香茶藨子葉片總酚、總黃酮提取及抗氧化性研究

鄒維娜,王 微,*,徐啟江,杜偉偉,李靈玉

(1.東北林業大學,森林植物生態學教育部重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150040;2.東北林業大學,林業生物制劑教育部工程研究中心,黑龍江哈爾濱 150040; 3.東北林業大學,生物資源生態利用國家地方聯合工程實驗室,黑龍江哈爾濱 150040;4.東北林業大學生命科學學院,林木遺傳育種國家重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150040)

香茶藨子葉片總酚、總黃酮提取及抗氧化性研究

鄒維娜1,2,3,王 微1,2,3,*,徐啟江4,*,杜偉偉1,2,3,李靈玉1,2,3

(1.東北林業大學,森林植物生態學教育部重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150040;2.東北林業大學,林業生物制劑教育部工程研究中心,黑龍江哈爾濱 150040; 3.東北林業大學,生物資源生態利用國家地方聯合工程實驗室,黑龍江哈爾濱 150040;4.東北林業大學生命科學學院,林木遺傳育種國家重點實驗室,黑龍江哈爾濱 150040)

目的:獲得微波輔助提取香茶藨子葉片中總酚及總黃酮的最佳工藝,以及香茶藨子葉片中總酚及總黃酮的體外抗氧化活性。方法:在單因素的基礎上,采用響應面法對影響總酚和總黃酮提取量的主要因素進行分析,探討微波輔助提取香茶藨子葉片中總酚及總黃酮的最優工藝,并與超聲提取、索氏提取進行比較。采用DPPH和FRAP法對香茶藨子葉片中總酚及總黃酮的自由基清除能力和總抗氧化活性進行評價。結果:最佳的提取工藝條件為:提取溫度58 ℃,液固比39∶1 mL/g,乙醇濃度57%,提取時間15 min和微波功率600 W,此條件下總酚及總黃酮的提取量分別為99.89、38.16 mg/g。微波輔助提取得到的香茶藨子葉片提取物對DPPH自由基有很好的清除作用,IC50值為0.0445 mg/mL,此外其還有較高的總抗氧化能力,FRAP值為4.832 mmol/g。結論:優選的總酚、總黃酮提取工藝穩定可行,香茶藨子葉片中總酚及總黃酮有較好的抗氧化活性,為其研究開發提供一定的科學依據。

香茶藨子,總酚,總黃酮,響應面法,微波輔助提取,抗氧化

香茶藨子(RibesodoratumWendl.)為虎耳草科茶藨子屬落葉灌木,又名黃花茶藨子。茶藨屬植物為漿果類資源,被稱為第三代新興果樹[1]。香茶藨子原產北美洲,在我國東北及華北地區多有栽培[2]。耐寒力強,在東北、華北及西北地區冬季不需要采取防護措施即可安全越冬[3]。

茶藨子屬植物的果實、葉片及芽中含有大量的營養成分[4]。現有研究表明:茶藨子屬植物中含有槲皮素、蘆丁、異槲皮苷、黃芩苷、楊梅素、山柰酚[5]、沒食子酸、香草酸、沒食子兒茶素等[6]多種有效成分。酚及黃酮類活性化合物不僅對保護心血管系統,抗癌,抗病毒,治療咳嗽、風濕、冠心病、肝臟及動脈硬化等會起到一定治療作用[7-9],也具有抗氧化和抗炎活性[10]。因此,茶藨子屬植物在醫藥、食品保健等領域都有廣闊的應用前景。

目前對于茶藨子屬植物的研究與應用方面多集中于黑茶藨子,進而對黑茶藨子的需求量日漸增多,盲目開發及人為破壞導致其群體數量及分布范圍變小[11],將阻礙其資源和產品的利用,所以當務之急是尋找一種新的替代性資源,作為同屬植物的香茶藨子可成為首選考慮,現在對于香茶藨子的研究多集中于栽培管理方面,對其酚及黃酮類活性物質的提取工藝、抗氧化作用鮮有報道。本文以香茶藨子葉為研究對象,對微波輔助提取、超聲提取、索氏提取進行了比較,與常規提取方法相比,微波輔助提取具有節能、省時、高效等優點[12],此外,該方法在提取過程中無粉塵、有害氣體、余熱產生,符合綠色環保要求。隨后,對香茶藨子葉片中總酚和總黃酮的微波輔助提取工藝進行優化并研究其抗氧化活性,為香茶藨子的開發利用提供科學理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

