獻血者HIV感染標志物檢測方法的研究進展

林國奎，楊 坤，李新艷，姚德耀，黃新寶

（廣西貴港市中心血站，廣西 貴港 537100）

獻血者HIV感染標志物檢測方法的研究進展

林國奎，楊 坤，李新艷，姚德耀，黃新寶

（廣西貴港市中心血站，廣西 貴港 537100）

艾滋病（AIDS）是一種全球性疾病，傳染性強，病死率高。HIV的檢測方法有很多，其中，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是我國衛生計生委推薦的首選檢測HIV抗體方法。筆者從HIV感染標志物的血清學變化、檢測方法的優缺點、檢測結果的準確率、檢測方法的普及難易程度的進展進行綜述，以供參考。

HIV感染標志物；檢測方法；研究進展

1 ELISA法檢測

1.1 ELISA法基本原理

ELISA法檢測結果由酶標儀判讀，客觀準確，避免了人為操作誤差，且數據由計算機存儲式處理，更科學，自動化程度高，故適合血站和醫療機構等需要檢測大量標本的HIV實驗室使用[1]。ELISA法主要采取雙抗原夾心法。該方法主要是在固相檢測板上放置特異性抗原，將被檢血清（血漿）加入，使之形成抗原抗體結合物，隨后將梅標記抗原加入，使之形成抗原-抗體-酶標記抗原復合物，并將顯色劑、酶作用底物加入，其判斷主要是經由酶標儀上的OD值與CUTOFF值比較進行的。該方法陽性判斷標準為≥CUTOFF值[2-3]。

1.2 ELISA法假陽性原因

ELISA法操作復雜，干擾因素多，且耗時較長，對操作人員的要求較高，易出現假陽性。一般來說，一胎多產的婦女、含自身免疫疾病患者、含多次輸血史患者均為ELISA法檢測HIV抗體常見假陽性人群，此類人群還包括最近接種過流感或乙肝疫苗者等[4-5]。另外，血清中含內源性物質的大約有40%的人，均能對ELISA測定結果產生影響[6]。

1.3 ELISA法試劑發展與應用

當前，ELISA試劑已經發展到了第4代。而第3代HIVl/2試劑盒主要是指雙抗原夾心法，HIV-2gp36及HIV-1gp4l特異性抗原是常用基因工程，且以酶標特異HIV抗原代替酶標二抗，能減少假陽性的發生，且能對lgM、IgG進行檢測。而相較于第3代，第4代ELISA法試劑能提前1-2周進行診斷，在篩查早期感染中有著較好的應用效果。但是，考慮到包被的抗體占據一定抗原位點，特別是當出現大量抗體，且抗原消失的時候，相較于第3代，第4代試劑的敏感度明顯降低[7-8]。

1.4 進口與國產ELISA試劑檢測對比

對于ELISA法檢測試劑盒有兩種來源，一是國內，二為進口。在起步階段，國產免疫診斷試劑取得國家批批檢的試劑種類較多、質量差異較大[9]。國內許多實驗室比較了不同公司、同種或不同種、同批次或不同批次的試劑進行過比較，現分述如下。

劉亞非等[10]對20438份血樣進行檢測，采用的試劑盒有國產與美國的試劑盒。結果發現在實施國產試劑盒進行檢測時，能達到良好的應用效果，敏感性、特異性等均較高。秦艷蘭等[11]對比了兩種10個批次的國內試劑與10個批次的進口試劑，兩者在假陽性、特異性上并未出現統計學差異。錢榕等[12]比較了兩種國內與兩種進口的第四代ELISA試劑的特異性、靈敏度與假陽性率。結果顯示不能看出國產試劑與進口試劑存在統計學上的質量差異。朱厚宏等[13]用一種國產ELSA試劑盒對33份孕婦血液樣本進行篩查，其檢測結果顯示陽性標本數量為33，WB確證試驗顯示陽性標本只有20例，兩者陽性符合率只有60.61%。提示只用單一的國產試劑盒檢測，其誤差率高，篩查假陽性現象較為嚴重。張月娟等[14]單用荷蘭梅里埃公司的ELISA試劑盒對1019份血清標本進行檢測，陽性標本數量為34份，發現假陽性率為43.8%，明顯偏高。張洪花等[15]采用國外公司ELISA試劑盒對224份血樣標本進行檢測，在通過WB進行確證試驗。結果發現檢測結果假陽性偏高，提示進口試劑盒并非完全準確，試驗及結果的準確性很大程度上取決于試劑的內在質量標準。

