藍(lán)莓花、莖、葉酚類物質(zhì)含量及抗氧化活性比較

李曉英，薛 梅，樊汶樵*

（重慶文理學(xué)院林學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，重慶 402160）

藍(lán)莓花、莖、葉酚類物質(zhì)含量及抗氧化活性比較

李曉英，薛 梅，樊汶樵*

（重慶文理學(xué)院林學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，重慶 402160）

比較藍(lán)莓花、嫩莖、嫩葉及老葉總多酚、總黃酮、原花青素的含量，并研究其抗氧化性能差異。結(jié)果表明：嫩葉中總多酚含量最高，為43.77 mg GAE/g（以干質(zhì)量計，下同），分別是花、嫩莖和老葉的3.45、1.42、1.12 倍；老葉中總黃酮、原花青素含量最高，為68.01 mg RE/g、23.29 mg CAE/g，分別是花的2.57 倍和4.61 倍、嫩莖的1.79 倍和1.23 倍、嫩葉的1.03 倍和1.98 倍。抗氧化性能中，老葉的鐵還原能力最大，其次是嫩莖和花，嫩葉較差；清除?OH的能力為嫩莖＞嫩葉＞花＞老葉；清除DPPH自由基能力和總抗氧化能力均為嫩莖＞嫩葉＞老葉＞花甲醇提取物，均高于對照品；藍(lán)莓各部分提取物對DPPH自由基的清除能力最強(qiáng)，總抗氧化能力次之，清除?OH能力和鐵還原能力較差。

藍(lán)莓；多酚；黃酮；抗氧化活性

藍(lán)莓原產(chǎn)和主產(chǎn)于美國，我國自1983年引種藍(lán)莓以來，在遼寧、山東、黑龍江、北京、江蘇、浙江、四川、重慶等地已大面積種植，資源十分豐富。藍(lán)莓種植都是以采摘藍(lán)莓果為目的，對藍(lán)莓花、莖、葉的加工利用極少，對其資源是一種浪費。藍(lán)莓葉含有粗蛋白、脂肪酸、氨基酸、有機(jī)酸和大量多酚類化合物，可做茶飲亦可入藥[1-2]。目前，藍(lán)莓酚類物質(zhì)含量及功能性研究很多[3-6]，有研究表明，藍(lán)莓葉多酚含量及部分抗氧化性能均高于其果實[7-8]。Ehlenfeldt等[9]對81 種藍(lán)莓的研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓葉中多酚平均含量為44.80 mg/g、平均超氧自由基清除能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）值為490 mmol TE/g，遠(yuǎn)高于藍(lán)莓果實（1.79 mg/g、15.9 mmol TE/g）。LI Chunyang等[10]發(fā)現(xiàn)兔眼藍(lán)莓葉的乙醇提取物中多酚類物質(zhì)含量較高，且抗氧化能力強(qiáng)于兔眼藍(lán)莓果。Turhan等[11]對藍(lán)莓果和藍(lán)莓葉的多酚含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓葉多酚含量高于藍(lán)莓果，且藍(lán)莓葉多酚清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicals，DPPH）自由基能力和還原能力強(qiáng)于藍(lán)莓果。李穎暢等[12]發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓葉總黃酮具有較強(qiáng)的清除氧自由基作用，抑制脂質(zhì)過氧化。本研究對藍(lán)莓種植副產(chǎn)物藍(lán)莓花、莖、葉總多酚、總黃酮、原花青素的含量進(jìn)行測定，并采用4 種體外抗氧化活性評價方法，對藍(lán)莓不同部位甲醇提取物的抗氧化活性進(jìn)行比較研究，以期為藍(lán)莓的進(jìn)一步綜合開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)莓花、嫩莖、嫩葉、老葉采自重慶市永川區(qū)七彩藍(lán)莓園，藍(lán)莓品種為南金3#（兔眼高叢藍(lán)莓），樹齡3 a，5月份采收嫩莖葉和凋落的花，10月份在同一部位采收的老葉片。經(jīng)40 ℃、8～10 h烘至水分含量低于8%以下，粉粹過60 目篩密封－80 ℃保藏備用。實驗之前，將樣品置于干燥器中平衡過夜。

