江西地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌NDM-1及其他碳青霉烯酶基因檢測(cè)研究

陳 嬌，吳秀珍，劉 康，胡雪飛，陳開(kāi)森，張黎明，陳 賀

(1江西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西 南昌 330052； 2 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006； 3 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006)

·論著·

江西地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌NDM-1及其他碳青霉烯酶基因檢測(cè)研究

陳 嬌1，吳秀珍1，劉 康1，胡雪飛2，陳開(kāi)森2，張黎明3，陳 賀3

(1江西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西 南昌 330052； 2 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006； 3 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006)

目的 了解江西地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌(CRAB)NDM-1及其他碳青霉烯酶基因攜帶情況，為預(yù)防和控制醫(yī)院感染提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法 收集2015年1月—2016年6月江西地區(qū)3所三級(jí)甲等醫(yī)院臨床標(biāo)本分離的CRAB共64株，采用K-B法測(cè)定其對(duì)常用抗菌藥物的敏感性，采用改良Hodge試驗(yàn)和EDTA協(xié)同試驗(yàn)篩查CRAB產(chǎn)碳青霉烯酶和金屬酶的情況，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)碳青霉烯酶基因，對(duì)產(chǎn)NDM-1的鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行接合試驗(yàn)。結(jié)果 CRAB 對(duì)氨芐西林/舒巴坦、環(huán)丙沙星、慶大霉素、左氧氟沙星耐藥率高達(dá)95.31%、98.44%、90.63%、54.69%。CRAB菌株改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性率為76.56%，EDTA協(xié)同試驗(yàn)陽(yáng)性率為96.88%。PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示， 87.50%(56株)的CRAB攜帶OXA-23、VIM-1基因，18.75%(12株)攜帶SIM基因，3.13%(2株)攜帶OXA-24基因，26.56%(17株)攜帶NDM-1基因。攜帶NDM-1基因的CRAB均來(lái)自于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，其中64.70%(11/17)表現(xiàn)為泛耐藥。接合試驗(yàn)結(jié)果顯示，攜帶NDM-1基因的菌株可將NDM-1基因傳遞給受體菌大腸埃希菌J53，使其獲得對(duì)亞胺培南的耐藥性。結(jié)論 該地區(qū)臨床分離的CRAB耐藥率高，碳青霉烯酶基因以O(shè)XA-23、VIM-1基因型為主，檢出NDM-1基因陽(yáng)性CRAB，NDM-1基因可能存在醫(yī)院內(nèi)的克隆傳播，應(yīng)盡快采取有效措施預(yù)防和控制NDM-1基因陽(yáng)性CRAB的傳播。

鮑曼不動(dòng)桿菌；多重耐藥菌；碳青霉烯酶基因；醫(yī)院感染

[Chin J Infect Control，2017，16(2)：109-114]

鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacterbaumannii)是臨床上常見(jiàn)的條件致病菌，廣泛存在于自然界、醫(yī)院環(huán)境及人體皮膚，可引起許多常見(jiàn)的醫(yī)院感染，如血流感染、肺部感染、傷口感染、導(dǎo)管相關(guān)感染、尿路感染和菌血癥等[1]。二十世紀(jì)七十年代鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)大多數(shù)抗菌藥物仍較敏感，由于菌株本身具有快速獲得對(duì)多種抗菌藥物耐藥的能力，現(xiàn)已成為全球醫(yī)院感染的主要病原菌[2]。 耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌(carbapenem-resistantAcinetobacterbaumannii，CRAB)是指對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌。在我國(guó)，CRAB的廣泛流行給臨床醫(yī)生抗感染治療帶來(lái)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[3]。本研究收集了江西地區(qū)3所三級(jí)甲等醫(yī)院的CRAB并對(duì)其耐藥性、產(chǎn)金屬酶的表型及產(chǎn)Ⅰ型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶 (New Delhi metallo-β lactamase 1，NDM-1)等碳青霉烯酶基因表型進(jìn)行分析，從而為臨床抗感染治療，預(yù)防和控制醫(yī)院感染提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 菌株來(lái)源 收集2015年1月—2016年6月江西地區(qū)3所三級(jí)甲等醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床標(biāo)本中分離的CRAB共64株，其中南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院55株，南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院5株和江西省人民醫(yī)院4株，排除同一患者不同部位分離的同種菌株，留取初次分離菌株。改良Hodge試驗(yàn)的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照菌株由溫州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科張鐵麗教授贈(zèng)予，ATCC 25922菌株和ATCC 27853菌株由江西省臨床檢驗(yàn)中心吳茂紅主任技師贈(zèng)予，J53菌株由鄭州大學(xué)肖偉強(qiáng)贈(zèng)予。

