Mnk2和eIF4E在食管鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義*

曾 博， 馮沿芬， 黃啟濤， 陳景福， 張 昕， 韓向前， 張水深，鄒健勇， 蘇春華， 陳振光， 羅紅鶴， 雷藝炎△

(1中山大學附屬第一醫院胸外科，廣東 廣州 510080； 2中山大學腫瘤防治中心病理科，廣東 廣州 510060； 3東莞市第三人民醫院心內科, 廣東 東莞 523326)

Mnk2和eIF4E在食管鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義*

曾 博1， 馮沿芬2， 黃啟濤2， 陳景福3， 張 昕1， 韓向前1， 張水深1，鄒健勇1， 蘇春華1， 陳振光1， 羅紅鶴1， 雷藝炎1△

(1中山大學附屬第一醫院胸外科，廣東 廣州 510080；2中山大學腫瘤防治中心病理科，廣東 廣州 510060；3東莞市第三人民醫院心內科, 廣東 東莞 523326)

目的： 探討MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2，Mnk2)和真核細胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)在食管鱗狀細胞癌中的表達及其與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系。方法: 收集臨床食管鱗癌石蠟標本98例及正常食管黏膜上皮組織20例，應用免疫組化SP法檢測癌組織及正常食管黏膜組織中Mnk2和eIF4E的表達，并分析其與食管鱗癌臨床病理特征的關系。結果: Mnk2在食管癌組織中的陽性率68.4%(67/98)，eIF4E的陽性率為61.2%(60/98)，Mnk2與eIF4E表達呈正相關(P<0.05)，且Mnk2蛋白過表達與食管鱗癌的浸潤深度、病理分期密切相關(P<0.05)。結論: Mnk2在食管癌組織中的過表達與浸潤深度、TNM分期有關，同時與eIF4E在食管癌的表達相關，兩者在食管癌的發展中有協同作用。

食管鱗狀細胞癌； MAPK相互作用激酶-2； 真核細胞翻譯起始因子4E

在食管癌中，分子靶向治療發展步伐仍較遲緩，目前研究的主要靶點如表皮生長因子受體家族、血管內皮生長因子等，在食管癌治療中均未見突出療效。MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2，Mnk2)是MAPK激活的蛋白激酶之一，被認為是參與腫瘤發生發展的重要標志物。MAPK細胞信號通路參與了很多的腫瘤細胞生理過程，例如基因的表達、細胞的存活、增殖以及細胞凋亡等[1]。真核細胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)是MAPK-Mnk2信號通路的重要下游因子，被證明在多種腫瘤中呈過表達。近年對Mnk2在腫瘤中的研究主要集中在成神經管細胞瘤、乳腺癌等[2-3]，其在食管鱗癌中的研究尚未見報道。因此，本實驗采用免疫組織化學法對食管鱗癌及正常食管黏膜組織中Mnk2和eIF4E蛋白水平的表達進行研究，分析它們的相關性及臨床意義。

材 料 和 方 法

1 研究對象

收集2010年8月～2011年8月中山大學附屬第一醫院胸外手術切除的食管鱗癌標本98例及距癌組織5 cm以上的手術遠端切緣的正常食管黏膜上皮組織標本20例。全部患者均有完整臨床資料，術前均未接受放、化療，且術后全部病理切片均由我院病理科2位以上病理醫生確診為食管鱗癌。研究經醫院倫理委員會批準。

2 主要試劑

兔多克隆Mnk2抗體購自Sigma-Aldrich；小鼠單克隆eIF4E抗體購自Santa Cruz Biotechnology。

3 方法

3.1 免疫組化檢測Mnk2表達 全部標本均經體積分數10%的甲醛固定、石蠟包埋、4 μm厚連續切片。采用SP方法檢測，操作步驟按照試劑盒說明進行，DAB顯色。Mnk2及elF4E用已知陽性反應的組織切片作為陽性對照， 以PBS代替 Ⅰ 抗作為陰性對照。

3.2 免疫組化結果判定 Mnk2蛋白陽性信號定位于胞核；eIF4E蛋白陽性信號定位于細胞質；染色結果采用Thomas綜合計分法計算，即隨機選取5個視野計算陽性細胞占腫瘤細胞的平均數，陽性細胞<10%計0分，11%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，76%～100%計4分；染色強度淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。將陽性細胞數和著色強度兩者的計分相乘，以中位數8分作為截斷值，小于或等于8為低表達，大于8為過表達。以上結果均至少由2位病理科醫生以盲法觀察確定。