兒茶素、蘆丁、沒食子酸（純度95%以上） 美國Sigma公司；VC標(biāo)準(zhǔn)品、DPPH、2,2’-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）、福林-酚試劑、香草醛 上海金穗生物科技有限公司；其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2600型紫外-可見分光光度計 上海天美儀器有限公司；PL303型電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司；DD-5M型低速離心機(jī) 湘儀離心機(jī)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品的制備

稱取1 g左右的各樣品（精確到0.001 g），以料液比1∶80（m/V）的比例分別加入70%甲醇、鹽酸酸化的70%甲醇水溶液（V（HCl）∶V（70%甲醇）＝0.1∶100）于50 ℃水浴中浸提60 min，4 000 r/min離心10 min，濾紙過濾后濾液裝入棕色瓶中4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 總多酚含量的測定

在Cai Yizhong等[13]福林-酚法的基礎(chǔ)上有所改進(jìn)。分別取樣液1 mL，加入1 mL福林-酚試劑，用7.5%碳酸鈉水溶液定容至25 mL，混勻后在室溫條件下靜置4 min，在暗處放置2 h后，取上清液用分光光度計在750 nm波長處測定其吸光度。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下測定吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝3.99x＋0.091 3，R2為0.999 2。結(jié)果以沒食子酸當(dāng)量（mg GAE/g，以 干質(zhì)量計，下同）表示。

1.3.3 總黃酮含量的測定

采用Chun等[14]改良的比色法。分別取樣液1 mL、加入1 mL 5%的亞硝酸鈉水溶液混勻，6 min后加入1 mL 10%硝酸鋁水溶液，6 min后加10 mL 4 g/100 mL氫氧化鈉水溶液混勻，用去離子水定容至25 mL，靜置15 min，反應(yīng)液充分混勻，15 min后，取上清液在510 nm波長處測定吸光度。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下測定吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝0.477 2x＋0.040 6，R2為0.999 8。結(jié)果以蘆丁當(dāng)量表示（mg RE/g）。

1.3.4 原花青素含量的測定

參照文獻(xiàn)[15]的方法，向試管內(nèi)加入樣液1 mL，加入6 mL 5%的香草醛-甲醇溶液，再加3 mL鹽酸，徹底混勻，避光室溫條件下反應(yīng)1 h。最后取試液在500 nm波長處測定吸光度。以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下測定吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝1.308 1x＋0.060 2，R2為0.999 3。結(jié)果以兒茶素當(dāng)量表示（mg CAE/g）。

1.3.5 鐵還原能力的測定

參照文獻(xiàn)[16]的方法，在試管中依次加入2.5 mL磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS，0.2 mo1/L、pH 6.6），分別量取不同質(zhì)量濃度的藍(lán)莓花提取物、抗壞血酸溶液各2.5 mL和2.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的鐵氰化鉀溶液，于50 ℃水浴保溫20 min后，快速冷卻，再加入2.5 mL 10%三氯乙酸溶液，3 000 r/min離心10 min，取上清液2.5 mL，依次加入2.0 mL蒸餾水、0.5 mL 0.1%的FeCl3溶液，充分混勻，靜置10 min后，在700 nm波長處測定吸光度，鐵還原能力用吸光度表征，以提取劑吸光度作為空白值（A0）。

1.3.6 清除?OH能力的測定

[17]的方法：在比色管中依次加入10 mmol/L的FeSO41 mL、10 mmol/L水楊酸1 mL，分別加入不同質(zhì)量濃度（以總多酚質(zhì)量濃度計）藍(lán)莓花甲醇提取物1 mL，最后加8.8 mmol/L H2O21 mL，37 ℃反應(yīng)0.5 h，以蒸餾水作參比，在510 nm波長處測吸光度，并同時做不加顯色劑的樣品空白；以同樣的方法測定VC的?OH清除能力，作為對照。按照公式（2）計算?OH清除率。