1.2 細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn) 采用K-B法檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)常見(jiàn)抗菌藥物的敏感性，同時(shí)采用瓊脂稀釋法檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)美羅培南的最低抑菌濃度(MIC),并利用VITEK 2全自動(dòng)分析儀對(duì)細(xì)菌鑒定與藥敏結(jié)果進(jìn)行分析，藥敏結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)2014年版標(biāo)準(zhǔn)。 質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922和銅綠假單胞菌ATCC 27853。由于鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合物包括鮑曼不動(dòng)桿菌、不動(dòng)桿菌基因種群3、醋酸鈣不動(dòng)桿菌及13TU，此四類菌種生化特點(diǎn)相似，VITEK 2分析儀不能將其區(qū)分，而blaOXA-51基因?yàn)轷U曼不動(dòng)桿菌天然攜帶的基因，因此我們利用PCR方法擴(kuò)增菌株OXA-51基因，從而確定為鮑曼不動(dòng)桿菌。

1.3 改良Hodge試驗(yàn) 根據(jù)CLSI推薦的方法進(jìn)行操作，將0.5麥?zhǔn)蠁挝淮竽c埃希菌ATCC 25922均勻涂布于M-H平板，亞胺培南紙片貼于平板中央，待測(cè)菌株自藥敏紙片邊緣向平板外沿劃線培養(yǎng)，37℃過(guò)夜培養(yǎng)后觀察結(jié)果，亞胺培南抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)大腸埃希菌矢狀生長(zhǎng)者表明待測(cè)菌產(chǎn)碳青霉烯酶，分別設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 EDTA協(xié)同試驗(yàn) 0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇龣z菌株涂布于M-H平板，貼兩張亞胺培南紙片(10 μg)，向其中一張亞胺培南紙片上滴加0.5 mol/L EDTA 10 μL，37℃過(guò)夜培養(yǎng)，若滴加EDTA的亞胺培南紙片與未滴加亞胺培南的紙片所產(chǎn)生的抑菌圈之差≥5 mm，則可判斷該待測(cè)菌為金屬酶陽(yáng)性。

1.5 耐藥基因檢測(cè) 按照Omega公司細(xì)菌DNA提取試劑盒的操作步驟提取菌株DNA。運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測(cè)NDM-1等碳青霉烯酶基因，PCR引物和方法參考以下標(biāo)注文獻(xiàn)進(jìn)行，具體引物序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度見(jiàn)表1。PCR引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，PCR擴(kuò)增所獲基因DNA送南京金斯瑞生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序后經(jīng)NCBI GenBank Blast比對(duì)驗(yàn)證。

表1 鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥基因引物序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度

