化學發光酶免疫分析法及ELISA法檢測在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應用價值

趙娜

(開封市中心醫院 輸血科 河南 開封 475000)

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化學發光酶免疫分析法及ELISA法檢測在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應用價值

趙娜

(開封市中心醫院 輸血科 河南 開封 475000)

目的 對比分析化學發光酶免疫分析法及ELISA法檢測在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應用效果。方法 選取于2014年2月至2016年10月開封市中心醫院收治的62例疑似肝炎患者，采集所有入選者血液樣本，對其乙肝病毒(HBV)及核心抗體IgG與IgM先實施ELISA法檢測，再實施化學發光酶免疫分析法檢測，對比兩種檢測方法HBV檢出情況及對乙肝IgG與IgM檢出情況。結果 ELISA法HBV陽性檢出率(95.16%)與化學發光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無統計學意義(P>0.05)；ELISA法對乙肝IgG與IgM抗體檢測陽性率為19.35%(12/62)、17.74%(11/62)，低于化學發光酶免疫分析法69.35%(43/62)、80.65%(50/62)，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 與ELISA法相比，化學發光酶免疫分析法對乙肝病毒的核心抗體檢出率較高。

乙肝病毒；化學發光酶免疫分析法；核心抗體；ELISA法

乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)是一種DNA病毒，傳染范圍較為廣泛。據相關資料，我國約有9 300萬人攜帶HBV，部分慢性肝炎患者可逐漸進展為肝衰竭、肝硬化、肝癌等，危害患者生命安全[1]。既往研究表明，機體免疫系統對HBV可針對性產生特異性免疫反應，而對HBV及核心抗體檢測是判定HBV感染、預后等主要依據[2]。化學發光酶免疫分析法及ELISA法是檢測HBV及核心抗體主流方法，但關于其應用價值存在一定爭議。本研究旨在對比分析化學發光酶免疫分析法及ELISA法檢測在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月至2016年10月開封市中心醫院收治的62例疑似肝炎患者。其中男37例，女25例；病程為1～11 a，平均(5.16±3.04)a。本研究經開封市中心醫院倫理委員會審核通過。

1.2 檢測方法

1.2.1 主要試劑和儀器 HBV核心IgM抗體試劑盒；HBV核心IgG抗體試劑盒；辣根過氧化酶；PBS緩沖液；100 μl 3%過氧化氫；100 μl 0.1 mol/L氫氧化鈉；100 μl 30 mol/L魯米諾；恒溫箱；發光儀；離心機。

1.2.2 樣本收集 于清晨收集所有受試者空腹靜脈血5 ml，確保標本不溶血。4 h內在4 ℃溫度條件下實施離心，轉速為3 000 r/min，得上清待測。

1.2.3 ELISA法 ①將試劑盒取出，瓶裝試劑與微孔反應條放置于室溫下進行0.5 h平衡。②微孔反應條中加入待測樣本，并為各測試微孔板設置陰性對照、空白對照。③微孔反應條采用封片進行封鎖，放置恒溫(37 ℃)水浴中60 min。④打開并棄去微孔反應條中液體，將洗滌液加入進行5次洗滌。⑤將反應條各孔中加入試劑盒中A液和B液各50 μl，再次封板，37 ℃條件下水浴0.5 h，再加入終止液。⑥ 450 nm下對OD實施檢測，記錄HBV及核心抗體檢出情況。陽性標準為所測血清值≥臨界值(2×標準差+陰性樣品平均A值)。HBV抗體臨界值血清由各陽性對照血清混合稀釋而得，HBV抗體陽性對照由各試劑盒陽性對照血清混合而得。所有操作過程均按試劑盒說明書進行。

1.2.4 化學發光酶免疫分析法 在已包被HBV核心抗原IgG與IgM的聚苯乙烯試管中加入待測樣本，再將辣根過氧化酶(100 μl)標記過的IgG與IgM抗體放置在37 ℃條件下2 h，應用PBS緩沖液進行3 min沖洗，共3次。然后將100 μl 0.1 mol/L氫氧化鈉、100 μl 30 mol/L魯米諾加入，完成室溫下10 min靜置后，將100 μl 3%過氧化氫加入，即刻對發光強度進行測定，并觀察發光儀，讀取數據，記錄HBV及核心抗體檢出情況。1.3 統計學方法 選用SPSS 18.0統計學軟件進行數據處理，定性資料以(n，%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV檢出情況 ELISA法檢出59例HBV陽性，化學發光酶免疫分析法檢出61例HBV陽性。ELISA法HBV陽性檢出率(95.16%)與化學發光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無統計學意義(χ2=0.258，P>0.05)。