式中：A0為用蒸餾水代替樣品的吸光度；Ai為加入樣品溶液的吸光度；Aj為不加顯色劑H2O2樣品溶液的吸光度。

半數(shù)清除（抑制）濃度（median elimination concentration，EC50）定義為清除50%自由基所需的樣品質(zhì)量濃度，其計算是通過獲得的清除?OH自由基回歸方程所得。以待測樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），清除率為縱坐標(biāo)（Y）得待測樣品清除?OH自由基的關(guān)系曲線。計算得到待測樣品的EC50。DPPH自由基、ABTS＋·的EC50計算方法類似。

1.3.7 清除DPPH自由基能力的測定

參考文獻(xiàn)[18]的方法，分別量取不同質(zhì)量濃度的提取物2 mL及2 mL DPPH溶液（0.2 mmol/L，避光4 ℃保存，現(xiàn)用現(xiàn)配）混合搖勻，37 ℃暗處放置30 min，517 nm波長處測定吸光度。同樣做VC對照。按照公式（3）計算DPPH自由基清除率。

式中：Ai為加入2 mL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液后DPPH溶液的吸光度；Aj為加入2 mL不同質(zhì)量濃度樣品溶液和2 mL提取劑的吸光度；A0為加入甲醇后DPPH溶液的吸光度。

1.3.8 總抗氧化能力的測定

采用ABTS＋·清除法，參考文獻(xiàn)[19]并稍做改動：在濃度為7 mmol/L ABTS溶液中加入過硫酸鉀使其終濃度為2.45 mmol/L，充分混合均勻，將混合反應(yīng)液在室溫避光的條件下放置12～16 h（ABTS反應(yīng)液須新鮮配制，保留的最長時間為3 d）。在管中加入0.1 mL樣品溶液、3.9 mL ABTS反應(yīng)液，充分振蕩均勻，反應(yīng)2 min后，在745 nm波長處測定吸光As。同時做空白對照A0，丁基羥基茴香醚（butyl hydroxy anisd，BHA）作陽性對照。按公式（4）對ABTS＋·的清除率進(jìn)行計算。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 總多酚、總黃酮及原花青素含量

表1 藍(lán)莓不同組織部位酚類物質(zhì)含量Table1 Phenol contents in different parts of blueberry

由表1可以看出，藍(lán)莓花、莖、葉酚類物質(zhì)中均是總黃酮含量高于總多酚含量，原花青素含量較少；藍(lán)莓植株葉片和嫩莖總多酚、總黃酮、原花青素含量均高于花，在P＜0.05水平上存在顯著差異；嫩葉中總黃酮、總多酚含量分別是嫩莖的1.46、1.85 倍，亦存在顯著差異（P＜0.05），而嫩莖中原花青素含量是嫩葉的1.64倍；老葉中總多酚、總黃酮和原花青素含量均高于嫩莖，分別是嫩莖的1.29、1.85、1.21倍；老葉與嫩葉總黃酮含量相當(dāng)；老葉總多酚含量低于嫩葉，僅為嫩葉的88%，老葉原花青素含量為嫩葉的1.97倍，老葉與嫩葉在這兩種成分含量上均存在顯著差異（P＜0.05）。總體上，各樣品間酚類物質(zhì)含量表現(xiàn)為葉＞莖＞花。

與劉文旭等[20]報道的藍(lán)莓全果、果渣中總多酚、總黃酮、原花青素含量相比，本研究中藍(lán)莓莖、葉總多酚含量（30.01～43.77 mg GAE/g）均高于全果（9.44 mg GAE/g）和果渣（19.74 mg GAE/g），總黃酮含量（36.72～68.01 mg GAE/g）高于全果（36.08 mg GAE/g）而低于果渣（71.79 mg GAE/g），莖葉原花青素含量遠(yuǎn)低于全果（24.38 mg GAE/g）和果渣（62.64 mg GAE/g），而藍(lán)莓花除總多酚含量（12.68 mg GAE/g）高于全果外，其他均低于全果和果渣。因此，藍(lán)莓莖葉中的總多酚和總黃酮值得開發(fā)利用。

2.2 抗氧化能力分析

2.2.1 鐵還原能力

圖1 藍(lán)莓植株不同部位甲醇提取物的鐵還原能力Fig.1 FRAP activity of methanol extracts from different parts of blueberry