香茶藨子葉片 采于哈爾濱東北林業大學知園,晾干,粉碎,過200目篩,置陰涼干燥處備用;總抗氧化能力檢測試劑盒(FRAP法) 碧云天生物技術有限公司;VC、DPPH、Folin-Ciocalteu(2N) 美國Sigma公司;沒食子酸、蘆丁標準品 南京澤郎醫藥科技有限公司;碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇 均為市售分析純。

MAS-II微波反應罐 新儀微波化學科技有限公司;HX-200A植物粉碎機 永康市溪岸五金藥具廠;WK891型電熱恒溫鼓風干燥箱 重慶四達實驗儀器廠;SHB-III型循環水式多用真空泵 鄭州長城科工貿有限公司;FA1104電子分析天平 上海天平儀器廠;721可見分光光度計 上海佑科儀器儀表有限公司;Infinite 200 PRO NanoQuant酶標儀 上海安景科技有限公司;KQ-250DB型數控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;索氏提取器 天津玻璃儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準工作曲線的繪制 以沒食子酸為標準品,波長的測定參考文獻[13],采用Folin-Ciocalteu法測得總酚含量。取40 μL不同濃度(0、100、200、400、600、800及1000 μg/mL)沒食子酸于離心管中,分別加入1.8 mL稀釋20倍的Folin-Ciocalteu試劑(2N)。混合均勻避光靜置5 min后,添加1.2 mL Na2CO3(7.5%)避光靜置1～2 h,取澄清液用可見分光光度計在波長765 nm處測吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,沒食子酸質量濃度(μg/mL)為橫坐標,繪制沒食子酸標準曲線,得標準工作曲線方程為:y=0.0014x+0.038,R2=0.9993。

以蘆丁為標準品,采用NaNO2-Al(NO3)3比色法測總黃酮含量,參考韓志萍等的方法稍作調整[14]。取0.2 mL不同濃度(0、50、100、200、300、400、500 μg/mL)蘆丁于離心管中,分別加入2.8 mL蒸餾水,加5%亞硝酸鈉水溶液0.5 mL,放置6 min。加10%硝酸鋁0.5 mL,混勻后放置6 min。加入5%氫氧化鈉溶液2.5 mL,混勻,放置15 min后,蒸餾水定容至10 mL(加3.5 mL水)。用可見分光光度計,在λ=510 nm處測吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,蘆丁質量濃度(μg/mL)為橫坐標,繪制蘆丁標準曲線,得標準工作曲線方程為:y=0.0002x+0.0036,R2=0.9991。

1.2.2 香茶藨子葉片中總酚及總黃酮提取量的測定 稱取1.00 g香茶藨子葉片粉末,在一定的溫度、乙醇濃度、液固比下提取,抽濾,離心,定容。移取一定量待測液按1.2.1方法測定吸光度,按下式計算總酚及總黃酮提取量。

總酚/總黃酮提取量(mg/g)=(C×V×n)/m

式中:C代表根據回歸方程計算得到的質量濃度(mg/mL),V代表提取液總體積(mL),n代表稀釋倍數,m代表香茶藨子葉片粉末的質量(g)。

1.2.3 香茶藨子葉片中總酚及總黃酮的提取

1.2.3.1 微波法提取 稱取1.00 g香茶藨子葉片粉末,加入一定量的乙醇后放于微波儀器中設置不同的條件進行提取(具體參考數值詳見1.2.4單因素實驗設計),抽濾,離心,定容,每組實驗重復3次。移取一定量待測液按1.2.1方法測定吸光度。

1.2.3.2 超聲法提取 稱取1.00 g香茶藨子葉片粉末,加入50%乙醇30 mL,于50 ℃、功率250 W條件下超聲提取30 min,重復3次,提取液抽濾,離心,定容,移取一定量待測液按1.2.1方法測定吸光度。

1.2.3.3 索氏法提取 稱取1.00 g香茶藨子葉片粉末,加入50%乙醇30 mL,于50 ℃條件下提取2 h,重復3次,提取液抽濾,離心,定容,移取一定量待測液按1.2.1方法測定吸光度。

1.2.4 微波提取的單因素實驗設計 分別以不同提取溫度、液固比、乙醇濃度、提取時間、微波功率作為單因素,考察各因素對總酚、總黃酮提取量的影響,每組實驗重復3次。