Table 1 Primer sequence and product length of drug-resistant genes ofA.baumannii

基因引物序列(5'-3')產(chǎn)物長(zhǎng)度(bp)AmblerA組碳青霉烯酶基因 KPC-F[4]ATGTCACTGTATCGCCGTCT785 KPC-RTAGACGGCCAACACAATAGG SME-F[5]AACGGCTTCATTTTTGTTTAG1138 SME-RGCTTCCGCAATAGTTTTATCA GES-F[5]GTTTTGCAATGTGCTCAACG371 GES-RTGCCATAGCAATAGGCGTAGAmblerB組碳青霉烯酶基因 NDM-F[6]CGCAACACAGCCTGACTTTC287 NDM-RTCGTGATGAGCCATTCCGCC NDM-up168[6]GAATGTCTGGCAGCACACTT480 NDM-dw647TTGGCCTTGCTGTCCTTGAT SPM1-F[5]CCTACAATCTAACGGCGACC650 SPM1-RTCGCCGTGTCCAGGTATAAC GIM1-F[5]AGAACCTTGACCGAACGCAG748 GIM1-RACTCATGACTCCTCACGAGG SIM1-F[5]TACAAGGGATTCGGCATCG571 SIM1-RTAATGGCCTGTTCCCATGTG IMP1-F[7]CATGGTTTGGTGGTTCTTGT448 IMP1-RATAATTTGGCGGACTTTGGC VIM1-F[7]GATGGTGTTTGGTCGCATA390 VIM1-RCGAATGCGCAGCACCAG VIM2-F[7]ATGTTCAAACTTTTGAGTAAG801 VIM2-RCTACTCAACGACTGAGCGAmblerD組碳青霉烯酶基因 OXA-23-F[7]GATGTGTCATAGTATTCGTCG1048 OXA-23-RTCACAACAACTAAAAGCACTG OXA-24-F[7]GGTTAGTTGGCCCCCTTAAA249 OXA-24-RAGTTGAGCGAAAAGGGGATT OXA-51-F[6]TAATGCTTTGATCGGCCTTG351 OXA-51-RTGGATTGCACTTCATCTTGG OXA-58-F[7]AAGTATTGGGGCTTGTGCTG599 OXA-58-RCCCCTCTGCGCTCTACATAC

1.6 接合試驗(yàn) 供體菌(攜帶NDM-1基因的鮑曼不動(dòng)桿菌)和受體菌(疊氮鈉耐藥的大腸埃希菌J53)分別接種于2 mL LB肉湯中37℃振蕩培養(yǎng)(220 r/min)6 h，分別將供體菌和受體菌濁度調(diào)整至2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝唬凑?∶1比例混勻兩種細(xì)菌，將混合菌接種至1 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。取20 μL混合菌液接種至M-H瓊脂平板(含亞胺培南2 μg/mL+疊氮鈉100 μg/mL)，同時(shí)取原始供體菌及受體菌各20 μL接種于同一雙抗平板上作對(duì)照，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。只有當(dāng)對(duì)照菌在雙抗平板上不生長(zhǎng)而接合菌生長(zhǎng)時(shí),方能判斷生長(zhǎng)出來(lái)的接合子有意義，此時(shí)進(jìn)一步對(duì)接合子進(jìn)行生化鑒定，確定接合子為大腸埃希菌，再運(yùn)用PCR方法確定接合子NDM-1基因陽(yáng)性，即可判定接合成功，最后對(duì)接合成功的NDM-1質(zhì)粒接合子使用K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 菌株臨床分布及耐藥性 64株CRAB主要來(lái)自神經(jīng)內(nèi)科重癥監(jiān)護(hù)病房(NICU，15株，23.44 %)，重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU，12株，18.75%)，神經(jīng)外科(9株， 14.06%)和其他科室(28株，43.75%)。64株CRAB中有46株(71.88%)來(lái)自于痰，5株來(lái)自于血(7.81%)和4株來(lái)自于尿(6.25%)等。所有菌株均表現(xiàn)為多重耐藥，耐藥情況見(jiàn)表2。

表2 耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率(%)

Table 2 Resistance rates of CRAB to commonly used antimicrobial agents (%)