由圖1可知，藍(lán)莓各部位提取物的鐵還原能力隨著總多酚質(zhì)量濃度的提高而提高，且在測定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均大于VC對照品；總體上，老葉的鐵還原能力最大，其次是嫩莖和花，嫩葉較差。藍(lán)莓花和藍(lán)莓嫩葉在100.0～250.0 μg/mL范圍內(nèi)鐵還原能力均存在顯著性差異（P＜0.05），而與老葉在50.0 μg/mL和250.0 μg/mL時差異顯著（P＜0.05），與嫩莖差異不大。嫩莖與嫩葉相比，嫩莖還原能力大于嫩葉，且在低質(zhì)量濃度（12.5～25.0 μg/mL）和高質(zhì)量濃度（250.0 μg/ mL）時均存在顯著差異（P＜0.05）。老葉與嫩葉在50.0～250.0 μg/mL范圍內(nèi)差異顯著（P＜0.05）。說明藍(lán)莓各部位鐵還原能力存在一定的差異。

2.2.2 清除?OH能力

圖2 藍(lán)莓植株不同部位甲醇提取物對·OH的清除能力Fig.2 Hydroxyl radical scavenging activity of methanol extracts from different parts of blueberry

由圖2可知，藍(lán)莓各部位提取物的?OH清除能力隨著多酚質(zhì)量濃度的提高而提高，且在測定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)除老葉在高質(zhì)量濃度反而低于VC對照品外，其他樣品均高于VC的清除能力。樣品中，嫩莖清除?OH能力最大，在多酚質(zhì)量濃度為500 μg/mL時可達(dá)到82.52%，與嫩葉在中等質(zhì)量濃度（100、150 μg/mL）時差異顯著（P＜0.05），而與老葉在所有質(zhì)量濃度范圍均具有顯著差異（P＜0.05），與花相比僅在高質(zhì)量濃度時無顯著差異。在提取液多酚中等質(zhì)量濃度（100、150 μg/mL）時，藍(lán)莓花清除能力高于嫩葉，低質(zhì)量濃度和高質(zhì)量濃度時，嫩葉高于花，但兩者僅在提取物最低質(zhì)量濃度時存在顯著差異（P＜0.05）。

相對于對照品VC的清除?OH能力（EC50289 μg/mL），老葉提取物的?OH清除能力（EC50383 μg/mL）較大，而花（EC50

234 μg/mL）、嫩葉（203 μg/mL）、嫩莖（151 μg/mL）較VC小，嫩莖提取物對?OH清除作用強(qiáng)。

2.2.3 清除DPPH自由基能力

DPPH自由基清除能力是篩選抗氧化活性物質(zhì)普遍采用的一項指標(biāo)，被廣大學(xué)者應(yīng)用于測定果蔬和藥材提取物等[21]。由圖3可知，藍(lán)莓花、莖、葉甲醇提取物對DPPH自由基的清除能力有一定差異，且在1.2～20.0 μg/mL范圍內(nèi)呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，之后隨著質(zhì)量濃度繼續(xù)升高，清除能力增加減緩，且各樣品對DPPH自由基的清除能力均高于同等質(zhì)量濃度條件下的VC。所有樣品在質(zhì)量濃度為40 μg/mL時均能達(dá)到90%以上的清除效果，而莖和葉在20 μg/mL時已達(dá)到90%清除效果，清除DPPH自由基能力：嫩莖＞嫩葉＞老葉＞花＞VC。嫩莖與嫩葉提取物之間在實驗樣品質(zhì)量濃度范圍內(nèi)無顯著差異，樣品質(zhì)量濃度在1.2 μg/mL和10.0 μg/mL時，莖、葉甲醇提取物的DPPH自由基清除能力與花存在顯著差異（P＜0.05）；樣品質(zhì)量濃度在5 μg/mL和10 μg/mL時，老葉與嫩葉和嫩莖的DPPH自由基清除能力差異顯著（P＜0.05）。相對于對照品VC的EC508.4 μg/mL，所有樣品提取物的EC50較小，嫩莖為3.9 μg/mL，嫩葉為4.4 μg/mL，老葉為5.9 μg/mL，花為2.9 μg/mL。

