Megsin基因3個多態性位點與亞洲人群IgA腎病易感性關聯的Meta分析*

葛雅婷,蘇美玲,宋佳治，熊祖應△,侯 霜▲

(1.安徽醫科大學北京大學深圳醫院臨床學院，廣東深圳 518000; 2.北京大學深圳醫院腎內科，廣東深圳 518000)

Megsin基因3個多態性位點與亞洲人群IgA腎病易感性關聯的Meta分析*

葛雅婷1，2,蘇美玲2,宋佳治1，2，熊祖應1，2△,侯 霜2▲

(1.安徽醫科大學北京大學深圳醫院臨床學院，廣東深圳 518000; 2.北京大學深圳醫院腎內科，廣東深圳 518000)

目的 通過Meta分析評估亞洲人群Megsin基因3個多態性位點(rs1055901、rs1055902和rs2689399)與IgA腎病易感性的關聯。方法 通過中國知網、維普、萬方數據庫、中國生物醫學文獻數據庫、PubMed、Web of Science和Google學術數據庫數據庫，電子檢索關于亞洲人群Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性位點與IgA腎病相關性的研究，檢索年限為1960年1月1日開始至2016年5月2日。采用Stata12.0軟件計算合并比值比(OR)和95%置信區間(CI)，并進行敏感性及發表偏倚分析。結果 最終納入6篇文獻(含9項研究)，包含2 179例IgA腎病患者和1 769例健康對照。Meta分析結果顯示，Megsin基因rs1055901、rs1055902多態性位點與亞洲人群IgA腎病易感性無明顯關聯。然而，Megsin基因rs2689399位點與亞洲人群IgA腎病易感性呈顯著負相關(G和C：OR=0.754，95%CI0.592～0.961，P=0.022；GG和CC：OR=0.506，95%CI0.287～0.892，P=0.019；GG和GC+CC：OR=0.551，95%CI0.316～0.961，P=0.036)。結論 Megsin基因的rs2689399位點的G等位基因、GG基因型可能是亞洲人群IgA腎病的保護因子。

腎小球腎炎,IGA；疾病易感性；連鎖不平衡；Megsin；多態性；Meta分析

IgA腎病是全世界范圍內常見的原發性腎小球疾病之一，也是導致終末期腎病的主要病因[1]。成年人中每年IgA發病率約2.5/10萬[2]。在初次腎活檢后20年內，約30%～50%患者會進展為終末期腎病[3]。腎活檢是診斷IgA腎病的金標準，其病理學特點主要是IgA為主沉積在系膜區伴系膜細胞和系膜基質增生[4]。近年來，大量研究關注遺傳易感基因與IgA腎病的關聯，提示遺傳因素與環境的交互作用可能作用于該病的發生。

Megsin基因位于染色體18q21.3，主要是絲氨酸蛋白酶(Serpin)超家族成員，在諸多伴有系膜損傷的腎小球疾病的人類及動物模型中，證實Megsin在腎小球系膜細胞中表達上調，介導了系膜基質增多和系膜細胞數量增加，這很可能是IgA腎病的發病機制之一[5-6]。一些研究已經報道了Megsin基因3′段非編碼區rs1055901和rs1055902多態性位點與IgA腎病相關性[6-9]；也有研究報道C25663G多態性位點與漢族人群IgA腎病易感性的關系[10-11]，然而這些研究主要是小樣本資料的研究，且結果、結論尚未統一。

本研究利用系統性綜述的方法，通過增大樣本量，提高檢驗效能，進一步揭示Megsin基因rs1055901、rs1055902及rs2689399 3個多態性位點與亞洲人群IgA腎病的關聯，為IgA腎病遺傳學研究提供依據。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 用計算機檢索中國知網、維普、萬方數據庫、中國生物醫學文獻數據庫、PubMed、Web of Science和Google學術數據庫，中文以IgA腎病、Megsin、多態性為檢索詞，英文以“IgA nephropathy OR Immunoglobulin A nephropathy” AND “megsin” AND “variant OR mutation OR polymorphism OR SNP”為檢索詞。手工檢索國內外有關Megsin基因多態性位點與亞洲人群IgA腎病發病風險的文獻。所有文獻語種只限中、英文，檢索時間1960年1月1日至2016年5月2號。