4 統計學處理

應用SPSS 23.0軟件對數據進行統計學處理。采用卡方檢驗、四格表概率法和Spearman相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 Mnk2與eIF4E在食管鱗癌中的表達

Mnk2與eIF4E在食管鱗癌中表達的免疫組化結果見圖1。98例食管鱗癌組織中Mnk2染色陽性率為68.4%(67/98),eIF4E染色陽性率61.2%(60/98)。Mnk2在正常食管組織中的表達為10.0%(2/20)，eIF4E為15%(3/20)，共同陽性率為5.0%(1/20)。食管癌組織中，Mnk2與eIF4E共同陽性率為53.1%(52/98)，經Spearman相關分析，Mnk2與eIF4E表達呈正相關(r=0.412，P<0.05)，見表1。

Figure 1.The expression of Mnk2 and eIF4E in ESCC tissues. A: the low expression of Mnk2 in ESCC；B: the high expression of Mnk2 in ESCC；C: the low expression of eIF4E in ESCC；D: the high expression of eIF4E in ESCC.

圖1 Mnk2 和eIF4E 在食管鱗癌組織中的表達

表1 Mnk2與eIF4E表達的相關性

2 Mnk2陽性表達與食管鱗癌臨床病理特征的關系

在98例食管鱗癌中，Mnk2陽性表達與腫瘤浸潤深度和臨床分期均有顯著的相關性(P<0.05)，而年齡、性別、吸煙、分化程度、淋巴結轉移均未顯示有統計學意義上的相關性。此外，Mnk2與eIF4E共同表達與腫瘤浸潤深度有顯著相關性，見表2、3。

表2 Mnk2陽性表達與食管鱗癌臨床病理特征的關系

Table 2.Association between Mnk2 protein expression and clinical characteristics in ESCC

CharacteristicsCasesMnk2expressionPvalueAge(years)0．676 ≤595238(73．1%) >594629(63．0%)Gender0．985 Male7254(75．0%) Female2613(50．0%)Smoking0．455 Yes6341(65．1%) No3626(72．2%)Differentiation0．403 Low3925(64．1%) Moderate4734(72．3%) High128(66．7%)Tstage0．018 T1/T25632(57．1%) T3/T44235(83．3%)Nstage0．156 N06742(62．7%) N1/23125(80．6%)TNMstages0．026 Ⅰ4323(53．5%) Ⅱ2821(75．0%) Ⅲ2723(85．2%)eIF4Eexpression0．000 Negative3815(39．5%) Positive6052(86．7%)

表3 Mnk2與eIF4E的共同表達及其與食管鱗癌臨床病理特征的關系

Table 3.Co-expression of Mnk2 and eIF4E and clinicopathologic characteristics in ESCC

CharacteristicsCasesMnk2andeIF4EexpressionPvalueTNMstages0．194 Ⅰ4320(46．5%) Ⅱ2818(64．3%) Ⅲ2714(51．9%)Tstage0．002 T1/T25623(41．1%) T3/T44229(69．0%)Nstage0．298 N06734(50．1%) N1/23118(58．1%)

討 論

目前普遍認為食管癌是一個多因素、多階段、多基因變異積累及作用的復雜過程，同時，食管癌的發生、發展涉及大量基因表達水平的改變，如癌基因的激活及抑癌基因的失活。絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)相互作用激酶(Mnks)屬于絲-蘇氨酸蛋白家族，由Mnk1和Mnk2 2種亞型組成。Mnks被認為是Ras/Raf/MAPK 和 PI3K/Akt/mTOR通路的一部分，并且與細胞的增殖和凋亡，惡性轉化以及耐藥等密切相關，對腫瘤的生長、增殖起至關重要的作用[4-5]。作為ERK通路的下游因子，Mnks的活化可以作用于eIF4E，其上調被證明可以促進腫瘤的發生發展[6]。大量研究已經證明，Mnks通路在許多惡性腫瘤中起關鍵的作用，例如乳腺癌[2]、白血病[7]、淋巴瘤[8]等。但Mnk2通路在食管鱗癌中的表達及作用未見報道。

