黃芪飲片中甲苷檢測(cè)方法的優(yōu)化

劉昕 王雷

哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心 黑龍江哈爾濱 150076；哈爾濱勞動(dòng)技師學(xué)院 黑龍江哈爾濱 150500

黃芪飲片中甲苷檢測(cè)方法的優(yōu)化

劉昕 王雷

哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心 黑龍江哈爾濱 150076；哈爾濱勞動(dòng)技師學(xué)院 黑龍江哈爾濱 150500

目的：建立一種快速、準(zhǔn)確的用于測(cè)定黃芪甲苷含量的高效液相色譜法。方法：采用Zorbax -SB-C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（70:130）；流速1. 0mL每分鐘，柱溫30度；蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)器漂移管溫度110度，氣流速度2.5L每分鐘。結(jié)果：進(jìn)樣量在0.41—1.99微克，r=0.9999，線性良好，加樣回收率為104.6%，RSD為0.62%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠、準(zhǔn)確，有良好重現(xiàn)性，可作為黃芪甲苷含量測(cè)定方法參考依據(jù)。

檢測(cè)方法；優(yōu)化；黃芩甲苷

《神農(nóng)本草經(jīng)》中認(rèn)為中藥材黃芪具有補(bǔ)脾益氣、保肝助陽(yáng)等功效，在我國(guó)黃芪的道地藥材產(chǎn)區(qū)是黑龍江、山西、內(nèi)蒙古等地區(qū)，黃芪在中醫(yī)藥臨床治療疾病中是一味常用常見藥，所以也是被研究的比較透徹的中藥材［1］。黃芩甲苷是中藥材黃芪中的有效活性成分之一，所以我們常用它來(lái)控制黃芪的質(zhì)量。一般采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)法來(lái)測(cè)定黃芪甲苷。2015年版的《中國(guó)藥典》中收載黃芪飲片的含量測(cè)定方法［2］：黃芩供試溶液制備選用正丁醇，氨液洗滌，經(jīng)大孔吸附樹脂，由于氨液與待測(cè)液分布不勻，最終皂苷類化合物皂化反應(yīng)不完全，方法難實(shí)現(xiàn)，浪費(fèi)財(cái)力物力，不是值得推廣的優(yōu)良方法［3］。本文將在原有資料基礎(chǔ)上［4］，在黃芪甲苷含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)中供試品溶液制備基礎(chǔ)上，建立出黃芪甲苷高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)法，并為新版藥典的修訂提供參考。

1.備與材料

設(shè)備：SFDZAM4000型ELSD 檢測(cè)器（上海雙旭電子有限公司）；島津Nexera UHPLC LC-30A型色譜儀；WFEX1600型四元低壓系統(tǒng)(北京紫萱盛世科技有限公司)；島津 Prominence LC20A色譜儀；TH2008色譜工作站(成都貝斯達(dá)儀器有限公司) ；CPA224S電子天平(上海貝瑞有限公司)。

材料：黃芪甲苷對(duì)照品( 中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110781-201213)；乙腈（山東魯南化學(xué)試劑有限公司）、甲醇（上海科博化學(xué)試劑有限公司）為色譜純；純水；其他試劑均為分析純。黃芪飲片（北京同仁堂福建健康藥業(yè)有限公司），經(jīng)中藥鑒定結(jié)果分析報(bào)告，本批次黃芪飲片為內(nèi)蒙古莢膜黃芪。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

本實(shí)驗(yàn)使用安捷倫Zorbax-SB- C18色譜柱；乙腈-水（70:130）流動(dòng)相；流速為1mL∕min；氣流速2.8L∕min；柱溫30度；漂移管110度［5］。