圖3 藍(lán)莓植株不同部位甲醇提取物對DPPH自由基的清能力Fig.3 DPPH Radical scavenging capacity of methanol extracts from different parts of blueberry

2.2.4 總抗氧化能力

圖4 藍(lán)莓植株不同部位甲醇提取物的總抗氧化能力Fig.4 Total antioxidant capacityof methanol extracts from different parts of blueberry

ABTS＋·清除法目前已被廣泛應(yīng)用于親水、親脂性物質(zhì)總抗氧化能力的測定[22]。由圖4可知，藍(lán)莓不同部位醇提取物對ABTS＋·清除能力隨多酚質(zhì)量濃度的提高而提高，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到60 μg/mL時，藍(lán)莓嫩莖對ABTS＋·清除能力可達(dá)到99%、嫩葉為96.83%、老葉為92.02%；在120 μg/mL時，藍(lán)莓花和BHA對ABTS＋·清除能力都不到90%（分別為88.83%、83.53%）。與對照品BHA相比，各樣品在提取物質(zhì)量濃度為60 μg/mL已達(dá)到較理想的ABTS＋·清除能力，再增加質(zhì)量濃度的意義較小。各樣品對ABTS＋·清除能力為嫩莖＞嫩葉＞老葉與花＞BHA，嫩莖與嫩葉、嫩葉與老葉均在較低質(zhì)量濃度時差異顯著（P＜0.05），最大時差異在1.7 倍左右。

相對于對照品BHA的總抗氧化能力（EC5050.9 μg/mL），所有樣品提取物的EC50較小，最小的是嫩莖13.6 μg/mL，其次是嫩葉22.6 μg/mL，老葉為30.5 μg/mL，花為30.4 μg/mL。

3 討 論

藍(lán)莓，屬于杜鵑花科越橘屬多年生常綠灌木。藍(lán)莓中豐富的多酚類物質(zhì)，可分為黃酮類、酚酸類、木脂素類和復(fù)雜的酚類聚合物類，是藍(lán)莓代謝過程中的次生代謝產(chǎn)物，存在于莖葉、果肉以及種皮中，含量較高[23-24]，具有抗氧化、抗癌、抗炎癥、抗衰老及預(yù)防心血管疾病等多種生理活性功能[25-27]，且野生品種的生物活性高于種植品種[24,28]。李穎暢等[29]通過對4 種不同種類藍(lán)莓葉多酚含量的測定可知，多酚含量從高到低的順序依次為＞野生藍(lán)莓葉＞美登藍(lán)莓葉＞藍(lán)星藍(lán)莓葉，其中北陸藍(lán)莓葉中多酚含量最高，可達(dá)79.5 mg/g，最低的藍(lán)星藍(lán)莓葉多酚含量為51.5 mg/g，均高于本實驗?zāi)辖?#藍(lán)莓葉多酚含量（43.77 mg/g）。

近年來，國內(nèi)外學(xué)者對藍(lán)莓葉的組成和生理功能進(jìn)行了研究。劉曦等[19]測定的兔眼藍(lán)莓葉甲醇提取物中總多酚含量為192.00 mg/g，高于黃酮含量68.94 mg/g，與本研究中總黃酮含量高于總多酚含量不相符合，這可能與提取條件和方法有關(guān)。藍(lán)莓葉酚類物質(zhì)抗氧化能力好。本研究表明藍(lán)莓植株花、莖、葉甲醇提取物均具有較高的抗氧化能力，對DPPH自由基的清除能力最強(qiáng)，在總多酚質(zhì)量濃度為40 μg/mL時均能達(dá)到90%以上，其次是ABTS＋·清除能力需要在120 μg/mL時達(dá)到90%以上，而對·OH的清除作用需要較高質(zhì)量濃度（500 μg/mL）才能達(dá)到80%以上，但均高于同等質(zhì)量濃度對照品的清除率。而劉曦等[19]對藍(lán)莓葉甲醇提取物抗氧化性能研究表明，其對DPPH自由基和ABTS＋·的清除能力較低，僅能達(dá)到60%～80%，且同等提取物質(zhì)量濃度條件下對ABTS＋·清除能力大于對DPPH自由基，與本研究成果有一定差異。楊貴云等[30]分析了不同品種、成熟度及提取方法對藍(lán)莓葉提取物生物活性的影響，表明藍(lán)莓成熟度和提取方法不同，所得提取物的總多酚含量、清除自由基能力和鐵還原能力均有顯著差異，與酸、堿提取所得提取物比，50%乙醇的振蕩提取物具有更強(qiáng)的生物活性。這些研究表明提取方法和條件不同，可能導(dǎo)致提取物中多酚組分及含量不同，比如綠原酸、蘆丁、花青素等含量的差異會導(dǎo)致抗氧化性能的強(qiáng)弱差異。本實驗還對藍(lán)莓花、莖、葉多酚類單體進(jìn)行了初步研究，表明藍(lán)莓葉特別是嫩葉中綠原酸含量較高，而花中含蘆丁較多；藍(lán)莓葉酚酸類單體與其抗氧化性能的關(guān)系，有待于今后進(jìn)一步研究。

