特定蛋白分析儀測定尿微量蛋白的性能分析

朱懿

摘要：目的 微量白蛋白尿是指在尿中出現微量白蛋白。白蛋白是一種血液中的正常蛋白質，但在生理條件下尿液中僅出現極少量白蛋白。微量白蛋白尿反映腎臟異常滲漏蛋白質。尿微量白蛋白排出量的增加是疾病早期的改變，對疾病的早期診斷，早期治療有重要的參考價值和臨床意義[1]。大量的臨床研究表明，尿微量白蛋白是預測糖尿病、高血壓、心血管疾病、血管損傷的敏感指標[2]。目前國際上十分重視尿微量白蛋白的測定，認為這項指標對早期治療原發病、分析病程進展、評價相關危險因素具有重要意義。我院原先使用日立7060生化儀測定尿微量蛋白，現為了節約成本引進NEPHSTAR特定蛋白分析儀，對此在重復性、精密度、污染評估等方面的性能進行分析 ，研究其對臨床的參考價值。方法 采用隨機抽樣的方法，取中、高水平兩組，各獲得20例數據，對其日間、批內的均值、標準差、變異系數進行計算，從而對得到的數據進行性能分析。1/4允許誤差范圍為批內不精密度判斷限，1/3允許誤差為天間不精密度判斷限。小于或等于判斷限的，檢測系統的不精密度屬可接受；大于判斷限的表示不精密度不符合要求。并與日立7060生化儀進行對比，通過進行t檢驗，了解其可比性。設計干擾試驗、線性試驗，測定檢出限。結果 通過對抽樣的兩組中水平和高水平的尿微量蛋白的20組數據進行計算，求得中、高水平批內、天間的均數、標準差、變異系數。允許誤差EA為10%，通過統計學公式求得中水平：批內1.48%<2.5%；天間2.46%<3.3%；高水平：批內2.17%<2.5%；天間2.5%<3.3%。數據都小于判斷限，即檢測系統的不精密度屬于可接受范圍。而于日立7060生化儀的對比，通過計算t檢驗可知，兩者間數值的差異無統計學意義（P>0.05）。在10～2000 mg/L范圍內的線性良好。檢出限1.48 mg/L。甲苯濃度在10 mg/L以下對該法測量無顯著干擾。結論 通過對NEPHSTAR特定蛋白分析儀的性能評估。從重復性、精密度、線性評估、干擾實驗等各方面及與日立7060生化儀的對比等方面進行了統計學的比較，得知其性能的穩定結果的可靠，因此對測得的尿微量蛋白數據質量有所保證。

關鍵詞：尿微量白蛋白；特定蛋白分析儀；散射比濁

尿蛋白測定的方法眾多，如化學法、染料結合法和比濁法等。雙縮脲法靈敏度低；染料結合法對各種蛋白結合率不同，結果差異大；而比濁法操作簡單[4]，應用散射比濁法在NEPHSTAR特定蛋白分析儀上測定尿微量白蛋白，并分析其性能。

1 資料與方法

1.1儀器 NEPHSTAR 特定蛋白分析儀。

1.2試劑及其他材料 mALB抗血清，mALB緩沖液，移液器，攪拌子等。

1.3標本 選擇本院內、外科送檢患者新鮮尿液標本。如見明顯渾濁必須離心后才可測定。隨機抽取40例標本分別用特定蛋白分析儀及日立7060在同一天測定所有結果總和的均數。并從中選擇中、高水平的數據做精密度試驗。另取一批做干擾試驗及求檢出限。

1.4方法 用散射比濁法，嚴格按照說明書，嚴謹規范操作。

2 結果

2.1線性試驗 用尿蛋白含量為10 mg/L的患者低值尿液對尿蛋白含量為2000mg/L的高值尿液分別進行1，1.5，2，2.5，3倍比例稀釋，然后用散射比濁法進行測定，重復測定4次取均值，結果線性方程為Y=0.957X+5.59，相關系數（r）=0.999，在此范圍內線性良好。

2.2精密度評價 選取送檢患者中、高水平的新鮮尿液，分別做批內、天間測定，測定所獲得20組數據，見表1。

通過統計學公式分別計算其均值、標準差、變異系數，并通過10%的允許誤差，判斷其指標，見表2。

2.3極限評估 NEPHSTAR 特定蛋白分析儀 的生物檢測限為4.9 mg/L，并對20份試劑空白進行測定，計算出其最低檢出限1.48 mg/L。

2.4與日立7060生化儀的比較 本法同日立7060生化儀同時測定40份尿液標本，χ2分別為109.3和102.6，通過配對t檢驗，t=1.5，P>0.05，兩者無顯著差異。

2.5干擾試驗 在一系列不同濃度的甲苯溶液中以1/10體積摻入蛋白含量為150 mg/L和750 mg/L的尿液標本中，用散射比濁法測定摻入前后的尿蛋白量，甲苯在10 ml/l以下對該試驗無顯著干擾。

濁度對該法的干擾，如呈明顯渾濁狀態，則數據無法獲得，機器顯示空白太高，必須離心后重新測定才能獲得數據。

3 討論

3.1尿微量蛋白與疾病，見表3。

3.2尿微量蛋白測定的注意事項 試劑盒在未開啟前應存于2℃～8℃，在試劑盒標出的有效期前使用。不要冷凍。緩沖液在使用前應平衡至室溫（18℃～26℃）。開啟后，應擰緊瓶蓋，抗血清和質控存于2℃～8℃，緩沖液存于室溫。

使用新鮮尿液，尿液在2℃～8℃儲存最長不超過72 h，冷凍在-20℃或更低溫度則可儲存更長時間。凍融尿液不超過1次。

微生物污染、渾濁的樣品都不適合用散射比濁檢測[5]，除非經過離心或其他方法處理過。

樣品的濃度>1900 mg/L會出現抗原過剩的情況，此時測量值可能會意想不到的低，從而會給出誤導的結果。如果懷疑有這種情況則要進一步稀釋樣品至1/11后重新測量（400 μl樣品稀釋液+40 μl樣品）。

4 結論

通過對NEPHSTAR特定蛋白分析儀測定尿微量蛋白獲得的數據，從其各方面對其性能進行分析。了解到中、高水平的批內、天間的不精密度均在允許范圍，符合要求。線性實驗、干擾實驗、及與日立7060生化儀的對比實驗均有價值。所以國塞特定蛋白分析儀在測定尿微量蛋白方面具有較好的重復性、精密度、穩定性，并且價格低廉。

參考文獻：

[1]許文芳，柳紅梅，等.應用磺基水楊酸-硫酸鈉比濁法在自動分儀上測定尿蛋白[J].檢驗醫學，2007，22：23-24.

[2]魏明，張德，李繼廣，等.尿微量白蛋白檢測的臨床意義及探討[J].放射免疫學雜志，2008，21：437-438.

[3]謝科杰，王凱，張麗紅，等.特種蛋白室內質控品制備及應用評價[J].臨床醫學，2009，24：381-383.

[4]陳增強，張雪青，陳筱菲，等.兩種方法檢測腦脊液蛋白質的比較[J].臨床檢驗雜志，2006，24：209-210

[5]李學旺，葉文玲.尿液蛋白質的檢測及臨床評價[J].中國實用內科雜志，2002，22（1）：17-19.

編輯/肖慧