1.2 納入和排除標準 納入標準：(1)納入研究均為病例-對照研究，研究人群為亞洲人；(2)符合IgA腎病診斷標準[12]；(3)關于Megsin基因rs1055901(核苷酸位點C2093T)、rs1055902(核苷酸位點C2180T)及rs2689399(核苷酸位點為C25663G)3個多態性位點與亞洲人群IgA腎病相關性研究；(4)排除基礎數據不完整及數據錯誤的研究，排除非病例對照研究、多態性位點非rs1055901、rs1055902或rs2689399的文獻；(5)對于重復發表或資料雷同的研究只保留其中質量最好者。

1.3 文獻質量評價及資料提取 對每個納入的研究參考紐卡斯爾-渥太華量表(Newcastle-Ottawa scale,NOS)[13]標準，從病例-對照對象選擇、可比性、結局和暴露3個方面對文獻質量評分(其中5～9分為相對高質量的研究)。本分析提取的數據包括納入研究的作者、發表年限、種族、基因分型方法、對照組來源、Megsin基因病例和對照的例數及其3個位點基因頻率。由兩位評價者獨立提取數據后交叉核對及文獻質量評價，不同意見與第三者討論解決。

1.4 統計學處理 采用STATA12.0軟件進行統計學分析。利用5種遺傳學模型檢測Megsin基因多態性位點和IgA腎病的相關性，包括等位基因模型B和A，顯性模型BA+BB和AA，隱性模型BB和BA+A，純合子模型BB和AA，雜合子模型BA和AA(其中A為野生型位點，B為突變型位點)。使用Q或I2檢驗分析各研究間的異質性，若P>0.1和I2<50%，則采用固定效應模型；否則采用隨機效應模型。采用比值比(OR)值及95%置信區間(CI)作為效應量。各研究的對照組均檢測哈迪溫伯格平衡(Hardy Weinberg Equilibrium，HWE)。使用敏感性分析評估結果的穩定性及判斷每個獨立研究對總體OR值有無影響，通過Begg′s及Egger′s檢驗評估發表偏倚。通過Hapmap數據庫，利用Haploview4.0軟件，分析Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性位點在亞洲人群包括北京漢族人(CHB)及東京日本人(JPT)、非洲人群(伊巴丹約魯巴人，YRI)及歐洲人群(祖先來自西北歐的猶他州白人，CEU)中的連鎖不平衡關系。

2 結 果

2.1 文獻檢索結果及納入研究的基本特征 文獻篩選流程及結果見圖1。最終納入6篇文獻(含9個研究)[6-11]，包含2 179例IgA腎病患者(病例組)和1 769例健康對照(對照組)。研究對象均屬于亞洲人群，且對照組與病例組均具有可比性。對于rs1055901多態性位點，共納入4項研究，包含病例組856例，對照組786例。對于rs1055902多態性位點，共納入3項研究，包含病例組808例，對照組686例。對于rs2689399多態性位點，共納入2項研究，包含病例組515例，對照組297例。基因型檢測方法包括polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism、sequencing、TaqMan、MassARRAY。納入研究的基本特征見表1。對納入研究對照組的基因型頻率進行HWE檢測，發現有1項研究[11]不符合HWE檢驗(P<0.05)。

圖1 納入文獻流程及結果

SNP作者發表年限基因分型方法TT(CC)基因型例數(病例組/對照組)TC(CG)基因型例數(病例組/對照組)CC(GG)基因型例數(病例組/對照組)HWENOS評分(分)rs1055901Maixnerova等[6]2008sequencing56/1695/3546/100.2159Lim等[7]2008TaqMan33/35106/143121/1370.8008李露等[8]2013PCR-RFLP5/1017/5426/360.1138Wei等[9]2016MassARRAY27/19138/114186/1770.9107rs1055902Maixnerova等[6]2008sequencing53/1192/3352/170.4709Lim等[7]2008TaqMan123/135107/14730/330.4498Wei等[9]2016MassARRAY201/187131/11319/100.1507rs2689399夏運風等[10]2006sequencing277/108169/7225/170.3217李露等[11]2011PCR-RFLP28/4612/364/180.0298

PCR-RFLP：聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性；HWE：哈迪-溫伯格平衡；NOS：紐卡斯爾-渥太華量表。

2.2 文章質量評價 所納入的研究均為病例-對照研究，病例均來自醫院，納入方法合適，具有統一的診斷標準；對照組的選取標準合適，為體檢健康人群。基因型的測量方法準確可靠，研究結果合理可信，且經NOS評分后所納入的研究也波動在7～9分。因此，所有納入研究的方法學質量均較高。

