UHRF1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

張偉濤，謝麗

(1肥城礦業(yè)中心醫(yī)院，山東肥城 271608；2山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)

UHRF1在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

張偉濤1，謝麗2

(1肥城礦業(yè)中心醫(yī)院，山東肥城 271608；2山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)

目的 觀(guān)察泛素樣含PHD和環(huán)指域1(UHRF1)在喉鱗狀細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱(chēng)喉鱗癌)組織中的表達(dá)情況，并探討其意義。方法 選取82例擇期行手術(shù)治療的喉鱗癌患者，術(shù)中均留取喉鱗癌組織和癌旁正常組織，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)喉鱗癌和癌旁正常組織中UHRF1 mRNA表達(dá)。以喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量的P25作為界值，將患者分為低表達(dá)組和高表達(dá)組。采用Kaplan-Meier法對(duì)喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量對(duì)生存時(shí)間的影響進(jìn)行分析，采用多因素Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型對(duì)影響喉鱗癌患者預(yù)后的相關(guān)因素進(jìn)行分析。結(jié)果 喉鱗癌、癌旁正常組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.85±0.16、1.17±0.13，兩者比較，P<0.01。喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與病理學(xué)分級(jí)、T分期、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。低表達(dá)組23例，高表達(dá)組59例，兩組患者中位生存時(shí)間分別為44、32個(gè)月，兩組比較，P<0.05。Cox回歸模型結(jié)果顯示，UHRF1 mRNA表達(dá)水平是喉鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(RR=2.035，95%CI：1.024～4.473，P=0.035)。結(jié)論 UHRF1 mRNA在喉鱗癌組織中高表達(dá)，且與腫瘤惡性行為及患者預(yù)后有關(guān)。

喉鱗狀細(xì)胞癌；泛素樣含PHD和環(huán)指域1基因；腫瘤預(yù)后

中發(fā)揮重要作用[5]。研究[6]表明，UHRF1參與調(diào)控多種腫瘤發(fā)生及進(jìn)展。本研究擬對(duì)UHRF1在喉鱗癌組織中的表達(dá)進(jìn)行分析，探討其在喉鱗癌發(fā)生中的作用及對(duì)預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年3月～2011年4月在我院住院擇期行手術(shù)治療的喉鱗癌患者82例，其中男71例、女11例，年齡43～74(57.5±9.6)歲，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，且術(shù)前均未接受放化療治療。腫瘤發(fā)生部位：57例為聲門(mén)型，25例為非聲門(mén)型；病理學(xué)分級(jí)：中低分化33例，高分化49例；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期45例，Ⅲ、Ⅳ期37例。28例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但均未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。采用單純手術(shù)治療36例、綜合治療46例，采用全喉切除術(shù)55例、部分喉切除術(shù)27例，頸部單側(cè)清掃54例、雙側(cè)清掃28例，術(shù)后輔助放療69例。術(shù)中均留取喉鱗癌組織和癌旁正常組織(距離腫瘤>2 cm的周邊組織)，迅速保存于-80 ℃冰箱中備檢。

1.2 喉鱗癌和癌旁正常組織中UHRF1基因檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。取喉鱗癌和癌旁正常組織，研磨后加入細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂解，用TRIzol總RNA提取試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)對(duì)總RNA進(jìn)行提取，用紫外分光光度計(jì)對(duì)總RNA純度進(jìn)行檢測(cè)，取A260/A280≥1.80樣品作為合格樣品完成后續(xù)操作。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Promega公司)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為模板單鏈cDNA，以cDNA為模板，用PCR試劑盒(美國(guó)Promega公司)進(jìn)行PCR。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司。UHRF1及內(nèi)參引物序列均由上海生工公司設(shè)計(jì)合成，引物序列：UHRF1引物上游為5′-CGTGGTCCAGATGAACTCC-3′，下游為5′-CACGTTGGCGTAGAGTTCC-3′；內(nèi)參β-actin引物上游為5′-TGGCACCACACCTTCTACA-3′，下游為5′-AGCACAGCCTGGATAGCA-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 15 min，95 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 s，40 ℃ 60 s，連續(xù)進(jìn)行40次循環(huán)。每個(gè)樣品均設(shè)置3個(gè)平行反應(yīng)復(fù)孔。應(yīng)用2-ΔΔCt法獲得喉鱗癌和癌旁正常組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。以喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量的P25作為界值，將患者分為低表達(dá)組和高表達(dá)組。

1.3 病例隨訪(fǎng)方法 所有患者隨訪(fǎng)至2016年4月30日，隨訪(fǎng)時(shí)間8～96個(gè)月、平均52.7個(gè)月，隨訪(fǎng)中未出現(xiàn)失訪(fǎng)病例，記錄患者生存情況。

2 結(jié)果

2.1 喉鱗癌和癌旁正常組織中UHRF1 mRNA表達(dá)比較 喉鱗癌、癌旁正常組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.85±0.16、1.17±0.13，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=28.795，P<0.01)。

2.2 喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。喉鱗癌組織中UHRF1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與性別、年齡、發(fā)生部位無(wú)關(guān)(P均>0.05)，而與病理學(xué)分級(jí)、T分期、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。

