經(jīng)過(guò)一個(gè)適應(yīng)期，接著會(huì)進(jìn)入快速生長(zhǎng)期，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，培養(yǎng)7天的菌絲干重最高（0.5483g/100ml），在5～6天之間培養(yǎng)時(shí)間較短，菌絲快速生長(zhǎng)期還未達(dá)到頂峰階段，因此菌絲生長(zhǎng)量較少，而8～9天菌絲培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，開(kāi)始逐漸衰老自溶，菌球變大變松，產(chǎn)量下降。因此，多種因素綜合考慮以培養(yǎng)7天最有利于菌絲的生長(zhǎng)。

3.不同培養(yǎng)溫度對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響

蛹蟲(chóng)草菌絲在15～30℃下均能生長(zhǎng)，但溫度的高低對(duì)菌絲的產(chǎn)量起著決定性的作用。實(shí)驗(yàn)表明在22℃時(shí)，菌絲干重最高。在18～22℃之間菌絲生長(zhǎng)量隨著溫度的升高而增加，當(dāng)溫度達(dá)到26℃時(shí)，由于溫度過(guò)高不適宜菌絲生長(zhǎng)，所以菌絲產(chǎn)量較低。

4.不同裝液量對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響

培養(yǎng)基裝液量的多少直接影響振蕩培養(yǎng)的效果，不同液體體積在規(guī)定空間（250ml）內(nèi)的振蕩效果差異較大，另外，較多的裝液量也會(huì)給搖床增加負(fù)擔(dān)。實(shí)驗(yàn)證明菌絲生長(zhǎng)量隨著裝液量的增加而減少，兩者呈反比，分析原因認(rèn)為：裝液量少時(shí)有足夠的剩余空間為培養(yǎng)基提供溶氧，從而有利于菌絲生長(zhǎng)。裝液量在100ml時(shí)菌絲干重最大（0.4414g/100ml），裝液量在120ml時(shí)菌絲生長(zhǎng)量與100ml時(shí)差別不明顯，但考慮到經(jīng)濟(jì)問(wèn)題認(rèn)為100ml為最佳。

5.不同振頻對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明：在相同時(shí)間內(nèi)，振蕩頻率越大菌絲生長(zhǎng)量越多，在120～140r/min之間時(shí)菌絲生長(zhǎng)量最高，菌球也較為均勻，濃密，但當(dāng)振蕩頻率到達(dá)160r/min時(shí)菌絲體結(jié)球狀不好，出現(xiàn)塊狀菌絲聚集象限，不利于生長(zhǎng)，因此，綜合考慮以120～140r/min最為適合。

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析來(lái)看，蛹蟲(chóng)草菌絲發(fā)酵始期階段在弱酸條件下生長(zhǎng)較好， PH值在7.0時(shí)菌絲生長(zhǎng)量達(dá)到最高峰，超過(guò)7.0時(shí)菌絲生長(zhǎng)量減少，菌絲產(chǎn)量減低；菌絲培養(yǎng)的最佳時(shí)間為7天，在第7天時(shí)測(cè)得菌絲干重最高，說(shuō)明，菌絲以完成對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，產(chǎn)量達(dá)到頂峰，如果繼續(xù)培養(yǎng)，菌絲將進(jìn)入衰老階段，生長(zhǎng)量不再增加；溫度因素實(shí)驗(yàn)分析表明，在各處理之間菌絲產(chǎn)量沒(méi)有差異，菌絲在18～26℃之間均能正常生長(zhǎng)，但在22℃時(shí)菌絲產(chǎn)量最高；蛹蟲(chóng)草菌絲最佳的裝液量為100ml/瓶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)裝液量在100ml時(shí)瓶?jī)?nèi)的溶氧量最高，對(duì)菌絲生長(zhǎng)提供充足的氧分，菌絲生長(zhǎng)量最高，菌絲質(zhì)量最好。[4]

參考文獻(xiàn)

[1]王建芳，楊春清.蛹蟲(chóng)草有效成分及藥理作用研究進(jìn)展.中醫(yī)藥信息，2005，22（5）：30-32.

[2]邵愛(ài)娟，戴如琴，蘭紅麗.蟲(chóng)草菌絲的生理研究.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1994，1（5）：22.

[3]汪宇，于榮敏，佟志清.蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)考察.中國(guó)野生植物資源，2003， 22（4）：56.

[4]陳晉安，黃浩，鄭忠輝.蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵條件的研究.集美大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，6（3）：219.