RP-HPLC測兒童回春顆粒的有效成分

龍城宇(西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅 蘭州 730124)

RP-HPLC測兒童回春顆粒的有效成分

龍城宇(西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅 蘭州 730124)

目的建立在多個(gè)檢測波長條件下用反相高效液相色譜（RP-HPLC）測定兒童回春顆粒中葛根素、芍藥苷及鹽酸小檗堿的含量的色譜分析方法。方法使用Aglient1200高效液相色譜儀，柱溫設(shè)置為25℃、流速設(shè)定0.8mL/min、檢測波長葛根素（205nm），芍藥苷（230nm），小檗堿（350nm）條件下，流動(dòng)相使用乙腈-0.05%的磷酸水溶液，以梯度洗脫為理論，測定有效成分的含量。結(jié)果葛根素、芍藥苷，小檗堿進(jìn)樣量分別在0.021～0.210μg，r=0.9999；0.036～0.540μg，r=0.9999;0.034～0.408,r= 0.9999范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。RSD值分別2.28%,0.75%,0.93%.結(jié)論該方法操作簡單，分析速度快且有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。因此使用此法可以對兒童回春顆粒中的葛根素，芍藥苷、小檗堿苷、進(jìn)行含量測定。

兒童回春顆粒;高效液相;葛根;芍藥苷;小檗堿;含量測定

1 試劑與儀器

儀器：高效液相色譜(批號：Aglient美國安捷倫公司)，超聲波清洗器((批號：AS3120奧特恩斯儀器有限公司)，高速中藥粉碎機(jī)，（DFT-200溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。試劑：葛根素（中國藥品生物制品檢定所，批號：0752-9806），芍藥苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200933），鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品檢定所，批號110713-200609），三種預(yù)測成分對照品；兒童回春顆粒（德昌祥），來源：貴州漢方藥業(yè)有限公司（批號：141101，1503108,131015）。

2 方法與結(jié)果

流動(dòng)相溶液配制：配置0.05%的磷酸水溶液：取超純水于1000ml的量筒中，精密量取磷酸（85%）水溶液0.56 ml至1000ml量筒中，定容，震蕩均勻，在抽濾瓶口覆蓋0.45 μm的水相微孔濾膜，抽濾，加少量磷酸水溶液抽濾，潤洗，再抽濾剩下的磷酸水溶液。

對照品溶液的配制：精密稱取葛根素、芍藥苷，小檗堿對照品2.1 mg、1.8mg、3.4mg依次加入至5 mL、5 mL、5mL的容量瓶中。加入一定量的甲醇，并使用超聲儀對其超聲溶解30 min，冷卻到室溫。用移液管量取各對照品溶液0.5mL，1ml，0.5ml集中加入到10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得對照品溶液，冷藏。對照品的濃度分別為：葛根素：0.021 mg/mL，芍藥苷；0.036 mg/mL小檗堿：0.034mg/mL。

供試品溶液的配制：取兒童回春顆粒一袋，研磨，粉末備用。稱取粉末適量，用含60%甲醇（分析純）和0.6%鹽酸溶解，轉(zhuǎn)移到25ml的容量瓶中，加提取溶劑，在超聲儀中超聲提取60min；提取上層清液，過濾，濾渣繼續(xù)溶解，繼續(xù)在超聲儀中超聲30min，抽濾，提純，將所得過濾液冷卻至室溫用提取溶劑定容置刻度線處，震蕩，搖勻，靜置，得供試品溶液，留取備用。

色譜條件設(shè)定：色譜柱：LNAAP 1057001 TC-C18(2)鍵和硅膠柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）；柱溫為25℃；初始進(jìn)樣條件設(shè)定為：乙腈5%、0.05%磷酸水溶液95%；流速0.8 mL·min-1；葛根素、芍藥苷，小檗堿檢測波長分別為：205 nm、230nm、350nm；流動(dòng)相：同時(shí)采用（B）乙腈及（C）0.05%磷酸水溶液的混合溶液

含量測定試驗(yàn)：取兒童回春顆粒三個(gè)批號的樣品各三份，按相同的制備方法制備供試品溶液。在設(shè)定好的色譜條件下分別進(jìn)樣（進(jìn)樣量為10μL），測定葛根素，芍藥苷，鹽酸小檗堿的含量。可以計(jì)算出葛根素，芍藥苷，小檗堿的含量分別1.22mg/ g，0.78mg/g，1.04mg/g。由結(jié)果可知，葛根素分別為485.4，477.0，477.4下的含量（mg/g）分別為1.007，0.983，0.984對應(yīng)的RSD值為（%）1.783、1.269、0.947，芍藥苷在峰面積64.8、49.8、58.8下的含量分別為0.597、0.467、0.544，對應(yīng)的RSD值為（%）4.798、0.853、2.493，小檗堿在峰面積159.6、178.9、176.4下的含量分別為0.811、0.901、0.890，對應(yīng)的RSD值為（%）1.623、0.626、1.771。

3 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)采取了不同流動(dòng)相乙腈-甲醇-水，乙腈-0.05%的磷酸水溶液-甲醇進(jìn)行試驗(yàn)，在用乙腈-甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行試樣時(shí)，發(fā)現(xiàn)所得譜圖峰形較好，但三種成分沒有分開，分離效果不好。通過查找文獻(xiàn)，最終確定加入少量磷酸溶液，通過在實(shí)驗(yàn)條件下不同比例的試樣，最終確定乙腈-甲醇-0.05%的磷酸水溶液作為流動(dòng)相，通過梯度洗脫的方法，使三種成分得以分離。

考慮到小檗堿是季胺堿，在水中的溶解度不大，向其中加入6%鹽酸，使鹽酸和小檗堿成鹽，增加小檗堿的溶解度，以70%的甲醇和6%的鹽酸溶液為溶劑,小檗堿的峰形較好,但是基線漂移的很嚴(yán)重,可能是因?yàn)榧状紳舛裙咭鸬摹?/p>

[1]黃芳蘭.兒童回春顆粒臨床療效研究[J].廣西柳州鋼鐵公司醫(yī)院,2011,10(4),1～2.

[2]朱明華,胡平.儀器分析.第四版.北京高等教育出版社[M].2008,第66～67.

[3]朱明華,胡平.儀器分析.第四版.北京高教育出版社[M].2008,,第84～85.