不同培養條件對瞿麥誘導愈傷組織的影響

李興桃+任佼佼

（山西農業大學園藝學院，山西太谷 030801）

摘 要 試驗以瞿麥葉片為材料，通過對其進行不同消毒時間，不同激素配比濃度和不同光照條件處理，探究瞿麥組織培養的最佳培養條件。試驗結果表明：酒精浸泡30s、NaClO浸泡15min的處理可以極大降低外植體的污染率和褐化率；MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培養基愈傷組織誘導率最高，為90%；接種后先暗培養25d，然后在光照下進行培養的外植體，其愈傷組織比接種后直接在光照條件下培養的外植體要出現的快且生長狀況較好。

關鍵詞 瞿麥；組織培養；消毒時間；激素配比濃度；光照

中圖分類號：S567.239 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.068

瞿麥（Dianthus superbus L）為石竹科石竹屬多年生草本植物，近年來，由于其花觀賞價值高，抗性強，開始應用在園林綠化上。瞿麥的繁殖方式多樣，但傳統繁殖技術很難在較短的時間內獲得大量性狀整齊的優質種苗[1]。本試驗通過對瞿麥組培材料進行不同的滅菌時間，激素配比，光照條件的處理，選擇出最佳的培養條件，促進優良變異品種的開發利用。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料為太谷縣窯子頭的野生瞿麥，2014年引種到山西農業大學試驗田。

1.2 方法

在組織培養過程中，外植體的消毒、培養基激素的配比和接種后的培養條件對組培成功都有很大的影響[2-3]。這些因素會導致外植體生理生化狀態和愈傷組織的改變[4]。

1.2.1 消毒處理

取幼嫩的瞿麥葉片作為外植體，用75%的酒精浸泡30s后，再用濃度為0.5%的NaClO分別浸泡12、15、18min，接種后進行培養并統計外植體的污染率、褐化率。

污染率=（污染的葉片數/接種的葉片數）×100%

褐化率=（褐化的葉片數/接種的葉片數）×100%[5-6]。

1.2.2 激素處理

選用MS（4、74g/L）為愈傷誘導培養基，在愈傷誘導培養基上進行激素NAA和6-BA組合的雙因素完全隨機試驗設計（見表1）。觀察愈傷組織的誘導情況并記錄愈傷組織生長狀況。

愈傷組織誘導率=（出愈苗數/接種數）×100%[7-9]

1.2.3 光照處理

分別對培養基（MS+1.0mg/L 6·BA+0.4mg/LNAA）進行光照處理和黑暗處理：Ⅰ、接種后直接進行光照；Ⅱ、接種后進行黑暗處理，25d后給予光照。

表1 培養基激素濃度配比

處理組 激素 濃度/（mg/L） 激素 濃度/（mg/L）

1 6-BA 0 NAA 0

2 6-BA 0 NAA 0.2

③ 6-BA 0 NAA 0.4

④ 6-BA 0 NAA 0.6

⑤ 6-BA 0.5 NAA 0

⑥ 6-BA 0.5 NAA 0.2

⑦ 6-BA 0.5 NAA 0.4

⑧ 6-BA 0.5 NAA 0.6

⑨ 6-BA 1.0 NAA 0

⑩ 6-BA 1.0 NAA 0.2

? 6-BA 1.0 NAA 0.4

? 6-BA 1.0 NAA 0.6

? 6-BA 1.5 NAA 0

? 6-BA 1.5 NAA 0.2

? 6-BA 1.5 NAA 0.4

? 6-BA 1.5 NAA 0.6

2 結果與分析

2.1 消毒時間對瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

由表2可知，適當的延長消毒時間可以在一定程度上降低外植體的污染率，外植體消毒15min比12min污染率下降了16.67%。褐化率和消毒時間是呈正相關的，消毒18min比消毒15min褐化率增長了32.22%。由此可見，用0.5%的NaClO浸泡瞿麥葉片15min消毒效果最好。

