多葉唐松草藥材中鹽酸小檗堿的含量研究

劉長明， 張 磊， 楊 爽

(河北省承德市食品藥品檢驗檢測中心， 河北 承德 067000)

多葉唐松草藥材中鹽酸小檗堿的含量研究

劉長明， 張 磊， 楊 爽

(河北省承德市食品藥品檢驗檢測中心， 河北 承德 067000)

目的：建立HPLC法馬尾連含量測定方法。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，DAD檢測器，以乙腈-0.05%磷酸為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為265nm，進樣量10μl。結果：5組多葉唐松草的鹽酸小檗堿含量為0.51%、0.81%、1.14%、0.61%、0.54%。結論：該方法專屬性強，能夠快速、準確地測定馬尾連(多葉唐松草)中鹽酸小檗堿含量，為更好地控制河北馬尾連的質量并評價其藥用價值提供科學依據。

多葉唐松草； 含量測定； 中藥質量控制

馬尾連為毛茛科植物多葉唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根莖。[1]馬尾連和黃連相似。[2]其功效較多，如清熱、燥濕、解毒等。[3]多葉唐松草屬于唐松草屬植物。[4]唐松草屬植物含有較多生物堿，生物堿有抗菌、抗癌作用。鹽酸小檗堿作為其中有代表性的一種生物堿，本研究以鹽酸小檗堿為測定指標，對多葉唐松草中鹽酸小檗堿的含量進行測定，并做了方法學驗證，建立馬尾連(多葉唐松草)的鹽酸小檗堿含量測定方法，對馬尾連(多葉唐松草)中的鹽酸小檗堿的含量進行控制。

1 儀器、樣品和試劑

Waters e2695高效液相色譜儀 Agilent1100高效液相色譜儀，超聲波清洗器(天津科貝爾光電技術有限公司)，XS105型電子分析天平(瑞士梅特勒有限公司)。

藥材共計5個批次來自河北各地藥材市場，經河北省藥品檢驗院鑒定為毛茛科植物多葉唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根莖。鹽酸小檗堿(含量為86.7%C20H18ClNO4)對照品購于中國食品藥品檢定研究院。

乙腈、甲醇均為色譜純，水為杭州娃哈哈集團有限公司生產的純凈水，磷酸等試劑均為分析純。

2 方法學的建立與驗證

2.1 對照品與樣品溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備：精取鹽酸小檗堿對照品，以流動相[乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)]為溶劑，制成每1mL含25μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：取馬尾連粉末(過二號篩) 0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇-鹽酸(100：1)的混合溶液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)1h，放冷，再稱定重量，用乙醇-鹽酸(100：1)的混合溶液補足減失的重量，搖勻，0.45m濾膜過濾，即得。

2.2 色譜條件：色譜柱：C18；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)；檢測波長：265nm；進樣量：10μl。

2.3 專屬性考察：取對照品溶液、供試品溶液，按上述色譜條件測定，并利用二極管陣列檢測器對峰純度進行測試，表明其它成分不干擾被測成分的測定。見圖1。

圖1 馬尾連色譜純度圖

圖2 鹽酸小檗堿色譜純度圖

2.4 線性關系考察：精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液(0.01499g→50mL)，加[乙醇-鹽酸(100：1)]溶液配制成系列濃度溶液，質量分別為0.05198、0.10397、0. 15595、0.20794、0.25992、0.31191、0.36389、0.41588、0. 4678610μg，根據“2.2”項下色譜條件進樣測定，縱坐標Y為峰面積，縱坐標，橫坐標 X為鹽酸小檗堿質量(μg)，計算線性回歸，所得回歸方程：Y=-78752+ 4910936X r=0.9999，線性范圍為 0.05198～0. 46786μg。

2.5 重復性試驗：馬尾連(多葉唐松草)粉末，混勻，稱取粉末0.06g、0.10g、0.14g各三份，按“2.1.2”項下條件制備供試品溶液，根據“2.2”項下條件進樣測定，鹽酸小檗堿含量平均值為1.65%，RSD為0.2%。表明重復性試驗結果較好。

2.6 穩定性試驗：取同一馬尾連(多葉唐松草)供試品溶液，在室溫下放置，分別于0、1、1.5、2、4.5、12、24h進樣測定，記錄色譜峰峰面積，結果峰面積的RSD為0. 3%，表明供試品溶液24h內放置較穩定，基本無變化。

2.7 回收率試驗：采用加樣回收法，取2.6項下已測知含量的馬尾連(多葉唐松草)粉末每份約0.10g，精密稱定，分別加入高、中、低濃度的對照品溶液，制備供試品溶液，根據“2.2”項下條件進樣測定，計算出回收率，回收率為103.65%，RSD為1.0%，本方法的回收率符合要求。

2.8 耐用性實驗：采用同一根色譜柱(Diamonsil)分別用Waters e2695、Agilent高效液相色譜儀，測定同一批樣品，含量結果Rd為1.7%；采用不同廠家的色譜柱( Diamonsil C18，5μm，4.6mm×200mm)、(Waters C18，5μm，4.6mm×250mm)、(Thermo C18，5μm，4.6mm× 150mm)，測定同一批馬尾連(多葉唐松草)樣品，分離度均較好，峰形均較對稱。這一實驗結果更好的驗證了此含量測定的方法適用于不同色譜儀，不同色譜柱。

2.9 多葉唐松草測定結果：取5組馬尾連(多葉唐松草)藥材，來自不同產地，分別按“2.1.2”項下條件制備供試品溶液，根據“2.2”項下條件進樣測定，計算含量，結果見表1。

表1 馬尾連含量測定結果

3 討 論

馬尾連具有抗菌作用，與黃連抗菌譜相似，從馬尾連和黃連中分別提取的小檗堿，二者無論是抑菌范圍或是抑菌強度均表現一致性。[2]有文章研究選擇鹽酸小檗堿作為控制指標進行檢測唐松草植物中的總生物堿類含量，山東中藥材標準2012年版將鹽酸小檗堿作為馬尾連的指標性成分，2015年版中國藥典將鹽酸小檗堿作為黃連的指標性成分，因此，選用鹽酸小檗堿作為馬尾連的考察指標。

本實驗從環保角度考慮，選擇乙醇-鹽酸溶液為提取溶劑，更優于甲醇作為提取溶劑。選用鹽酸小檗堿的紫外檢測波長為265nm，此波長處鹽酸小檗堿有較大吸收。采用HPLC法建立多葉唐松草中鹽酸小檗堿的含量測定方法。能更好的控制馬尾連其中一種基源(多葉唐松草)的質量，此方法簡單可靠，易于操作，準確，重現性好。對不同產地的馬尾連樣品分析，結果表明鹽酸小檗堿的含量有差別。可能由于產地等方面因素，筆者將進一步研究產地與質量的影響。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.附錄22.

[2] 中國醫學研究院藥學研究所.中藥志[M].北京：人民衛生出版社，1979.264～266.

[3] 李時珍.本草綱目[M].北京，人民衛生出版社，1982.888～894.

[4] 張永紅，朱琳，任棣.唐松草屬植物葉的掃描電鏡觀察與鑒別[J].蘭州醫學院學報，1998，24(3)：21～23.

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.056

1006-6233(2017)01-0165-03

河北省承德市科技計劃自籌經費項目，(編號：201601A010)