鄭軍等[9]研究發現，在非小細胞肺癌中p-Mnk1及p-eIF4E表達的陽性率分別為85.4%和70.8%，明顯高于正常肺組織的表達；同時，兩者的表達呈顯著正相關。類似地，本實驗檢測了食管鱗癌組織及正常食管組織Mnk2及eIF4E的表達，結果顯示在食管鱗癌中，Mnk2和eIF4E的表達陽性率分別為68.4%和61.2%，明顯高于正常食管組織，結果與在乳腺癌、肺癌等相關的研究中的結果相一致，提示MAPK-Mnk2-eIF4E信號通路可能在食管鱗癌組織被激活，使得eIF4E磷酸化，協同促進食管鱗癌發生發展的。對食管鱗癌中存在Mnk2-eIF4E過表達不呈雙陽性或呈雙陰性的現象，我們認為是與腫瘤的發展程度及可能激活其它交叉信號通路有關，有待進一步的檢測及探討。

另外，我們對食管癌中Mnk2的表達分為過表達組與低表達組，分析其表達與食管磷癌臨床病理特征之間關系，Mnk2的陽性表達與食管鱗癌的腫瘤浸潤深度、臨床病理分期相關，而與年齡、性別、吸煙與否、腫瘤分化程度、淋巴結轉移不相關，提示Mnk2的表達可能參與了食管鱗癌細胞的發生、發展與侵襲，并對評價預后有一定臨床價值。但由于本研究的樣本量較少，同時，檢測方法較為單一，對于Mnk2在食管鱗癌患者預后中的價值尚需日后大樣本研究的進一步證實。此外，我們也發現Mnk2與eIF4E的共同過表達與腫瘤浸潤深度密切相關，提示兩者可能在食管癌的發展及浸潤中存在協同作用，兩者的聯合檢測可作為對食管鱗癌惡性程度評估與預后判斷的參考，其在預后評價中的意義有待進一步的研究。

綜上所述，MAPK-Mnk2-eIF4E信號通路可能在食管癌發生、發展及侵襲過程中起重要作用，對Mnk2-eIF4E的深入研究，將有望為食管癌的靶向治療提供新的實驗依據。

[1] 昌毓穗， 劉季春， 傅華群， 等. Ras-MAPK通路在食管癌中的研究進展[J]. 中國病理生理雜志，2013, 29(2):376-380.

[2] Chrestensen CA, Shuman JK, Eschenroeder A. MNK1 and MNK2 regulation in HER2-overexpressing breast cancer lines[J]. J Biol Chem, 2007, 282(7):4243-4252.

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(責任編輯： 林白霜， 余小慧)

Expression and significance of Mnk2 and eIF4E in esophageal squamous cell carcinoma

ZENG Bo1, FENG Yan-fen2, HUANG Qi-tao2, CHEN Jing-fu3, ZHANG Xin1, HAN Xiang-qian1, ZHANG Shui-shen1, ZOU Jian-yong1, SU Chun-hua1, CHEN Zhen-guang1, LUO Hong-he1, LEI Yi-yan1

(1DepartmentofThoracicSurgery,TheFirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China;2DepartmentofPathology,SunYat-senUniversityCancerCenter,Guangzhou510060,China;3DepartmentofCardiology,TheThirdPeople’sHospitalofDongguanCity,Dongguan523326,China.E-mail:leiyyzsu@126.com)

AIM: To investigate the expression and significance of MAPK-interacting kinase-2 (Mnk2) and eukaryotic initiation factor 4E (eIF4E) in the patients with resected esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). METHODS: The protein expression of Mnk2 and eIF4E in ESCC tissues (98 cases) and normal esophageal tissues (20 cases) were assessed by immunohistochemistry (IHC), and their correlations with clinicopathological features were statistically analyzed.RESULTS: The over-expression rate of Mnk2 and eIF4E was 68.4% (67/98) and 61.2% (60/98), respectively. The expression of Mnk2 had a positive correlation with eIF4E (P<0.05). Clinicopathologic analysis showed that Mnk2 expression was significantly correlated with T classification (P<0.05) and clinical stage (P<0.05). CONCLUSION: The over-expression of Mnk2 was significantly related to the tumor invasive depth, TNM stages and expression of eIF4E in ESCC. Expression of Mnk2 and eIF4E may have a cooperative formation mechanism in the development of ESCC.

Esophageal squamous cell carcinoma; MAPK-interacting kinase-2; Eukaryotic initiation factor 4E

1000- 4718(2017)02- 0349- 04

2016- 11- 24

2016- 12- 22

廣東省醫學科研基金資助項目(No. A2014217； No. A2014246； No. A2016297)

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.02.025

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