快速Wright液與改進的Wright液染色比較分析*

臧貴勇，張祥令，楊燕平

(1.貴州省黔南民族醫學高等專科學校解剖與組織胚胎學教研室，貴州黔南 558000； 2.貴州醫科大學組織學與胚胎學教研室，貴陽 550004)

快速Wright液與改進的Wright液染色比較分析*

臧貴勇1，張祥令2△，楊燕平2

(1.貴州省黔南民族醫學高等專科學校解剖與組織胚胎學教研室，貴州黔南 558000； 2.貴州醫科大學組織學與胚胎學教研室，貴陽 550004)

目的 提高血涂片的制作質量，評價兩種方法鏡下觀察細胞形態的效果。方法 取人耳垂血液，改進Wright染色，光學顯微鏡下觀察染色效果。結果 改進Wright染色，血涂片300張，各種血細胞結構清晰。結論 該方法可提高血涂片染色質量，利于長時間保存和使用。

教學；血液病；血涂片；改進Wright染色；制作

血涂片常用于解剖組織學實驗教學和臨床醫學檢驗工作，應用極其廣泛，特別是對各種血液病的診斷、治療有很大價值。血細胞具有重要的生理功能，其形態結構和功能是學習重點[1]。為了使醫學生在組織學實驗教學中能夠觀察到染色效果好、結構清晰、層次分明、不易褪色，長時間保存和使用的教學血涂片，使醫學生將來更好地服務于臨床和科研奠定基礎[2]，作者對其改進制作教學血涂片方法進行了研究，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑和儀器 Wright干粉、甲醇、甘油、甲醛液、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、快速Wright液等試劑均為國產分析純；顯微鏡為LEICA DFC公司產品；醫用采血針、75%乙醇棉球、洗耳球、染色架、特制蠟筆，清潔的載玻片和蓋玻片(將新玻片用洗潔精浸泡，自來水反復沖洗，載玻片置95%乙醇浸泡2 h，擦干備用)。

1.1.2 試劑的配制 改進Wright配制配方：Wright粉劑0.1 g加甲醇60 mL充分研磨，直至溶解過濾，加入優質甘油1 mL，臨用前加甲醛液1 mL，常溫保存，配制周期1個月。磷酸鹽緩沖液pH 6.8：磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.3 g加磷酸氫二鈉(Na2HPO4)0.2 g加蒸餾水1 000 mL稀釋[3]。

1.2 方法 采血部位和涂血膜部位常為耳垂或左手指尖采血，通常以耳垂取血較好，因該處采血不易感染，先輕揉耳垂部位使血流通暢，再用75%乙醇棉球消毒局部皮膚，待乙醇干后快速刺破耳垂下緣，使血自然流出，第1滴血棄之不用(因為含單核細胞較多)。取米粒大小血滴在干凈的載玻片15～20 mm處，將接有血滴的載玻片平托于左手拇食指間，右手取另一潔凈而邊緣無破痕的玻片，然后將右手玻片在玻片面上推向前方。推好片后手持玻片在空氣中揮動，使血膜自然風干，以免血細胞皺縮。天氣寒冷潮濕時，應放于37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小[4]。

1.3 固定染色 血膜干后，用特制蠟筆劃出染色區，以防染液滴加后溢流，將血膜平放在染色架上，一批血涂片滴加快速Wright氏染液，另一批血涂片滴加改進Wright氏染液，分別滴加2～3滴在血膜上，至染液淹沒血膜全部，加入等量磷酸鹽緩沖液pH 6.8，用洗耳球輕輕吹，使之混勻。吹動染液及緩沖液，這樣不僅可使染液與血膜充分接觸，還可防止雜質的沉降[5]。染色3～5 min，沖洗前在低倍鏡下觀察有核細胞是否染色清楚，核著色是否分明。傾去涂片的染液，自來水細流水充分沖洗，至血膜呈淡紅色，待自然干燥后，經二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ各透明10 min，進行封固。

1.4 封固 用中性樹膠封固，即于顯微鏡下進行鏡檢或直接鏡檢，待樹膠干燥后可長期保存使用。

2 結 果

改進Wright染色，血涂片300張，各種血細胞結構清晰。快速Wright染色法，血細胞染色顆粒不明顯，顏色對比度不強(圖1)；改進Wright染色，血膜外觀為淡紫紅色，在顯微鏡下紅細胞橘紅色圓盤狀；中性粒細胞核顆粒紫紅色，染色質清楚，粗細松緊可辨；嗜酸性粒細胞顆粒橘紅色；嗜堿性粒細胞核藍紫色，顆粒呈深藍紫色；淋巴細胞核深藍紫色，胞質淡藍色；單核細胞核藍紫色，胞質灰藍色；血小板為不規則小體，成簇成堆分布，周邊淺藍色，中央細小的紫紅色顆粒。見圖2、3。

