GPR119對脂質代謝相關基因表達的影響

陳志平+王嵐楓+胡蓉

＼[摘要]目的 分析THP-1巨噬細胞中過表達GPR119對脂質代謝相關基因表達的影響。方法 構建過表達GPR119載體，轉染THP-1細胞，用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬細胞。NC組：空載體轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）組：過表達GPR119轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。檢測過表達GPR119轉染THP-1巨噬細胞后脂質代謝相關基因表達。結果 過表達GPR119組SR-B1、APOE、LCAT基因表達顯著高于NC組表達（P=0.000）。結論 過表達GPR119能引起脂質代謝相關基因表達變化。

[關鍵詞]GPR119；脂質代謝；基因表達；THP-1巨噬細胞

[中圖分類號] R446.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）01（c）-0138-03

[Abstract]Objective To investigate the effects of overexpression of GPR119 on expression of genes related to lipid metabolism in THP-1 macrophages.Methods Expression vector GPR119，and transfected into THP-1 cells with phorbol ester （160 nmol/L，48 h） to differentiate into macrophages were constructed.NC group：the empty vector transfected into THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h；GPR119 （H） group：over expression of GPR119 transfected with THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h.detection of lipid metabolism related genes expression in GPR119 transfected macrophages after THP-1.Results The expression of GPR119 in group SR-B1，APOE，LCAT gene expression were significantly higher than those of control group （P=0.000）.Conclusion Over expression of GPR119 can cause changes in the expression of genes related to lipid metabolism.

[Key words]GPR119；Lipid metabolism；Gene expression；THP-1 macrophage

GPR119是一個新的可能參與調節體內脂質代謝的膜受體[1-2]。GPR119屬于G蛋白偶聯受體A家族，有7個跨膜區，在胞漿內與三個亞單位（α、β、γ）所組成的G蛋白偶聯，主要表達在胰島和胃腸道細胞[3-4]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，該基因的開放閱讀框架僅有一個外顯子，不含內含子，編碼335個氨基酸。GPR119在治療2型糖尿病及肥胖的作用有比較深入的研究，并提示GPR119可能參與脂質代謝[5-8]。本文旨在探討GPR119是否參與脂質代謝，研究過表達GPR119后脂質代謝相關基因的表達。

1資料與方法

1.1細胞培養

THP-1細胞從American Type Culture Collection （ATCC，Manassas，VA，USA）獲得，用RPMI-1640培養基培養，RPMI-1640培養基包含10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素，培養環境為37°C，5%CO2。細胞被種植于6孔板或12孔板或60 mm平皿，并且生長到鋪滿平皿達80%～90%時待用。NC組：空載體轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）組：過表達GPR119轉染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2主要儀器與試劑

CO2培養箱（美國Thermo公司）；超凈工作臺（美國Thermo公司）；7500 Fast熒光定量儀（美國ABI公司）；胎牛血清（四季青公司）；Lipofectamine 2000（美國Invitrogen公司）；PrimeScript RRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因檢測試劑（購自Takara公司）。

1.3轉染

Lipofectamine 2000過表達GPR119，轉染THP-1細胞（按美國Invitrogen公司說明書操作），用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬細胞。

1.4基因檢測

THP-1巨噬細胞PBS清洗3遍，提取總RNA，并將mRNA反轉錄成cDNA。反應條件為：37℃下15 min，85℃下5 s（表1）。

按試劑說明書操作ABI 7500 Fast Real-Time RCR System，反應條件為：95℃下預變性30 s，95℃下5 s，60℃下34 s，40次循環后分離（表2）。

所有標本均于同一反應體系中進行，每份重復檢測3次。

1.5檢測指標

檢測過表達GPR119轉染THP-1巨噬細胞后脂質代謝相關基因清道夫B1（SR-B1）、載脂蛋白E（APOE）及卵磷脂膽固醇酰基轉移酶（LCAT）表達。

1.6統計學分析

采用SPSS 13. 0統計學軟件對數據進行處理，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

采用實時定量PCR測定過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE及LCAT表達，結果表明，與NC組比較，GPR119（H）組SR-B1、APOE及LCAT表達顯著升高（P<0.01）（表3）。

3討論

本研究表明，過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE、LCAT表達顯著上調（P=0.000）。SR-B1是一個多配體受體，能在高密度脂蛋白（HDL）與細胞間介導雙向脂質轉運，可以在動脈粥樣硬化斑塊的巨噬細胞中表達，對肝臟膽固醇的逆向轉運和抗動脈粥樣硬化都是必須的。SR-B1敲除鼠可導致快速的冠狀動脈閉塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1對于脂質調節和抗動脈粥樣硬化起重要作用[9]。APOE是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質代謝中起著重要作用，APOE通過不同機制對動脈粥樣硬化起一定抑制作用[10]。LCAT是一種血漿中起催化作用的酶，其作用是將HDL的卵磷脂的C2位不飽和脂肪酸轉移給游離膽固醇，生產溶血卵磷脂和膽固醇酯，在脂質代謝中發揮重要作用[11-12]。