1.2.4.1 微波溫度的影響 在液固比30∶1 mL/g,乙醇濃度50%,提取時間15 min,微波功率600 W的條件下,探討微波溫度(30、40、50、60、70 ℃)對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取量的影響。

1.2.4.2 液固比的影響 在微波溫度60 ℃,乙醇濃度50%,提取時間15 min,微波功率600 W的條件下,探討液固比(10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1 mL/g)對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取量的影響。

1.2.4.3 乙醇濃度的影響 在微波溫度60 ℃,液固比40∶1 mL/g,提取時間15 min,微波功率600 W的條件下,探討乙醇濃度(10%、30%、50%、70%、90%)對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取量的影響。

1.2.4.4 提取時間的影響 在微波溫度60 ℃,液固比40∶1 mL/g,乙醇濃度50%,微波功率600 W的條件下,探討提取時間(5、10、15、20、25 min)對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取量的影響。

1.2.4.5 微波功率的影響 在微波溫度60 ℃,液固比40∶1 mL/g,乙醇濃度50%,提取時間15 min的條件下,探討微波功率(300、400、500、600、700 W)對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取量的影響。

1.2.5 響應面優化實驗設計 綜合單因素實驗結果,利用響應面分析法進行提取工藝條件的優化[15]。選取提取溫度、液固比、乙醇濃度作為響應變量,以總酚及總黃酮提取量為響應值,根據Box-Benhnken中心組合設計原理進行三因素三水平實驗設計,實驗因素和水平見表1。

表1 響應面分析因素與水平Table 1 Factors and levels of response surface methodology

1.2.6 香茶藨子葉片提取物的抗氧化活性測定 將香茶藨子葉片在優化后的微波提取工藝及其他不同方法下得到的提取物進行旋干,精密稱取VC和旋干粗提物2.00 mg,再用2.5 mL乙醇將其溶解,然后配制成一系列不同濃度的VC和樣品溶液,其濃度分別為0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 mg/mL,備用。

1.2.6.1 對DPPH自由基清除率的測定 DPPH溶液為紫紅色,在517 nm處有最大光吸收,通過加入抗氧化劑后吸光值的下降表示對自由基的清除作用。取0.1 mL不同濃度的樣品乙醇溶液與1.4 mL的乙醇溶液混合,再加入1 mL DPPH(0.04 mg/mL)放置于避光處70 min,反應完成后進行檢測,初始吸光度以1.5 mL的55%乙醇溶液與1 mL DPPH(0.04 mg/mL)作為混合液。在517 nm處測定樣品溶液吸光值,每個樣品重復測定3次,結果取平均值[16]。

DPPH自由基清除率實驗計算公式:DPPH清除能力(%)=(1-As/Ac)×100

在517 nm波長下,初始對照液吸光度為Ac,樣品的吸光度為As。

1.2.6.2 FRAP法測定總抗氧化能力 稱取27.8 mg FeSO4·7H2O,溶解并定容到1 mL,此時濃度即100 mmol/L。取適量100 mmol/L FeSO4溶液稀釋至0.05、0.1、0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、2、4 mmol/L,備用。

96孔板的每個檢測孔中加入180 μL FRAP工作液,空白對照孔中加入5 μL 55%乙醇溶液;標準曲線孔內加入5 μL各種濃度的FeSO4標準溶液;樣品檢測孔內加入5 μL各種樣品,輕輕混勻。37 ℃下反應5 min,于593 nm處重復3次平行測定其吸光度[17]。以吸光度(A)為縱坐標,FeSO4摩爾濃度(mmol/L)為橫坐標,繪制FeSO4標準曲線,得標準工作曲線方程為:y=0.2862x+0.0296,R2=0.999。樣品的FRAP值以達到相同吸光度所需FeSO4的毫摩爾數表示。FRAP值越大,抗氧化活性越強。

1.3 數據處理

采用Microsoft Excle(Office 2007)、Design-Expert.V8.0.6.1、Origin8 Pro SR4軟件進行數據整理及分析。

2 結果與分析

2.1 不同提取工藝的比較

微波提取、超聲提取、索氏提取對香茶藨子葉片中總酚及總黃酮提取量影響的結果如圖1,可以看出微波的提取效果明顯好于另外兩種,這可能是由于在微波作用下,溶劑分子高速轉動成為激發態,溶劑分子回到基態所釋放的能量傳遞給目標化合物分子,加速其熱運動,從而使提取速率提高數倍,同時又減少其他雜質的溶出,保證提取目標物的質量[18]。超聲提取、索氏提取需要的時間較長,且提取量低于微波提取,因此選定微波輔助提取作為樣品的提取方法。

