胃癌組織miR-215表達變化及其與患者預后的關系

刁卓，劉曉超，唐玉虎，范莉靜

(漢中市中心醫院，陜西漢中723000)

胃癌組織miR-215表達變化及其與患者預后的關系

刁卓，劉曉超，唐玉虎，范莉靜

(漢中市中心醫院，陜西漢中723000)

目的 探討miR-215在胃癌發生、發展中的作用。方法 選擇胃癌患者55例，取手術切除的胃癌組織及其配對的癌旁正常組織，采用qRT-PCR法檢測miR-215表達，并分析其與患者臨床病理參數及預后的關系。結果 胃癌組織miR-215的相對表達量明顯高于癌旁正常組織(P<0.05)，且其表達與胃癌組織分化程度、淋巴結轉移、臨床病理分期等密切相關(P均<0.05)，與患者性別、年齡無關(P均>0.05)。以miR-215相對表達量的中位值(2.83)為界值，胃癌患者miR-215高表達33例、miR-215低表達22例；生存分析顯示，miR-215高表達者中位生存時間顯著低于miR-215低表達者(P<0.05)。結論 miR-215在胃癌的發生、發展過程中起癌基因作用，其高表達者預后較差；miR-215有可能成為胃癌預后的監測指標。

胃癌；微小RNA-215；生存分析；預后

微小RNA(miRNA)是一類高度保守的小片段非編碼RNA，通過整合到RNA誘導的沉默復合物中，與其靶mRNA的3′非編碼區完全或不完全結合，降解靶mRNA或抑制翻譯，參與調節個體生長、發育及疾病發生過程相關基因的表達，在細胞分化、凋亡和腫瘤生成等過程中發揮重要作用[1]。有研究發現，在多種腫瘤組織中可檢測到異常表達的miRNAs，且其不易被RNA酶降解，在室溫放置超過24 h或反復凍融下仍十分穩定[2，3]。因此認為，miRNAs可作為理想的分子生物學標志物，用于腫瘤診斷、治療及預后評估等。miR-215是受p53誘導表達的一個miRNA，通過調控一系列細胞周期檢驗點蛋白表達，起到癌基因或抑癌基因作用[4]。大量研究證實，在結直腸癌、腎臟腫瘤、肝癌等組織中miR-215表達下調，發揮抑癌基因作用[3～6]。但在胃癌組織中miR-215表達上調，可能具有癌基因作用[7]。2010年1～4月，我們觀察了胃癌組織miR-215表達變化，并分析其表達與患者臨床病理參數及預后的關系。現分析結果并報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院手術治療的胃癌患者55例，均經術后組織病理檢查明確診斷。所有患者臨床病理資料完整，術前未接受任何抗腫瘤治療，并排除遠處轉移者。其中，男31例、女24例，年齡30～69(56.09±8.26)歲；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期23例，Ⅲ、Ⅳ期32例；組織分化程度：中高分化21例，低分化34例；淋巴結轉移：有37例，無18例。本研究經醫院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 miR-215表達檢測 采用qRT-PCR法。取手術切除的胃癌組織及癌旁正常組織，TRIzol法提取組織總RNA，分光光度計檢測總RNA的濃度和純度合格后，-80 ℃冰箱保存。取總RNA約2 μg，采用逆轉錄酶逆轉錄成cDNA，-20 ℃冰箱保存。參照GeneBank提供的基因序列，由天根生化科技(北京)有限公司合成特異性目的基因引物。miR-215上游引物：5′-CTCGAGATGTCATCCTCAG-3′，下游引物：5′-GAATTCGTGAGTTCTTCTG-3′；內參GADPH上游引物：5′-AATCCCATCACCATCTTCCA-3′，下游引物：5′-CCTGCTYCAACCACCTTCTTG-3′。采用美國ABI StepOnePlus實時熒光定量PCR儀進行擴增反應。PCR反應體系：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl21.5 μL，10 mmol/L dNTP 0.5 μL，5 U/μL Taq酶0.5 μL，10 mmol/L引物1 μL，cDNA 2 μL(相當于100 ng RNA)，雙蒸水補足至25 μL。擴增條件：95 ℃熱啟動5 min，95 ℃變性20 s，60 ℃退火和延伸共1 min，共40個循環。在PCR擴增過程中，收集熒光信號，通過Bio-Rad CFX Manager軟件計算Ct值。以GADPH基因作為內參，采用2-ΔΔCt法計算miR-215的相對表達量。試驗重復3次，取平均值。