2.2 乙肝IgG與IgM檢出情況 ELISA法檢出乙肝IgG抗體12例，IgM抗體11例；化學發光酶免疫分析法檢出乙肝IgG抗體43例，IgM抗體50例。ELISA法對乙肝IgG與IgM抗體檢測陽性率為19.35%(12/62)、17.74%(11/62)，低于化學發光酶免疫分析法的69.35%(43/62)、80.65%(50/62)，差異有統計學意義(χ12=31.400，χ22=49.077，P<0.05)。

3 討論

HBV感染臨床較為常見，對HBV-M和HBV-DNA的檢測可對HBV感染情況做出診斷。乙肝核心抗體包含IgG與IgM，其中IgM維持時間較短，一般在6～18周，IgG出現相對較晚，但其持續時間長，兩者均可說明近期有慢性感染或HBV感染病毒活動。乙肝起病隱匿，常缺乏顯著癥狀，易出現誤診或漏診。而HBV感染能夠向慢性化轉變，增加了肝癌、肝硬化等嚴重并發癥發生風險，因此及早準確診斷HBV感染對疾病早期干預具有積極意義。傳統診斷乙肝方法包含preS1診斷試劑等，比較耗時費力。隨著生物技術發展進步，ELISA法及化學發光酶免疫分析法被廣泛用于臨床血清病毒的檢測中。辜彥等[3]研究指出，化學發光酶免疫分析法及酶聯免疫吸附法均可有效檢出乙型肝炎病毒。而張利[4]等研究指出，化學發光酶免疫分析法對抗體檢測敏感性較高。曾艷華等[5]Meta分析顯示，化學發光法用于血清HCV抗體檢測中，具有穩定性、敏感性、特異性高優點。本研究對比兩種方法對HBV及核心抗體IgG與IgM檢出情況，結果顯示ELISA法HBV陽性檢出率(95.16%)與化學發光酶免疫分析法(98.39%)相比，差異無統計學意義(P>0.05)，說明兩種方法對HBV陽性檢出情況相似。但ELISA法對乙肝IgG與IgM抗體檢測陽性率低于化學發光酶免疫分析法，差異有統計學意義(P<0.05)，提示化學發光酶免疫分析法檢測靈敏性較高。ELISA法診斷試劑盒均采用合成多肽抗原或基因工程包被固相，操作簡便，但以間接法測定，結果可能存在一定差異；而化學發光酶免疫分析法所用試劑盒包被的抗體基本不受突變抗體影響，且其標記物來源豐富，能夠識別多種逃逸變異株，使得人為因素影響較低，故結果重復性和穩定性高。綜上，與ELISA法相比，化學發光酶免疫分析法對乙肝病毒的核心抗體檢出率較高。

[1] 王澤民.時間分辨熒光免疫技術在乙肝病毒血清學檢測中的研究[J].內蒙古醫科大學學報,2013,35(6):455-458.

[2] 安靜娜,李冬冬,陳其霞,等.電化學發光免疫法與酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標志物的結果分析[J].中國輸血雜志,2015,28(4):374-376

[3] 辜彥,王裕圯.化學發光酶免疫分析法及酶聯免疫吸附法檢測抗-丙型肝炎病毒的對比研究[J].國際檢驗醫學雜志,2016,37(20):2891-2892.

[4] 張利,于冬男.化學發光酶免疫分析法及ELISA檢測抗-HCV的結果比較[J].檢驗醫學與臨床,2016,13(1):18-20.

[5] 曾艷華,孟存仁,張朝霞.化學發光法檢測HCV抗體診斷丙型肝炎價值的Meta分析[J].中國循證醫學雜志,2014,14(6):707-715.

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10.3969/j.issn.1004-437X.2017.14.048

2017-02-11)