藍(lán)莓葉生物活性物質(zhì)含量較高，資源豐富，抗氧化性能好，具有良好的開發(fā)利用前景。為了更好的開發(fā)、利用這一植物資源，對其抗氧化酚類物質(zhì)的提取、分離及各成分間的協(xié)同作用和活性關(guān)系有待進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 馬田田. 篤斯越桔葉營養(yǎng)成分分析[J]. 特產(chǎn)研究, 2001, 23(1)： 19-21. DOI：10.3969/j.issn.1001-4721.2001.01.006.

[2] 李穎暢, 王亞麗. 藍(lán)莓葉多酚研究進(jìn)展及其在食品中的應(yīng)用[J].食品與發(fā)酵科技, 2013, 49(6)： 99-103. DOI：10.3969/j.issn.1674-506X.2013.06-021.

[3] SKUPIE? K, OSZMIA?SKI J, KOSTRZEWA-NOWAK D, et al. In vitro antileukaemic activity of extracts from berry leaves against sensitive and multidrug resistant HL60 cells[J]. Cancer Letters, 2006, 236(2)： 282-291. DOI：10.1016/j.canlet.2005.05.018.

[4] WANG S Y, CHEN C T, SCIARAPPA W, et al. Fruit quality, antioxidant capacity, and flavonoid content of organically and conventionally grown blueberries[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(14)： 5788-5794. DOI：10.1021/jf703775r.

[5] MARTINEAU L C, COUTURE A, SPOOR D, et al. Anti-diabetic properties of the Canadian lowbush blueberry Vaccinium angustifolium Ait[J]. Phytomedicine, 2006, 13(9/10)： 612-623. DOI：10.1016/ j.phymed.2006.08.005.

[6] GRACEA M H, RIBNICKY D M, KUHNB P, et al. Hypoglycemic activity of a novel anthocyanin-rich formulation from lowbush blueberry, Vaccinium angustifolium Aiton[J]. Phytomedicine, 2009, 16(5)： 406-415. DOI：10.1016/j.phymed.2009.02.018.

[7] HARRIS C S, BURT A J, SALEEM A, et al. A single HPLC-PADAPCI/MS method for the quantitative comparison of phenolic compounds found in leaf, stem, root and fruit extracts of Vaccinium angustifolium[J]. Phytochemical Analysis, 2007, 18(2)： 161-169. DOI：10.1002/pca.970.

[8] WANG S Y, LIN H S. Antioxidant activity in fruits and leaves of blackberry, raspberry, and strawberry varies with cultivar and developmental stage[J]. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2000, 48(2)： 140-146. DOI：10.1021/jf9908345.

[9] EHLENFELDT M K, PRIOR R L. Oxygen radical absorbance capacity (ORAC) and phenolic and anthocyanin concentration in fruit and leaf tissues of highbush blueberry[J]. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2001, 49(5)： 2222-2227. DOI：10.1021/jf0013656.

[10] LI C Y, FENG J, HUANG W Y, et al. Composition of polyphenols and antioxidant activity of rabbiteye blueberry (Vaccinium ashei) in Nanjing[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(3)：523-531. DOI：10.1021/jf3046158.