1.3 預后隨訪 所有患者術后定期電話隨訪，隨訪截至2016年4月。生存時間以月計算，以手術日至末次隨訪所獲得的截至時間為準。55例胃癌患者中，術后接受輔助化療38例，隨訪期間出現復發轉移43例，死亡39例；因其他疾病死亡2例，失訪1例。研究結束、其他原因死亡和失訪作為截尾數據處理。

2 結果

2.1 胃癌組織及癌旁正常組織miR-215表達比較 胃癌組織miR-215的相對表達量為3.18±0.36，癌旁正常組織為1.03±0.32，二者比較P<0.05。

2.2 胃癌組織miR-215表達與患者臨床病理參數的關系 見表1。

2.3 胃癌組織miR-215表達與患者預后的關系 以miR-215相對表達量的中位值(2.83)為界值，55例胃癌患者miR-215高表達33例、低表達22例。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，其中位生存時間分別為24.6、65.3個月，二者比較P<0.01。見圖1。

3 討論

表1 胃癌組織miR-215表達與患者臨床病理參數的關系±s)

圖1 胃癌患者不同miR-215表達者的生存曲線

胃癌是源自胃黏膜上皮的惡性腫瘤，其發病率居所有消化系統惡性腫瘤的首位，是一種威脅人類健康的常見病、多發病[8]。胃癌的發生、發展是幽門螺桿菌感染、環境因素、遺傳因素共同作用的結果[9]。正常情況下，胃黏膜上皮細胞的增殖和凋亡保持動態平衡，而這種平衡的維持依賴于癌基因、抑癌基因及下游靶基因的共同調控。近年來，隨著醫療水平的不斷進步，胃癌患者的生存率有所提高，但5年生存率仍不足30%。侵襲和轉移是導致胃癌患者預后不良的主要原因[10，11]。由于胃癌的早期癥狀隱匿或無任何癥狀，易被誤診或漏診。 因此， 尋找敏感、 特異的分子生物學標志物一直是近年來研究的熱點。

miRNAs在進化過程中具有保守性，可參與細胞增殖、凋亡、分化及癌變等生命過程[12]。miR-215定位于人染色體1q41，在多種腫瘤組織中起癌基因或抑癌基因作用。Song等[3]研究發現，在骨肉瘤、結腸癌組織miR-215低表達，具有抑癌基因作用，并與化療耐藥有關。有研究發現，肺癌組織miR-215低表達，并通過下調靶基因ZEB2，參與腫瘤進展[13]；還可通過調控相關靶基因TYMS、DHFR、TS及DTL表達，參與細胞增殖、凋亡等生物過程[13，14]。與其他實體腫瘤不同，miR-215在胃癌組織中高表達，具有癌基因作用，并與腫瘤侵襲和轉移明顯相關[15～17]。但目前其作用機制尚不清楚。有研究認為，miR-215可能通過下調靶基因活化白細胞黏附因子、MMP-9表達及抑制上皮間質轉化，參與胃癌的侵襲和轉移過程[18，19]。Jin等[18]通過miRNA芯片技術及實時熒光定量PCR技術證實，胃癌組織中miR-215的表達明顯高于癌旁正常組織，且其過表達可促進胃癌細胞HFE145的遷移。

本研究結果顯示，胃癌組織miR-215的相對表達量明顯高于癌旁正常組織，表明miR-215在胃癌的發生過程中起癌基因作用，與相關報道[20～22]基本一致。臨床分期Ⅲ、Ⅳ期者miR-215的相對表達量明顯高于Ⅰ、Ⅱ期者，組織分化程度低分化者明顯高于中高分化者，表明miR-215的相對表達量越高，腫瘤浸潤和侵襲能力越強；有淋巴結轉移者miR-215的相對表達量明顯高于無淋巴結轉移者，表明miR-215的相對表達量越高，腫瘤淋巴結轉移能力越強；但其表達與患者性別、年齡無關；與李良平等[23]報道基本一致。本研究還發現，miR-215高表達者中位生存時間明顯低于miR-215低表達者，提示miR-215表達越高，胃癌患者中位生存時間越短，預后越差。

綜上所述，miR-215在胃癌的發生過程中具有癌基因作用，可參與胃癌的侵襲和轉移過程，并與患者預后有關，有可能成為胃癌診斷及預后判斷的分子生物學標志物之一。

[1] Mitchell PS, Parkin RK, Kroh EM, et al. Circulating microRNA as stable blood-based markers for cancer detection[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2008,105(30):10513-10518.

[2] Mongre RK, Sodhi SS, Ghosh M, et al. A new paradigm to mitigate osteosarcoma by regulation of microRNAs and suppression of the NF-κB signaling cascade[J]. Dev Reprod, 2014,18(4):197-212.