表1 UHRF1 mRNA在喉鱗癌組織中表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系±s)

2.3 喉鱗癌組織中UHRF1基因表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響 低表達(dá)組23例，高表達(dá)組59例，Kaplan-Meier生存分析顯示，低表達(dá)組患者中位生存時(shí)間44個(gè)月，高表達(dá)組患者中位生存時(shí)間32個(gè)月，Log-Rank檢驗(yàn)顯示，兩組患者生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.827，P=0.028)。建立Cox回歸模型進(jìn)行多因素分析，模型中包括性別、年齡、發(fā)生部位、病理學(xué)分級(jí)、T分期、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、治療方式、手術(shù)方式、頸部清掃范圍、術(shù)后輔助放療和UHRF1基因表達(dá)水平12個(gè)協(xié)變量。結(jié)果顯示，T分期、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和UHRF1 mRNA表達(dá)水平是喉鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<均0.05)，詳見(jiàn)表2。

表2 喉鱗癌預(yù)后的影響因素多因素回歸分析

3 討論

喉鱗癌發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，涉及多因素、多步驟、多環(huán)節(jié)，是多種因素共同作用的結(jié)果。UHRF1作為與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)的核蛋白基因[7]，與多種惡性腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[8～10]，并且參與調(diào)控腫瘤放化療敏感性[11]。本研究中UHRF1基因在喉鱗癌組織中呈高表達(dá)，提示UHRF1基因可能與喉鱗癌發(fā)生有關(guān)。目前研究表明，UHRF1對(duì)惡性腫瘤多種生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。Yan等[12]研究指出，UHRF1在調(diào)控細(xì)胞周期時(shí)，可通過(guò)與甲基化RBI基因啟動(dòng)子結(jié)合而促進(jìn)細(xì)胞從G1期向S期進(jìn)展。周林等[13]通過(guò)下調(diào)UHRF1表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞體內(nèi)外轉(zhuǎn)移能力。楊從容等[14]采用RNA干擾抑制UHRF1基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)特異性抑制UHRF1表達(dá)可增強(qiáng)食管癌細(xì)胞系對(duì)放射的敏感性。在對(duì)臨床病理資料與UHRF1基因表達(dá)相關(guān)性分析中，本研究結(jié)果與其他研究[14～17]在結(jié)腸癌、胃癌、肝細(xì)胞肝癌中的報(bào)道類(lèi)似，均發(fā)現(xiàn)UHRF1基因表達(dá)在中低分化、高T分期、臨床晚期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中呈高表達(dá)，但均未發(fā)現(xiàn)UHRF1基因表達(dá)與性別、年齡、發(fā)生部位有關(guān)，提示UHRF1可能在喉鱗癌發(fā)生及惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。

吳李飛等[18]指出，UHRF1可作為結(jié)直腸癌患者根治術(shù)后判定患者預(yù)后的分子指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，UHRF1基因表達(dá)水平與喉鱗癌患者預(yù)后有關(guān)，腫瘤組織中該基因表達(dá)水平越高，患者預(yù)后越不佳，是影響喉鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，提示喉鱗癌腫瘤組織中UHRF1基因高表達(dá)水平可作為評(píng)估患者預(yù)后的輔助參考指標(biāo)。這些結(jié)果均提示UHRF1基因表達(dá)與喉鱗癌患者預(yù)后呈顯著負(fù)相關(guān)，可能為一種評(píng)估喉鱗癌患者預(yù)后有價(jià)值的標(biāo)志物。但需要指出的是，在傳統(tǒng)的判定臨床預(yù)后的變量中，本研究結(jié)果中只有T分期、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)預(yù)后判定有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而發(fā)生部位、病理學(xué)分級(jí)、治療方式、手術(shù)方式、頸部清掃范圍、術(shù)后輔助放療等預(yù)后變量并未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與樣本構(gòu)成有關(guān)。因此我們認(rèn)為，UHRF1 mRNA在喉鱗癌組織中高表達(dá)，且與腫瘤惡性行為及患者預(yù)后有關(guān)。

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(收稿日期：2016-08-01)

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81372888)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.02.023

R739.65

B

1002-266X(2017)02-0069-03

2016-09-13)

喉鱗狀細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱(chēng)喉鱗癌)作為頭頸部好發(fā)惡性腫瘤，占耳鼻咽喉惡性腫瘤的8%～36%[1]，是呼吸道第二大高發(fā)腫瘤，具有較高病死率[2]。近年來(lái)，隨著診療技術(shù)的進(jìn)步，患者預(yù)后得到很大改善，5年生存率不斷提高，但依然存在復(fù)發(fā)率高、轉(zhuǎn)移率

高、對(duì)放療治療不敏感等問(wèn)題，不利于患者預(yù)后[3,4]。但其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，因此，積極探討喉鱗癌發(fā)生機(jī)制及特異性臨床指標(biāo)，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)腫瘤、指導(dǎo)治療及改善預(yù)后具有重要意義。泛素樣含PHD和環(huán)指域1(UHRF1)基因是新近發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)的核蛋白基因，在調(diào)控DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過(guò)程