[11] TURHAN S, TEMIZ H, KOCA A F. Oxidatibe stability of brined anchovies with extracts from blueberry (Vaccunum sp.) fruits and leaves[J]. Journal of Food Quality, 2009, 32(4)： 411-424. DOI：10.1111/ j.1745-4557.2009.00270.x.

[12] 李穎暢, 孟憲軍. 藍(lán)莓葉黃酮提取物抗氧化活性的研究[J]. 營養(yǎng)學(xué)報, 2008, 30(4)： 427-429. DOI：10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2008.04.016.

[13] CAI Y Z, LUO Q, SUN M, et al. Antioxidant activity and phenolic ompounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated with anticancer[J]. Life Sciences, 2004, 74(17)： 2157-2184. DOI：10.1016/ j.lfs.2003.09.047.

[14] CHUN O K, KIM D O, LEE C Y. Superoxide radical scavenging activity of the major polyphenols in fresh plums[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2003, 51(27)： 8067-8072. DOI：10.1021/jf034740d.

[15] NAKAMURA Y, TSUJI S, TONGGAI Y. Analysis of proanthocyanidins in grape seed extracts,health foods and grape seed oils[J]. Journal of Health Sciences, 2003, 49(1)： 45-54. DOI：10.1248/jhs.49.45.

[16] VENKATACHALAM U, MUTHUKRISHNAN S. Free radical scavenging activity of ethanolic extract of Desmodium gangeticum[J]. Journal of Acute Medicine, 2012, 2(2)： 36-42. DOI：10.1016/ j.jacme.2012.04.002.

[17] 陳留勇, 孟憲軍, 賈薇, 等. 黃桃水溶性多糖的抗腫瘤作用及清除自由基、提高免疫活性研究[J]. 食品科學(xué), 2004, 25(2)： 167-170. DOI：10.3321/j.issn：1002-6630.2004.02.039.

[18] 周瑋婧, 孫智達(dá), 謝筆鈞, 等. 荔枝皮原花青素提取、純化及抗氧化活性研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(8)： 68-71. DOI：10.3321/ j.issn：1002-6630.2009.08.011.

[19] 劉曦, 祝連彩, 王伯初. 藍(lán)莓葉不同溶劑提取物抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(12)： 101-105. DOI：10.13386/ j.issn1002-0306.2013.12.076.

[20] 劉文旭, 黃午陽, 曾曉雄, 等. 草莓、黑莓、藍(lán)莓中多酚類物質(zhì)及其抗氧化活性研究[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(23)： 130-133. DOI：10.13386/ j.issn1002-0306.2013.12.076.

[21] GONZáLEZ S M. Methods used to evaluate the free radical scavenging activity in foods and biological systems： review[J]. Food Science and Technology International, 2002(8)： 121-137.

[22] RE R, PELLEGRINI N, PROTEGGENTE A, et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay[J]. Free Radical Biology and Medicine, 1999, 26(9)： 1231-1237. DOI：10.1016/S0891-5849(98)00315-3.

[23] OSMAN N, ADAWI D, AHRNé S, et al. Probiotics and blueberry attenuate the severity of dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis[J]. Digestive Diseases and Sciences, 2008, 53(9)： 2464-2473. DOI：10.1007/s10620-007-0174-x.

[24] HARRIS C S, BURT A J, SALEEM A, et al. A single HPLC-PADAPCI/MS method for the quantitative comparison of phenolic compounds found in leaf, stem, root and fruit extracts of Vaccinium angustifolium[J]. Phytochemical Analysis, 2007, 18(2)：161-169. DOI：10.1002/pca.97.

[25] LOHACHOOMPOL V, MULHOLLAND M, SRZEDNICKI G, et al. Determination of anthocyanins in various cultivars of highbush and rabbiteye blueberries[J]. Food Chemistry, 2008, 111(1)： 249-254. DOI：10.1016/j.foodchem.2008.03.067.

[26] KIM Y J, SHIN Y. Antioxidant profile, antioxidant activity, and physicochemical characteristics of strawberries from different cultivars and harvest locations[J]. Applied Biological Chemistry, 2015, 58(4)：587-595. DOI：10.1007/s13765-015-0085-z.