圖1 不同提取工藝的比較Fig.1 Comparison of different extraction processes

2.2 單因素實驗結果與分析

2.2.1 微波溫度的影響 由圖2可以看出,總酚、總黃酮提取量隨提取溫度的升高而增長較快,在50 ℃和60 ℃時,總酚、總黃酮提取量較大,溫度高于60 ℃時總酚、總黃酮提取量開始下降。這可能是由于溫度過高,其中的活性成分會受到破壞,雜質的溶出量增加,提取時適宜溫度約為60 ℃。

圖2 提取溫度的影響Fig.2 Effect of extraction temperature

2.2.2 液固比的影響 由圖3可以看出,在液固比40∶1 mL/g時,總酚、總黃酮提取量最高,當液固比小于40∶1 mL/g 時,活性物質不能完全被浸出;當液固比大于40∶1 mL/g后,提取量開始下降。這可能是由于隨著液固比增加,溶液濃度逐漸變小,酚及黃酮類活性物質對微波能的吸收受到影響[19],因而香茶藨子總酚、總黃酮的提取量不增加反而下降。從提取效果和減少溶劑用量等方面綜合考慮,用量應不宜過大,故將液固比定在約40∶1 mL/g比較合適。

圖3 液固比的影響Fig.3 Effect of liquid-to-solid ratio

圖4 乙醇濃度的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration

2.2.3 乙醇濃度的影響 由圖4可以看出,總酚、總黃酮提取量開始隨乙醇濃度的增大而增加,當濃度達到50%～70%時,總酚、總黃酮提取量最高,當乙醇濃度再增加時,提取量又開始下降,這可能是由于乙醇濃度過高,其他醇溶性物質被提出,導致酚及黃酮類化合物溶出量下降[20]。從成本和提取量來考慮,乙醇濃度最好控制在50%～70%為好。

2.2.4 提取時間的影響 由圖5可以看出,總酚、總黃酮提取量隨提取時間的加長不斷增大,但15 min后趨于穩定且略有下降趨勢,這可能與微波提取時間過長導致酚及黃酮類物質破壞有關[21],因此提取時間選擇15 min。

圖5 提取時間的影響Fig.5 Effect of extraction time

2.2.5 微波功率的影響 從圖6分析發現,功率越大,總酚、總黃酮提取得量越高。但當功率為600 W和700 W時,總酚、總黃酮提取量的變化不大,由此可知提取功率600 W較為適宜。

圖6 微波功率的影響Fig.6 Effect of microwave power

2.3 響應面法優化提取工藝

2.3.1 回歸模型的建立與分析 在本實驗中,采用BBD實驗設計及響應面分析對香茶藨子葉片中總酚及總黃酮提取量影響比較顯著的3個參數(提取溫度、液固比、乙醇濃度)做了模型擬合以及條件預測。方案及結果如表2所示。

采用Design-Expert.V8.0.6.1軟件,對表2中的實驗數據進行回歸分析,得出香茶藨子葉片中總酚及總黃酮提取量的回歸方程:

以總酚的提取量Y1(mg/g)為響應值的多元函數回歸方程為:

以總黃酮的提取量Y2(mg/g)為響應值的多元函數回歸方程為:

Y2=-13.944+1.067X1+0.842X2+0.242X3-4.467×10-3X1X2+1.028×10-3X1X3+2.189×10-3X2X3-8.103×10-3X12-8.937×10-3X22-3.787×10-3X32

表2 響應面實驗方案及結果Table 2 Response surface design and results

對上述方程進行方差分析,結果如表3所示。

表3 總酚總黃酮提取量的方差分析Table 3 ANOVA statistics of the model for extraction yields of total phenolics and flavonoids

從表3中香茶藨子葉片中總酚以及總黃酮的提取量的二次模型方差統計分析的結果能夠看出其實驗模型模擬具有良好的相關性,R2值分別為0.9984和0.9721,p值分別為<0.0001、0.0001,并且失擬項p值分別為0.1621、0.1066,模型擬合顯著(p<0.05)并且失擬項不顯著(p>0.05),表明建立的此模型為有效模型。