2.3 Meta分析結果

2.3.1 rs1055901多態性位點與IgA腎病易感性關系 對于rs1055901多態性位點，共納入4項研究。Meta分析結果顯示rs1055901多態性位點與IgA腎病易感性之間無明顯關聯(C和T：OR=1.004，95%CI：0.862～1.170，P=0.955；CC和TT：OR=0.953，95%CI：0.672～1.352，P=0.788；CT和TT：OR=0.788，95%CI0.562～1.105，P=0.168；CT+CC和TT：OR=0.853，95%CI0.620～1.175，P=0.331；CC和CT+TT：OR=1.187，95%CI0.836～1.686，P=0.338)，見表2。

2.3.2 rs1055902多態性位點與IgA腎病易感性關系 對于rs1055902多態性位點，共納入3項研究。結果顯示，rs1055902多態性位點與IgA腎病易感性無明顯關聯(C和T：OR=0.993，95%CI0.843～1.169，P=0.933；CC和TT：OR=1.049，95%CI0.708～1.555，P=0.810；CT和TT：OR=0.898，95%CI0.718～1.125，P=0.350；CT+CC和TT：OR=0.937，95%CI0.756～1.161，P=0.552；CC和CT+TT：OR=1.159，95%CI0.809～1.661，P=0.420)，見表2。

2.3.3 rs2689399多態性位點與IgA腎病易感性關系 對于rs2689399多態性位點，共納入2個研究。結果顯示，rs2689399等位基因模型、純合子模型及隱性模型與IgA腎病易感性呈顯著負相關(G和C：OR=0.754，95%CI0.592～0.961，P=0.022；GG和CC：OR=0.506，95%CI0.287～0.892，P=0.019；GG和GC+CC：OR=0.551，95%CI0.316～0.961，P=0.036)。而雜合子模型及顯性模型與IgA腎病易感性無明顯關聯(GC和CC：OR=0.839，95%CI0.608～1.159，P=0.287；GC+GG和CC：OR=0.769，95%CI0.568～1.042，P=0.090)。

表2 Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性與IgA易感性Meta分析結果

OR：比值比；CI：置信區間；PH：異質性P值；PZ：顯著性P值。

2.4 敏感性分析和發表偏倚 采用逐一排除的方法進行敏感性分析，排除任一項研究后，Meta分析的總效應量在剔除前后未發生明顯變化，提示結果較穩定。此外，利用Begg′s和Egger′s檢驗評估發表偏倚，漏斗圖提示所有研究在圖中基本對稱，且Egger′s檢驗提示無明顯發表偏倚(rs1055902：P>|t|=0.424)。

圖2 通過Haploview軟件分析Megsin基因rs1055901、rs1055902和 rs2689399在CEU人群和YRI人群中分別構成的單體型

2.5 Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性位點的連鎖不平衡關系 通過Hapmap數據庫，利用Haploview4.0軟件分析，發現在CHB及JPT人群中未發現rs1055901、rs1055902和rs2689399存在連鎖關系；在CEU人群中發現Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性位點之間標準化的連鎖不平衡系數D′=1，相關系數r2=1(圖2)，表明兩者呈完全連鎖；在YRI人群中，rs2689399和rs1055901兩位點之間呈完全連鎖(D′=1，r2=1)，而rs1055901和rs1055902兩個位點、rs2689399和rs1055901兩位點之間分別也存在一定程度連鎖，且連鎖程度一致(D′=1，r2=0.667，圖2)。

3 討 論

隨著分子生物學研究手段日益成熟與發展，國內外學者發現IgA腎病的發生與發展與遺傳因素密切相關。近年諸多研究報道了一些候選基因如編碼人類HLA抗原、Megsin基因、RAS系統基因、MCP基因等的多態性位點與IgA腎病易感性相關[14]。在此僅探索Megsin基因與IgA腎病的相關性。

Megsin屬于Serpin超家族成員之一，有研究發現在IgA腎病患者中，其RNA及蛋白質水平顯著上調，且發現Megsin表達與系膜細胞數量增多及系膜基質增多有關。國內外學者對Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多態性位點與IgA腎病易感性進行大量研究，部分學者對此進行Meta分析，但是現有的關于Megsin rs1055901、rs1055902及rs2689399與IgA腎病易感性的Meta分析存在一定的缺陷。如Zhou等[15]在2015年完成的納入7篇文獻的Meta分析中，其中所納入的1篇與Megsin基因無關[16]，1篇數據不全[17]，還有1篇數據提取錯誤[6]，且上述Meta分析針對的是總體人群。