[27] PERVIN M, HASNAT M A, LIM B O. Antibacterial and antioxidant activities of Vaccinium corymbosum L. leaf extract[J]. Asian Pacif i c Journal of Tropical Disease, 2013, 3(6)： 444-453. DOI：10.1016/S2222-1808(13)60099-7.

[28] BUNEA A, RUGIN? D O, PINTEA A M, et al. Comparative polyphenolic content and antioxidant activities of some wild and cultivated blueberries from Romania[J]. Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca, 2011, 39(2)： 70-76. DOI：10.15835/ nbha3926265.

[29] 李穎暢, 呂艷芳, 勵建榮. Folin-Ciocalteu法測定不同品種藍(lán)莓葉中多酚含量[J]. 中國食品學(xué)報, 2014, 14(1)： 273-278. DOI：10.16429/ j.1009-7848.2014.01.005.

[30] 楊貴云, 錢炳俊, 岳進(jìn), 等. 藍(lán)莓品種及提取方法對藍(lán)莓葉生物活性的影響[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版), 2014, 32(1)： 49-52; 66. DOI：10.3969/J.ISSN.1671-9964.2014.01.009.

Comparison of Antioxidant Activity and Phenolic Contents of Blueberry Flowers, Stems and Leaves

LI Xiaoying, XUE Mei, FAN Wenqiao*
(College of Forestry & Life Science, Chongqing University of Art & Science, Chongqing 402160, China)

Total phenolic content (TPC), total flavonoid content (TFC) and total proanthocyanin content (TAC) were determined in blueberry fl owers, tender stems, tender leaves and old leaves. Antioxidant activities of acidif i ed methanol extracts from different parts of blueberry were evaluated by ferric reducing antioxidant power (FRAP) and hydrolxyl, DPPH and ABTS+free radicals scavenging capacity assays. Results indicated that tender leaves contained the highest level of TPC (43.77 mg gallic acid/g md), which was increased by 3.45, 1.42 and 1.12 folds as compared to fl owers, tender stems and old leaves, respectively. Old leaves contained the highest levels of TFC (68.01 mg rutin/g md) and TAC (23.29 mg catechinic acid/g md), which were 2.57 and 4.61, 1.79 and 1.23, and 1.03 and 1.98 folds higher than those in fl owers, tender stems, and tender leaves, respectively. The FRAP activity of the extract from old leaves was the highest, followed by tender stems, flowers, and tender leaves. The hydroxyl radical scavenging activity was in the following order： tender stems ＞ tender leaves ＞ fl owers ＞ old leaves. Both the DPPH radical scavenging capability and total antioxidant capacity (TAC) were in the following order： tender stems ＞ tender leaves ＞ old leaves ＞ fl owers ＞ VC. In summary, the DPPH radical scavenging was the strongest of the antioxidant activities for all the blueberry extracts, followed by TAC, and their antioxidant activities were the weakest in terms of hydroxyl radical scavenging capacity and FRAP activity.

blueberry; fl avonoids; phenolics; antioxidant activity

10.7506/spkx1002-6630-201703024

TS255.1

A

1002-6630（2017）03-0142-06

李曉英, 薛梅, 樊汶樵. 藍(lán)莓花、莖、葉酚類物質(zhì)含量及抗氧化活性比較[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(3)： 142-147. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201703024. http：//www.spkx.net.cn

LI Xiaoying, XUE Mei, FAN Wenqiao. Comparison of antioxidant activity and phenolic contents of blueberry flowers, stems and leaves[J]. Food Science, 2017, 38(3)： 142-147. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201703024. http：//www.spkx.net.cn

2016-04-12

重慶市基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究（重點）專項（cstc2015jcyjBX0013）；重慶市基礎(chǔ)科學(xué)與前沿技術(shù)研究項目（csts2016jcyjAX0012）；永川區(qū)自然科學(xué)基金項目（Ycstc，2015nc1001）

李曉英（1973—），女，副教授，碩士，研究方向為天然產(chǎn)物的提取與功能活性。E-mail：lxyi2@126.com

*通信作者：樊汶樵（1982—），男，副教授，博士，研究方向為抗生素替代品。E-mail：wonderbreeze@126.com