2.2 制備對(duì)照溶液

精密稱定黃芩甲苷對(duì)照品，加甲醇（色譜純），制成0.4mg∕mL對(duì)照溶液。

2.3 制備供試溶液

取黃芪飲片粉碎（80目）粉末1g，精密稱定，置錐形瓶，加5ml氨液充分振搖使之混溶浸潤(rùn)，再加入50mL正丁醇（分析純），超聲提取 15分鐘，靜置，分層后倒出上清液。同理，將藥渣 2次提取，合并提取液，供試溶液即得。

2.4 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液①0.15②0.30③0.45④0.60⑤0.75mL分別置于10mL容量瓶，加甲醇（分析純）至刻度，振搖，以10微升進(jìn)樣量分析，峰面積為縱坐標(biāo)（lnA），自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（lnC），進(jìn)行回歸方程，得lnA=1.4917lnC+4246，r=0.9999，線性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取濃度0.1198mg∕mL對(duì)照品溶液10微升，以上色譜條件下重復(fù)5次進(jìn)樣，得到黃芪甲苷峰面積RSD=0.62%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品黃芪甲苷溶液，分別于0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，每次5微升，得到峰面積RSD=2. 12%，供試品8小時(shí)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

黃芪粉末1克，精密稱定，按供試品溶液制備方法制得5份溶液，精密吸取各5微升，注入高效液相色譜儀中；同時(shí)，吸取0.198mg∕mL對(duì)照品溶液2微升、10微升，注入高效液相色譜儀，黃芪甲苷含量平均值0.198%，RSD為1.81%（外標(biāo)法計(jì)算）。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取2.7項(xiàng)下藥材粉末0.8、0.6、0.4克，分別加入對(duì)照品溶液（濃度0.198mg∕mL）的對(duì)照品1、2、4mL，精密吸取5微升注入高效液相色譜儀，加樣回收率104.6%（外標(biāo)法計(jì)算）。

2.9 不同批黃芪藥材樣品測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)中采集10批不同產(chǎn)地、科屬的黃芪藥材，依上述方法制得供試品溶液，分別將供試品溶液2或5微升注入高效液相色譜儀中，參照 2015年版藥典制得黃芩甲苷供試溶液，精密吸取0.198mg∕mL對(duì)照液 2和 10微升，外標(biāo)法測(cè)得黃芪甲苷含量87.98%.

3 討論

2015 版《中國(guó)藥典》一部黃芪藥材中含量測(cè)定乙酰基葡萄糖皂苷含量較高，經(jīng)皂化反應(yīng)制得黃芪甲苷，所以我們同理推測(cè)，黃芪甲苷測(cè)定法近似于乙酰基總皂苷測(cè)定法。經(jīng)本文研究，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)法，方法：采用Zorbax -SB-C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（70:130）；流速1. 0mL每分鐘，柱溫30度；蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)器漂移管溫度110度，氣流速度2.5L每分鐘。結(jié)果：進(jìn)樣量在0.41—1.99微克，r=0.9999，線性良好，加樣回收率為104.6%，RSD為0.62%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠、準(zhǔn)確，有良好重現(xiàn)性，可作為黃芪甲苷含量測(cè)定方法參考依據(jù)。

[1]周慧,陳曉,等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯與傳統(tǒng)飲片中黃芪甲苷的含量比較[J].中國(guó)基層醫(yī)藥,2015,22(2):272-273.

[2]荀其寧,侯晶,劉志遠(yuǎn),等.ELSD法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷含量[J].化學(xué)分析計(jì)量,2015(5):62-64.

[3]何平,彭旭旭,等.黃芪藥材中黃芪甲苷UPLC-ELSD含量方法的優(yōu)化[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015,21(5):92-94.

[4]黃建清,蒲清趙雨夢(mèng),等.HPLC-ELSD不同主產(chǎn)地黃芪飲片黃芪甲苷的含量[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2015,36(10):71-73.

[5]張旺梁,蔡麗麗,吳建國(guó),等.ELSD法測(cè)定養(yǎng)陰生津片中黃芪甲苷含量[J].中國(guó)藥業(yè),2016,25(20):53-55.

R473.5

A

1672-5018（2017）03-209-01