表2 不同消毒時間對瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

時間/min 污染率/% 褐化率/%

12 36.67 17.78

15 20.00 21.11

18 16.67 53.33

2.2 不同激素配比對瞿麥葉片愈傷組織誘導率的影響

愈傷組織體積大，結構疏松且顏色淺的為生長良好；體積小，結構緊密且顏色深的為生長差[7]。本試驗中，誘導5d后開始產生愈傷組織，10d后愈傷組織明顯。由表3知，6-BA和NAA對愈傷組織的生長都起著促進作用，1.0mg/L6-BA和0.4mg/L NAA處理下，誘導率最高，愈傷組織的生長狀況最佳。當NAA濃度為0.4mg/L，葉片愈傷組織誘導率較其他處理高，由此可見，NAA對瞿麥葉片愈傷組織的誘導起主要作用。

表3 不同激素配比對瞿麥葉片愈傷組織誘導率的影響

處理組 誘導率/% 愈傷組織生長情況

16.67 差

30.00 差

③ 73.33 差

④ 60.00 差

⑤ 63.33 差

⑥ 53.33 良好

⑦ 86.67 好

⑧ 56.67 良好

⑨ 43.33 差

⑩ 76.67 良好

? 90.00 好

? 70.00 好

? 50.00 差

? 46.67 良好

? 80.00 好

? 83.33 好

2.3 不同光照處理對瞿麥葉片愈傷組織誘導率的影響

光照對植物的細胞、組織、器官的生長和分化有著至關重要的作用，光照下愈傷組織極易分化形成維管組織而不能形成大量的愈傷組織，避光培養條件下有利于愈傷組織的積累[10-11]。由表4可知，處理Ⅱ的愈傷組織出現時間、生長狀況均優于處理Ⅰ，且愈傷組織誘導率明顯高于處理Ⅰ。

表4 不同光照條件對瞿麥葉片愈傷組織誘導率的影響

光照處理 誘導率/% 愈傷生長狀況

Ⅰ 72 愈傷出現慢，生長狀況較差

Ⅱ 87 愈傷出現快，生長狀況好

3 討論

外植體消毒時間長短，直接影響到外植體的成活率[12]。本試驗中，采用75%酒精消毒30 s，0.5%的NaClO消毒

15 min，可以達到較好的消毒效果；當0.5%的NaClO處理時間延長，會降低外植體的活性，導致死亡率升高。激素的配比對愈傷組織的誘導有著明顯的影響[13]。本試驗中，0.4mg/LNAA和1.0mg/L6-BA條件下，愈傷組織的誘導率最高。由此可見，NAA和6-BA的濃度不宜過高或過低。

黑暗條件對愈傷組織的產生有明顯促進作用[10]，本試驗中，外植體先在黑暗條件下培養25d后再給予光照，愈傷組織的誘導率和生長狀況都優于直接在光照條件下進行培養。

參考文獻

[1]李欣，姜忠君.賞藥兼用瞿麥栽培技術[J].黑龍江農業科學，2007（1）：103.

[2]韋三立.花卉組織培養[M].北京：中國林業出版社，2001.

[3]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養技術[M].北京：中國林業出版社，1991.

[4]曹孜義，劉國民.試用植物組織培養技術教程[M].蘭州：甘肅科學技術出版社，1996.

[5]劉慶昌，吳國良.植物細胞組織培養教程[M].北京：中國農業大學出版社，2003.

[6]加古舜治.園藝植物的器官與組織培養[M].鄭州：河南科技出版社，1987.

[7]奚元齡，顏昌敬.植物細胞培養手冊[M].北京：中國農業出版社，1992.

[8]裘文達.園藝植物組織培養[M].上海：上海技術出版社，1986.

[9]謝從華.柳俊.植物細胞工程[M].北京：高等教育出版社，2004.

[10]倪德祥.光在植物培養中的調控作用[J].自然雜志，1986，9（3）：35-40.

[11]文濤，梁莉，曾楊，等.不同光照強度對虎杖愈傷組織的影響[J].中國中藥雜志，2007，32（13）：1277-1280.

[12]魯旭東.植物組織培養中褐變的發生與防止[J].農業與技術，1999，19（4）：9.

[13]韓得元.植物生長調節劑原理及應用[M].北京：科學技術出版社，1997.

（責任編輯：劉昀）