GPR119在治療2型糖尿病及肥胖的作用已有比較深入的研究。GPR119與激動劑結合后，通過cAMP信號轉導途徑，促進葡萄糖依賴性胰島素和腸肽激素的分泌，是治療2型糖尿病和肥胖癥的藥物靶點[13-14]。最新研究表明，GPR119在APOE敲除鼠中降低血清脂質和炎癥因子，可能成為動脈粥樣硬化的治療靶點[15-17]。

本研究提示，GPR119在巨噬細胞脂質代謝平衡中發揮重要作用，間接參與對肝臟膽固醇的逆向轉運，可能為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點。

[參考文獻]

[1]Al-Barazanji K，McNulty J，Binz J，et al.Synergistic effects of a GPR119 agonist with metformin on weight loss in diet-induced obese mice[J].J Pharmacol Exp Ther，2015，353（3）：496-504.

[2]Hansen HS，Rosenkide MM，Holst JJ，et al.GPR119 as a fat sensor[J].Trends Pharmacol Sci，2012，33（7）：374-381.

[3]Odori S，Hosoda K，Tomita T，et al.GPR119 expression in normal human tissues and islet cell tumors：evidence for its islet-gastrointestinal distribution，expression in pancreatic beta and alpha cells，and involvement in islet function[J].Metabolism，2013，62（1）：70-78.

[4]夏芳，陳濤，田浩明.GPR119-糖尿病藥物新靶點[J].中國糖尿病雜志，2010，18（8）：639-640.

[5]Zhang S，Ma Y，Li J，et al.Molecular matchmaking between the popular weight-loss herb Hoodia gordonii and GPR119，a potential drug target for metabolic disorder[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2014，111（40）：14571-14576.

[6]Merk D，Schubert-Zsilavecz M.Natural compound renews hope for diabetes and obesity therapeutic target[J].Future Med Chem，2015，7（7）：833-835.

[7]Lan H，Lin HV，Wang CF，et al.Agonists at GPR119 mediate secretion of GLP-1 from mouse enteroendocrine cells through glucose-independent pathways[J].Br J Pharmacol，2012，165（8）：2799-2807.

[8]Thabuis C，Destaillats F，Landrier JF，et al.Analysis of gene expression pattern reveals potential targets of dietary oleoy-lethanolamide in reducing body fat gain in C3H mice[J].J Nutr Biochem，2010，21（10）：922-928.

[9]Ma X，Li SF，Qin ZS，et al.Propofol up-regulates expression of ABCA1，ABCG1，and SR-B1 through the PPARγ/LXRα signaling pathway in THP-1 macrophage-derived from cells[J].Cardiovasc Pathol，2015，24（4）：230-235.

[10]Fish JE，Cybulsky M.ApoE attenuates atherosclerosis via miR-146a[J].Circ Res，2015，117（1）：3-6.

[11]Thacker SG，Rousset X，Esmail S，et al.Increased plasma cholesterol esterification by LCAT reduces diet-induced atherosclerosis in SR-BI knockout mice[J].J Lipid Res，2015， 56（7）：1282-1295.

[12]Hu YW，Yang JY，Ma X，et al.A lincRNA-DYNLRB2-2/GPR119/GLP-1R/ABCA1-dependent signal transduction pathway is essential for the regulation of cholesterol homeostasi[J].J Lipid Res，2014，55（4）：681-697.

[13]王瑜.普羅布考聯合瑞舒伐他汀對急性腦梗死患者脂質代謝的影響[J].中國醫藥，2016，11（5）：679-682.

[14]何吉祥，潘庭雙，蔣陽陽，等.飼料糖蛋白質比和投喂率對異育銀鯽生長及脂質代謝指標的影響[J].上海海洋大學學報，2016，25（2）：198-206.

[15]張建容.普羅布考聯合他汀類藥物對缺血性腦卒中患者脂質代謝的影響[J].中國醫學前沿雜志（電子版），2016， 8（2）：78-80.

[16]李書芬，胡炎偉，楊俊瑤，等.GPR119介導長鏈非編碼RNADYNLRB2誘導ABCAl表達并促進ABCAl介導的膽固醇流出和抗炎作用[J].中國動脈硬化雜志，2013，21（9）：62-62.

[17]高偉，張紹維.GPR119受體激動劑GSK1292263對糖尿病的作用及機制探討[J].現代儀器與醫療，2016，22（1）：64-66.

（收稿日期：2016-12-22 本文編輯：顧雪菲）