圖1 血涂片(快速Wright染色法×400)

圖2 血涂片(改進Wright染色法×400)

A:紅細胞；B:中性粒細胞；C:嗜堿性粒細胞；↑：血小板。

圖3 血涂片(改進Wright染色法×1 000)

3 討 論

3.1 改進Wright氏染液的優點 改進Wright氏染液加入丙三醇，以增加表面張力，可防止甲醇揮發及被氧化成甲酸，可密封長期保存，臨用前加甲醛液，對細胞固定較好，特別適于顯示細胞特殊顆粒。因此染色后的血涂片各種血細胞在鏡下形態結構清晰、典型。特別是血小板形態結構明顯，血涂片中血小板的形態學及數量的改變對血小板病的診斷有重要意義。改進的Wright染色血涂片通過近三年教學標本的使用，未見褪色現象，得到指導老師和實習學生的好評。而快速Wright染色法，血片中血細胞的形態學不典型，不利于教學片的使用。

3.2 血涂片的要求及注意事項 合格外周血涂片厚薄適宜，頭體尾分明，邊緣整齊，細胞分布均勻，兩側留空隙，染色效果好，細胞清晰可辨。因此血涂片制作好壞有以下影響因素：(1)載玻片的清潔是必要因素，經過處理的載玻片既干凈又無脂痕，否則染色后玻片可見雜物或圓形空白區。(2)血滴大小是影響血涂片厚薄及大小的關鍵因素之一；若血滴過大,血涂片過厚,使細胞重疊縮小、不易觀察形態;血液堆積在載玻片末端,使一些體積較大的細胞遺漏，若血滴過小,血膜太薄,白細胞多集中在邊緣,易導致細胞分布不均。(3)推片速度不可太快或太慢，應一次推成，不可中斷或抖動[6]。(4)未干透血膜不能立即染色，否則染色時血膜易脫落；染色時間的長短與染液的濃度、室溫高低和有核細胞數量有關[7]。(5)加染液量應適當，涂片在加染液后勿使其干固，否則將發生不易去掉的沉淀；沖洗時不能先倒掉染液，應以自來水細流水充分沖洗；沖洗好的血涂片應立放于支架上晾干；(6)染色偏酸偏堿時應更換緩沖液；染色顏色偏深時，可用95%乙醇分色。

3.3 優質血涂片的意義 作為教學片使用的標本，要求較高，顯示血細胞形態結構要典型，胞質內嗜酸嗜堿性顆粒清晰。顯示血細胞中顆粒是識別和判斷及其功能狀態提供的研究方法，以便醫學生能夠更好的辨認各類細胞，為以后學習其他醫學科打下基礎，也為科學研究提供了較好的方法。

[1]張立新，尚宏偉，路欣，等．血涂片制作與觀察在醫學形態學實驗教學中的應用[J]．中國醫學裝備，2013，9(9)：37-38．

[2]黃健，麥婕，陳森洲．加強基礎醫學實踐教學 提高大學生創新能力[J]．中國高等醫學教育，2009(6)：6-7,59．

[3]張志梅，孫輝．兩種血涂片染色方法在教學和臨床應用的比較[J]．中國醫藥指南，2010，8(17)：173-174．

[4]李璐．血涂片染色方法的改良[J]．華夏醫學，2011，24(3)：351-352．

[5]郭自力，李漢全．血涂片瑞氏染色的影響因素和解決方法[J]．高等函授學報(自然科學版)，2001，14(4)：48-49．

[6]杜卓民．實用組織學技術[M]．北京：人民衛生出版社，1998：92-94．

[7]陳紆，陳大美．血涂片制作的幾點體會[J]．中國組織化學與細胞化學雜志，2008，17(4)：386．

?驗交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.05.031

貴州省科技廳聯合基金項目(M2011-28)。 作者簡介：臧貴勇(1971-)，副教授，碩士，主要從事神經及組織學技術研究。

R331.1

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1671-8348(2017)05-0676-02

2016-07-11

2016-09-09)