抗菌藥物南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院(n=55)南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院(n=5)江西省人民醫(yī)院(n=4)合計(jì)氨芐西林/舒巴坦96.36100.0075.0095.31哌拉西林/他唑巴坦94.55100.00100.0095.31頭孢他啶98.18100.00100.0098.44亞胺培南100.00100.00100.00100.00慶大霉素89.09100.00100.0090.63妥布霉素76.36100.0075.0078.13環(huán)丙沙星98.18100.00100.0098.44左氧氟沙星50.9180.0075.0054.69

2.2 碳青霉烯酶和金屬酶表型檢測(cè)結(jié)果 64株CRAB菌株改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性49株，陽(yáng)性率為76.56%；亞胺培南EDTA協(xié)同試驗(yàn)陽(yáng)性62株，陽(yáng)性率為96.88%。見(jiàn)圖1。

A為改良Hodge試驗(yàn)，其中標(biāo)注1為陽(yáng)性對(duì)照，2為陰性對(duì)照，3為陽(yáng)性結(jié)果；B為EDTA協(xié)同試驗(yàn)，其中標(biāo)注1為亞胺培南紙片，2為亞胺培南+EDTA

圖1 改良Hodge試驗(yàn)與EDTA協(xié)同試驗(yàn)結(jié)果

Figure 1 Results of modified Hodge test and EDTA-disk synergy test

2.3 耐藥基因檢測(cè)結(jié)果 64株臨床分離的CRAB，87.50%(56株)攜帶OXA-23、VIM-1基因，3.13%(2株)攜帶OXA-24基因，18.75%(12株)攜帶SIM基因，26.56%(17株)攜帶NDM-1基因，所有菌株檢出OXA-51基因，所有菌株均未檢出KPC、SME、GES、SPM、GIM、IMP1、VIM-2、OXA-58基因。部分電泳和測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖2～4。

1泳道: Marker;2—7泳道分別為NDM-1、NDM-up-dw、OXA-23、VIM-1、SIM、OXA-24基因陽(yáng)性

圖2 鮑曼不動(dòng)桿菌碳青霉烯酶基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂凝膠電泳圖

Figure 2 Agarose gel electrophoresis map of PCR amplification products ofA.baumanniicarbapenemase genes

1泳道為Marker;2泳道為OXA-51基因陽(yáng)性

圖3 鮑曼不動(dòng)桿菌OXA-51基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂凝膠電泳圖

Figure 3 Agarose gel electrophoresis map of PCR amplification product ofA.baumanniiOXA-51 gene

圖4 鮑曼不動(dòng)桿菌NDM-1金屬酶基因的部分測(cè)序圖

2.4NDM-1基因的檢測(cè)、測(cè)序及接合試驗(yàn)NDM-1陽(yáng)性CRAB中64.71%(11/17)表現(xiàn)為泛耐藥，同時(shí)多攜帶其他碳青霉烯酶基因。接合試驗(yàn)結(jié)果表明，接合子帶有與供體菌相同的NDM-1基因，且同時(shí)獲得對(duì)亞胺培南、頭孢他啶、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、慶大霉素的耐藥性并穩(wěn)定傳遞，接合子對(duì)環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素敏感，接合傳遞實(shí)驗(yàn)使得接合子的耐藥性增加。攜帶NDM-1基因的CRAB均來(lái)自于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院。見(jiàn)表3。

表3 17株產(chǎn)NDM-1菌株的耐藥譜及耐藥基因攜帶情況

ABPC/SB：氨芐西林/舒巴坦；CIP：環(huán)丙沙星；LVX：左氧氟沙星；GM：慶大霉素；TOB：妥布霉素；IMP：亞胺培南；MER：美羅培南

3 討論

碳青霉烯類抗生素由于對(duì)β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定，與青霉素結(jié)合蛋白親和力強(qiáng)，并能夠有效滲透細(xì)菌外膜進(jìn)入周質(zhì)間隙，從而具備抗菌譜廣，殺菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，是目前抗菌活性最強(qiáng)，殺菌速度最快的一類抗生素。碳青霉烯類抗生素對(duì)不動(dòng)桿菌有較好的抗菌活性，是治療不動(dòng)桿菌重癥感染的首選藥物。鮑曼不動(dòng)桿菌一旦對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥，將給臨床抗感染治療帶來(lái)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[8]。本研究中收集的CRAB主要來(lái)源于重癥患者，所有菌株均表現(xiàn)為多重耐藥，部分甚至出現(xiàn)泛耐藥，與全球報(bào)道的情況基本一致[9]，可能與CRAB對(duì)碳青霉烯類抗生素的多種耐藥機(jī)制可同時(shí)導(dǎo)致其對(duì)其他抗菌藥物耐藥有關(guān)[7]。

鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥主要是由于產(chǎn)碳青霉烯酶、主動(dòng)外排系統(tǒng)、膜孔蛋白的缺失和青霉素結(jié)合蛋白的改變等，其中最主要的原因?yàn)楫a(chǎn)碳青霉烯酶。碳青霉烯酶包括Ambler分類的A、B和D類，國(guó)內(nèi)報(bào)道較多的為D類的OXA-23和B類的IMP等。OXA-23是全球流行最廣泛的碳青霉烯酶，且產(chǎn)OXA-23的鮑曼不動(dòng)桿菌是引起醫(yī)院感染暴發(fā)的主要病原菌[10]。

本組64株CRAB， 87.50%攜帶OXA-23、VIM-1基因，3.13%攜帶OXA-24基因，18.75%攜帶SIM基因，所有菌株均未檢出KPC、SME、GES、SPM、GIM、IMP1、VIM-2、OXA-58基因。國(guó)內(nèi)淮河以北地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌檢出IMP和VIM基因[11]；國(guó)外報(bào)道，多個(gè)地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌檢出IMP、VIM及SIM基因[12-14];之前研究顯示，本地區(qū)主要是攜帶OXA-23基因的鮑曼不動(dòng)桿菌，未發(fā)現(xiàn)金屬酶基因，與此次研究結(jié)果差異較大。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)OXA-23和VIM-1為江西地區(qū)CRAB的主要碳青霉烯酶基因。

NDM-1基因在國(guó)內(nèi)偶見(jiàn)報(bào)道，NDM-1是科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的一種新的超級(jí)耐藥基因，編碼一種新的耐藥酶，NDM-1全稱為“新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶1”，是一種高效酶，能水解除氨曲南以外的所有β-內(nèi)酰胺類藥物[15]，因此，攜帶NDM-1基因的細(xì)菌表現(xiàn)為廣泛耐藥，攜帶NDM-1基因的主要菌種有大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌及銅綠假單胞等[16-19]。本研究64株CRAB中，有26.56% (17株) 攜帶NDM-1基因，國(guó)內(nèi)浙江和廣東等地也在CRAB中檢出NDM-1基因[6,20]，但在此之前，本地區(qū)尚未有CRAB菌株中檢出NDM-1基因的報(bào)道。攜帶NDM-1基因的CRAB均來(lái)自于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，其中64.71%(11/17)的菌株表現(xiàn)為泛耐藥，其他菌株也為多重耐藥菌，可能與NDM-1基因的表達(dá)低有關(guān)。攜帶NDM-1基因的菌株多同時(shí)攜帶其他碳青霉烯酶基因，與Chatterjee等[21]的研究一致。根據(jù)耐藥表型及攜帶耐藥基因的情況，將本組NDM-1基因陽(yáng)性菌株分為9種類型，其中菌株4、8、23、25、28、36號(hào)及菌株14、19、20號(hào)表型基本一致，推測(cè)可能存在NDM-1基因醫(yī)院內(nèi)的克隆傳播。

為探討NDM-1基因的傳播途徑，將攜帶NDM-1基因的CRAB作為供體菌，疊氮鈉耐藥的大腸埃希菌J53作為受體菌進(jìn)行接合試驗(yàn)，在篩選平板上獲得了攜帶NDM-1基因并對(duì)亞胺培南耐藥的接合子。由此證實(shí)，NDM-1基因可通過(guò)質(zhì)粒在不同菌株間進(jìn)行傳遞。以往研究中，我們證實(shí)了質(zhì)粒在多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌醫(yī)院感染的暴發(fā)中起著非常關(guān)鍵的作用[22]。