對于指標總酚，各項的方差分析表明,一次項、二次項及平方項總酚提取量均有極顯著的影響。對于指標總黃酮一次項、平方項對總黃酮提取量影響極顯著，二次項X1X2顯著，X1X3、X2X3不顯著。此外,各因素F值可以反映出其對響應值的重要性,若F值越大,則該因素對實驗結果的影響越大。由表3中F值可知各單因素對香茶藨子葉片中總酚提取量的影響程度大小依次為:提取溫度>液固比>乙醇濃度;各單因素對香茶藨子葉片中總黃酮提取量的影響程度大小依次為:乙醇濃度>液固比>提取溫度;每兩因素交互作用對香茶藨子葉片中總酚提取量的影響程度最顯著的是提取溫度和乙醇濃度;每兩因素交互作用對香茶藨子葉片中總黃酮提取量的影響程度最顯著的是提取溫度和液固比。

2.3.2 響應面分析與優化 根據模型繪制出交互因素響應面圖如圖7。

從圖7A曲面圖可以看出,沿提取溫度方向較液固比方向的曲面陡,等高線密集,說明提取溫度對香茶藨子葉片中總酚提取量的影響較液固比顯著。從圖7B曲面圖可以看出,其等高線趨向于橢圓形,且坡度最陡,說明提取溫度和乙醇濃度的交互作用最為顯著;從圖7C曲面圖可以看出,其等高線趨向于橢圓形,坡度較緩,說明液固比和乙醇濃度有較顯著的交互作用但弱于提取溫度和乙醇濃度。

圖7 香茶藨子葉片中總酚(A～C)、總黃酮(D～F)提取量的響應面曲線圖Fig.7 Response surfaces for total phenolics(A～C)and total flavonoids(D～F)contents in the leaf of Ribes odoratum Wendl

從圖7D曲面圖可以看出,其等高線趨向于橢圓形,坡度最陡,且由表3可知,X1X2的p值小于0.05,說明提取溫度和液固比的交互作用顯著;從圖7E曲面圖可以看出,響應面最為平緩,其等高線也更趨向于圓形,且X1X3的p值大于0.05,說明提取溫度和乙醇濃度的交互作用不顯著;從圖7F曲面圖可以看出,其等高線趨向于橢圓形,坡度較緩,且X2X3的p值大于0.05,說明液固比和乙醇濃度的交互作用較不顯著。與F值大小比較得到的結果相符。

通過Design-Expert.V8.0.6.1軟件對香茶藨子葉片中總酚、總黃酮的微波輔助提取工藝條件進行優化,得到較優工藝參數為:提取溫度58.37 ℃,液固比38.9∶1 mL/g,乙醇濃度57.32%,提取時間15 min和微波功率600 W。在此條件下,總酚、總黃酮提取量的預測值為99.38、39.58 mg/g。為便于實際操作,在實際操作中將以上工藝參數修正為:提取溫度58 ℃,液固比39∶1 mL/g,乙醇濃度57%,提取時間15 min和微波功率600 W。

2.3.3 模型驗證 為驗證優化設計所得結果,將會在最優條件下進行驗證性實驗。提取香茶藨子葉片中總酚、總黃酮的最優條件:提取溫度58 ℃,液固比39∶1 mL/g,乙醇濃度57%,提取時間15 min和微波功率600 W。在此優化條件下進行3次平行實驗,取平均值,得到的香茶藨子葉片中總酚、總黃酮的平均提取量分別為99.89 mg/g和38.16 mg/g,與預測值相差很小,說明該模型與實際擬合度良好,用于預測實驗結果比較可靠,可用于香茶藨子葉片中總酚、總黃酮提取工藝的優化。

2.4 香茶藨子葉片提取物的抗氧化活性測定

2.4.1 對DPPH自由基清除率的測定 由圖8可以看出,微波法輔助提取香茶藨子葉片提取物對DPPH自由基有明顯的清除作用,在0.0125～0.8 mg/mL的濃度范圍內,香茶藨子葉片提取物清除DPPH自由基的能力為15.35%～89.09%,隨著濃度的增加,其對DPPH自由基的清除能力增強,對DPPH自由基的清除率具量效關系。

圖8 DPPH自由基清除能力的測定Fig.8 The mensuration of DPPH radical scavening activity

VC、微波輔助提取物、超聲輔助提取物、索氏提取物對DPPH自由基清除能力的IC50值分別為0.0339、0.0445、0.0562和0.0797 mg/mL。由此可見,三種提取方法獲得的提取物對DPPH自由基的清除能力分別為:VC>微波提取物>超聲提取物>索氏提取物,微波輔助提取得到的提取物對DPPH自由基具有更好的清除效果。