因此，本研究針對Megsin基因的3個位點的多態性位點與亞洲人群的IgA腎病易感性進行更新Meta分析。結果發現，rs1055901和rs1055902多態性位點的5種模型(C和T，CC和TT，CT和TT，CT+CC和TT、CC和CT+TT)均與在亞洲人種IgA腎病易感性無關。但因研究及樣本量有限，未來仍需大量樣本去證實rs1055901和rs1055902多態性位點與IgA腎病易感性的關系。同時，本文也分析了rs2689399多態性位點與IgA腎病患病風險的關系，發現在等位基因模型、純合子模型及隱性模型中，該基因多態性位點與IgA腎病易感性有統計學關聯，Megsin基因rs2689399的G等位基因和GG基因型可能是IgA腎病的一個保護因子。為了進一步探討Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399之間的關系，通過Hapmap數據庫，利用Haploview4.0軟件，對Megsin基因連鎖不平衡分析，結果發現rs1055901、rs1055902和rs2689399在CEU人群中存在完全連鎖不平衡，在YRI人群中三者存在一定程度連鎖。但這個結果在亞洲人群中并未得到證實，這意味著更需要大量研究去證明這3個位點與亞洲人群IgA腎病易感性之間的關系。本篇Meta分析納入的數據嚴格遵循納入、剔除標準，病例和對照均較一致，且在年齡、性別、種族方面具有可比性。然而，本文也存在缺陷，如樣本量較小，不確定對照組有無篩查具有相關的亞臨床IgA腎病，且有一個研究的對照組不符合HWE檢驗，其多態性檢測方法也不一致。

綜上所述，本研究認為Megsin基因rs2689399位點與IgA腎病易感性相關，rs2689399的G等位基因和GG基因型可能是IgA腎病的一個保護因子，但仍需要未來更多合理設計的大樣本研究進一步證實本研究的結論。

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Meta-analysis of the relevance between Megsin rs1055901,rs1055902 and rs2689399 polymorphism and susceptibility of IgA nephrology in Asian population*

GeYating1，2,SuMeiling2,SongJiazhi1，2,XiongZuying1,2△,HouShuang2▲

(1.ClinicalCollege,ShenzhenHospital,AnhuiMedicalUniversity&PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China; 2.DepartmentofNephrology,ShenzhenHospital,PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China)

Objective To assess the association of three polymorphisms in Megsin (rs1055901,rs1055902 and rs2689399)and susceptibility of IgA nephropathy in Asian population.Methods We conducted a comprehensive search of electronic CNKI,VIP,WangFang Data,CBM,Pubmed,Web of Science and Google Scholar database on the association between Megsin rs1055901,rs1055902 and rs2689399 polymorphism and susceptibility of IgA nephrology in Asian population (last search update on 2 May 2016).Stata 12.0 software was used to calculate the odds ratio(OR)and 95%CI(confidence interval),as well as sensitivity and publication bias analyses.Results Six publications encompassing nine case-control studies were finally included,including 2 179 cases and 1 769 controls.Finally,no significant association between Megsin rs1055901 and rs1055902 polymorphism and IgA nephrology in Asian population was identified,while a significantly decreased risk of IgA nephrology for rs2689399 polymorphism,was identified in Asian population (G and C:OR=0.754,95%CI0.592-0.961,P=0.022;GG and CC:OR=0.506,95%CI0.287-0.892,P=0.019;GG and GC+CC:OR=0.551,95%CI0.316-0.961,P=0.036).Conclusion Rs2689399 G allele and GG genotype of Megsin may be the protective factors for IgA nephropathy in Asian population.

glomeruloneohritis,IgA;disease susceptibility;linkage disequilibrium;Megsin;polymorphism;Meta-analysis

2016年度重慶市出版專項資金資助項目

?證醫學·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.05.022

深圳市科技研發資金(JCYJ20140415162543010)。 作者簡介：葛雅婷(1989-)，在讀碩士，主要從事原發性腎小球疾病的發病機制的研究。△

，E-mail:xiongzy2005@163.com。▲共同通信作者，E-mail:hssz2007@126.com。

R692.3

A

1671-8348(2017)05-0648-03

2016-09-21

2016-11-22)