本研究中，改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性菌株49株，陽(yáng)性率為76.56%，與PCR擴(kuò)增結(jié)果存在一定的出入，可能與CRAB碳青霉烯酶表達(dá)量低有關(guān)；EDTA協(xié)同試驗(yàn)陽(yáng)性率為96.88%，與PCR擴(kuò)增結(jié)果基本一致，可見(jiàn)EDTA協(xié)同試驗(yàn)是較好的判斷碳青霉烯酶基因攜帶的方法。

總之，本地區(qū)CRAB對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥的主要碳青霉烯酶基因型為OXA-23和VIM-1，部分菌株中檢出NDM-1基因。臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)CRAB的監(jiān)測(cè)，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)抗菌藥物使用的管理，積極預(yù)防和控制醫(yī)院內(nèi)CRAB的播散。

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(本文編輯：孟秀娟)

NDM-1 gene and other carbapenemase genes inAcinetobacterbaumanniiin Jiangxi area

CHENJiao1,WUXiu-zhen1,LIUKang1,HUXue-fei2,CHENKai-sen2,ZHANGLi-ming3,CHENHe3

(1JiangxiHealthVocationalCollege,Nanchang330052,China；2TheFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China; 3TheSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China)

Objective To understand the carriage ofNDM-1 and other carbapenemases in carbapenem-resistantAcinetobacterbaumannii(CRAB) in Jiangxi area, and provide laboratory basis for the prevention and control of healthcare-associated infection (HAI). Methods Sixty-four strains of CRAB isolated from clinical specimens from 3 tertiary first-class hospitals in Jiangxi area from January 2015 to June 2016 were collected, susceptibility to commonly used antimicrobial agents were detected with Kirby-Bauer method. Carbapenemases and metalloenzyme in CRAB were screened with modified Hodge test and EDTA-disk synergy test respectively, carbapenems gene was detected by polymerase chain reaction (PCR)，NDM-1-producingAcinetobacterbaumannii(A.baumannii) were performed conjugation test.Results The resistance rates of CRAB to ampicillin/sulbactam, ciprofloxacin, gentamicin, and levofloxacin were up to 95.31%, 98.44%, 90.63%, and 54.69% respectively. The positive rates of modified Hodge test and EDTA-disk synergy test were 76.56% and 96.88% respectively. PCR amplification result showed that 87.50%(n=56) of CRAB carriedOXA-23 andVIM-1 genes，18.75%(n=12)carriedSIM， 3.13%(n=2)carriedOXA-24，and 26.56%(n=17) carriedNDM-1. CRAB carryingNDM-1 gene were all from The First Affiliated Hospital of Nanchang University, 64.70%(11/17)of which were pandrug-resistant strains. Conjugation test result showed thatNDM-1-producing strains could transferNDM-1 gene to recipient strainEscherichiacoliJ53, then acquired resistance to imipenem. Conclusion Antimicrobial resistance rates of clinically isolated CRAB in this area are high,OXA-23 andVIM-1 genes are the main carbapenemase genes,NDM-1 gene positive CRAB is detected, and there may be a clonal spread ofNDM-1 gene in hospital, effective measures should be taken as soon as possible to prevent and control the spread ofNDM-1 positive CRAB.

Acinetobacterbaumannii； multidrug resistance； carbapenemase gene; healthcare-associated infection

2016-09-06

江西省科技廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(20142BBG70021)

陳嬌(1987-)，女(漢族)，江西省南昌市人，主管技師，主要從事微生物耐藥機(jī)制的研究。

陳嬌 E-mail：jochenjin@163.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.02.003

R378.99 R446.5

A

1671-9638(2017)02-0109-06