[3] Song B, Wang Y, Titmus MA, et al. Molecular mechanism of chemoresistance by miR-215 in osteosarcoma and colon cancer cells[J]. Mol Cancer, 2010(9):96.

[4] Georges SA, Biery MC, Kim SY, et al. Coordinated regulation of cell cycle transcripts by p53-inducible microRNAs, miRNA-192 and miRNA-215[J]. Cancer Res, 2008,68(24):10105-10112

[5] Khella HW, Bakhet M, Allo G, et al. miR-192, miR-194 and miR-215: a convergent microRNA network suppressing tumor progression in renal cell carcinoma[J]. Carcinogenesis, 2013,34(10):2231-2239.

[6] Liu F, You X, Chi X, et al. Hepatitis B virus X protein mutant HBxΔ127 promotes proliferation of hepatoma cells through up-regulating miR-215 targeting PTPRT[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2014,444(2):128-134

[7] Deng Y, Huang Z, Xu Y, et al. MiR-215 modulates gastric cancer cell proliferation by targeting RB1[J]. Cancer Lett, 2013,342(1):27-35.

[8] Ferlay J, Autier P, Boniol M, et al. Eestimates of the cancer incidence and mortality in Europe in 2006[J]. Ann Oncol, 2007,18(3):581-592.

[9] 文亦磊，張錫流.EB病毒相關胃癌的研究新進展[J].廣東醫學，2015，36(8)：1291-1293.

[10] Mahar AL, Mcleod RS, Kiss A, et al. A systematic review of the effect of institution and surgeon factors on surgical outcomes for gastric cancer[J]. J Am Coll Surg, 2012,214(5):860-868.

[11] Mcguill MJ, Byrne P, Ravi N, et al. The prognostic impact of occult lymph node metastasis in cancer of the esophagus or esophago-gastric junction: systematic review and meta-analysis[J]. Dis Esophagus, 2008,21(3):236-240.

[12] Wang D, Qiu C, Zhang H, et al. Human microRNA oncogenes and tumor suppressors show significantly different biological patterns: from functions to targets[J]. PLoS One, 2010,5(9):855-867.

[13] Hou Y, Zhen J, Xu X, et al. miR-215 functions as a tumor suppressor and directly targets ZEB2 in human non-small cell lung cancer[J]. Oncol Lett, 2015,10(4):1985-1992.

[14] Fassan M, Volinia S, Palatini J, et al. MicroRNA expression profiling in the histological subtypes of barrett′s metaplasia[J]. Clin Transl Gastroenterol, 2013(4):e34.

[15] Wang B, Herman-Edelstein M, Koh P, et al. E-cadherin expression is regulated by miR-192/215 by a mechanism that is independent of the profibrotic effects of transforming growth factor-beta[J]. Diabetes, 2010,59(7):1794-1802.

[16] Chiang Y, Zhou X, Wang Z, et al. Expression levels of microRNA-192 and -215 in gastric carcinoma[J]. Pathol Oncol Res, 2012,18(3):585-591.

[17] Ueda T, Volinia S, Okumura H, et al. Relation between microRNA expression and progression and prognosis of gastric cancer: a microRNA expression analysis[J]. Lancet Oncol, 2010,11(2):136-146.

[18] Jin Z, Selaru FM, Cheng Y, et al. MicroRNA-192 and -215 are upregulated in human gastric cancer in vivo and suppress ALCAM expression in vitro[J]. Oncogene, 2011,30(13):1577-1585.

[19] 周志威，聶玉強，杜艷蕾，等.活化白細胞黏附分子在胃癌組織中的表達及其調控機制[J].廣東醫學，2013，34(18)：2784-2788.

[20] Xu YJ, Fan Y. MiR-215/192 participates in gastric cancer progression[J]. Clin Transl Oncol, 2015,17(1):34-40.

[21] 李良平，龍思澤，高采平.胃癌患者血清microRNA-192和microRNA-215的表達及臨床意義[J].中華臨床醫師雜志(電子版)，2013，7(12)：5223-5227.

[22] Chiang Y, Zhou X, Wang Z, et al. Expression levels of microRNA-192 and -215 in gastric carcinoma[J]. Pathol Oncol Res, 2012,18(3):585-591.

[23] 李良平，龍思澤，高采平.胃癌患者血清microRNA-192和microRNA-215的表達及臨床意義[J].中華臨床醫師雜志(電子版)，2013，7(12)：5223-5227.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.08.026

R735.2

B

1002-266X(2017)08-0080-03

2016-05-27)