2.4.2 FRAP法測定總抗氧化能力 采用FRAP法測定不同方法下得到的香茶藨子葉片提取物的抗氧化能力,結果如圖9所示,抗氧化能力由高到低為:微波提取>超聲提取>索氏提取。結果表明對于抗氧化活性物質的提取,微波輔助提取效果最好,索氏提取效果最差。

圖9 不同提取方法的抗氧化能力比較Fig.9 The comparation of antioxidant ability between different extraction method

3 結論

本實驗分別運用微波提取、超聲提取、索氏提取對香茶藨子葉片中酚及黃酮類化合物進行提取,相較于其他兩種方法,微波提取時間短且提取量高,因此微波提取法適于從香茶藨子葉片中提取酚及黃酮類化合物,具有提取速度快,效率高,避免長時間高溫接觸而導致的化合物降解等優點[22]。

通過響應面法優化微波提取香茶藨子葉片中總酚及總黃酮,得到最佳提取工藝條件為:提取溫度58 ℃,液固比39∶1 mL/g,乙醇濃度57%,提取時間15 min和微波功率600 W,此條件下總酚及總黃酮的實際提取量分別為99.89 mg/g和38.16 mg/g。微波提取得到的活性物質較超聲提取、索氏提取具有更好的DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力,本文為香茶藨子葉片的開發利用提供了一定的理論依據。

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Extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf ofRibesodoratumWendl. and its antioxidant activity

ZOU Wei-na1,2,3,WANG Wei1,2,3,*,XU Qi-jiang4,*,DU Wei-wei1,2,3,LI Ling-yu1,2,3

(1.Key Laboratory of Forest Plant Ecology,Ministry of Education,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China;2.Engineering Research Center of Forest Bio-preparation,Ministry of Education,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China;3.State Engineering Laboratory for Bio-Resource Eco-Utilization,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China;4.The State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding,College of Life Sciences,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China)

Objective:To obtain the optimum microwave-assisted extraction process for total phenolics and flavonoids from the leaf ofRibesodoratumWendl. and to examine the antioxidant activity. Method:Based on single factor tests,effects of various factors on total phenolics and flavonoids contents were analyzed through response surface methodology(RSM).The optimal conditions for microwave extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf ofRibesodoratumWendl. were discussed.And the comparison between different extraction methods,such as ultrasonic extraction and soxhlet extraction were also investigated. Moreover,the DPPH radical scavenging capacity and FRAP total antioxidant activity tests were carried out to determine its potential antioxidant activity. Result:The optimum conditions for microwave-assisted extraction were determined as follows:extraction temperature 58 ℃,liquid-to-solid ratio 39∶1 mL/g,ethanol concentration 57%,extraction time 15 min and microwave power 600 W. The extraction yields of total phenolics and flavonoids were up to 99.89 mg/g and 38.16 mg/g under the optimal conditions. The antioxidant tests showed that the total phenolics and flavonoids extracted from the leaf ofRibesodoratumWendl. had a potent scavenging effect on DPPH free radicals with IC50value of 0.0445 mg/mL and FRAP ferric reducing antioxidant power with value of 4.832 mmoL/g. Conclusion:The microwave-assisted extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf ofRibesodoratumWendl. was stable and feasible,and the extracts by this method also exhibited a better antioxidant activity. The study could provide a certain scientific basis for research and development ofRibesodoratumWendl..

RibesodoratumWendl.;total phenolics;total flavonoids;response surface methodology;microwave-assisted extraction;antioxidant activity

2016-06-15

鄒維娜(1992-)，女，在讀碩士研究生，研究方向：生藥學，E-mail:fht1167@126.com。

*通訊作者:王微(1978-)，女，副研究員，研究方向：植物藥提取及活性研究，E-mail:wangwping780110@163.com。 徐啟江(1970-)，男，教授，研究方向：植物分子系統發育生物學，E-mail:249904367@qq.com。

E類中央高校基本科研業務費專項資金項目(創新團隊與重大項目培育資金項目)(2572014EA03-03)。

TS201.1

B

1002-0306(2017)02-0266-07

10.13386/j.issn1002-0306.2017.02.043