2 核酸檢測方法

現階段，隨著醫學技術和分子生物技術的快速發展，人們開始越來越多地重視核酸檢測，能對HIV RNA進行直接檢查，且能獲得較病毒蛋白P24抗原檢測更高的靈敏性。早在20世紀90年代初，在對血液中病毒核酸含量進行檢測中，分子生物學技術便得到廣泛應用。迄今為止，應用于檢測HIV感染的分子生物學方法較多，包括轉錄介導的擴增（TMA）、逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、支鏈DNA（b DNA）、實時熒光定量PCR技術（FQ-PCR）和免疫PCR技術（Immuno-PCR）等。

目前在獻血者HIV篩查中使用的核酸檢測技術主要為實時熒光定量PCR（FQ-PCR），該方法可以進行實時（realtime）監測，有別于傳統的PCR擴增以后，最后進行終點（end point）監測[16]。這一現象形成原因主要是：使用熒光基團標記探針，5，端標記熒光基團，3，端標記淬滅基團，在未進行PCR擴增時，由于熒光基團和淬滅基團空間距離很近，全熒光集團被淬滅，不發熒光；而當實時PCR擴增時，利用Taq酶的5，—3，外切酶活性，將熒光探針水解，熒光基團被釋放出來，由于在空間上與淬滅基團的分開，則發出熒光[17]。

HIV感染后可在外周血中首先檢測到HIV核酸（RNA），應用FQ-PCR檢測血液中的HIV RNA已成為判斷感染窗口期的重要策略之一。然而，若對每個樣本進行單獨的FQ-PCR檢測不僅耗時耗力，而且費用昂貴，在作為常規篩查方法加以應用時缺乏實用性[18]。該法基本原理是根據人群中HIV感染率的高低將一定數量的HIV抗體陰性的樣本進行多級混合，即將多個樣本集合成樣本小池，隨后將其凝集成樣本大池，實施FQ-PCR檢測。

集合樣本的FQ-PCR檢測仍有其不足之處[19]。首先，雖然該法相對于單樣本FQ-PCR檢測具有減少工作量和節省成本等優點，但費用仍然顯昂貴，這使得其在發展中國家中的推廣應用有一定的難度；其次該法高特異性和高陽性預測值的實現是基于必要的檢測能力和檢測條件，但這在一些資源匱乏的地區可能難以達到[20]。

3 結 論

綜上所述，HIV感染標志物檢測方法從免疫學到分子生物學的發展，提高了檢測結果的準確率，也大大縮短了HIV檢測的“窗口期”，從第四代ELISA試劑的22天左右到核酸檢測的11天左右，但核酸檢測需要特定的環境且費用極高，目前還不能廣泛普及。

[1] 符麗芝,許 彬,張萬明,酶免法檢測抗-HIV假陽性結果的消除[J].臨床輸血與檢驗,2004,6(2):122-123.

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[3] 孫麗萍,實驗室HIV檢測技術概述及進展[J].海南醫學院學報,2008,14(004):466-470.

[4] Warner,N.A.,Clinical Detection and Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus Infection.CLINICAL LABORATORY SCIENCE,1996,276-281.

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[7] 楊秀令,梁 琳,四種方法進行 HIV 抗體篩查的結果分析.實用醫技雜志,2008.13:p.032.

[8] 黃新寶,楊 坤,李聚林,貴港市2005～2010年無償獻血者抗-HIV檢測結果分析.中國輸血雜志,2012.25(1):p.53-55.

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[11] 秦艷蘭,等.國產和進口HIV酶聯免疫試劑盒精確性檢測比較.中國熱帶醫學,2009.9(3):p.546-547.

[12] 錢 榕,樊 璐,進口試劑與國產試劑檢測人類免疫缺陷病毒結果比較.江西醫藥,2010.45(006):p.591-593.

[13] 朱厚宏,等.孕產婦HIV抗體篩查陽性與免疫印跡試驗對比.預防醫學情報雜志,2011.27(2):154-156.

[14] 張月娟,褚國方,ELISA法和膠體硒法在高危人群抗-HIV檢測中的應用.職業與健康,2008.24(009):846-847.

[15] 張洪花,等.ELISA,膠體硒和免疫印跡試驗檢測HIV抗體結果分析.中國病原生物學雜志,2007.1(5):338-340.

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[18] 張帥清,影響雙抗原夾心 ELISA 法檢測HIV抗體因素研究.中國衛生檢驗雜志,2008.18(2):343-346.

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[20] 陳龍菊,等.3種檢測模式篩查血液抗-HIV的探討.中國衛生檢驗雜志,2008.18(9):1836-1837.

本文編輯：吳 衛

R446.6

A

ISSN.2095-8242.2017.017.3362.02