P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盤絨毛水腫性病變中的表達(dá)及其意義*

李昌秀,楊達(dá)榮,徐紅梅,楊 柳,劉俊玲，吳時(shí)軍,羅治彬

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

·經(jīng)驗(yàn)交流· doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.030

P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盤絨毛水腫性病變中的表達(dá)及其意義*

李昌秀1,楊達(dá)榮1,徐紅梅1,楊 柳1,劉俊玲1，吳時(shí)軍1,羅治彬2

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

[摘要] 目的 研究P57、P53、Her-2及Ki-67在流產(chǎn)絨毛水腫(HA)、部分性葡萄胎(PHM)及完全性葡萄胎(CHM)中的表達(dá)，探討其在水泡狀胎塊發(fā)生、發(fā)展中的作用，為葡萄胎的早期診斷及鑒別診斷提供理論依據(jù)。方法 采用免疫組織化學(xué)(EnVision法)分別檢測(cè)P57、P53、Her-2及Ki-67在30例正常絨毛(NP)、30例HA、30例PHM及30例CHM中的表達(dá)。結(jié)果 P57在NP組、HA組、PHM組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(dá)(P<0.01)；P53在PHM組(53.33%)中表達(dá)明顯高于在NP 組(16.66%)和HA組(20.00%)中的表達(dá)，而明顯低于在CHM組(80.00%)中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Her-2在CHM組中的表達(dá)為36.66%，明顯高于在NP組(10.00)和HA組(13.33%)中的表達(dá)(P<0.05),但是Her-2在PHM組(23.33%)與CHM組中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；PHM組和CHM組的Ki-67增殖指數(shù)分別為(48.03±18.77)%和(87.79±10.50)%，均高于HA組[(33.43±17.17)%]及NP組[(34.46±16.15)%]，P<0.01，而CHM組的Ki-67顯著高于PHM組(P<0.01)。結(jié)論 P57缺失而P53及Ki-67高表達(dá)可診斷為CHM；P57陽(yáng)性而P53及Ki-67增殖指數(shù)均缺失或弱表達(dá)可診斷為HA。其他情況下均需要進(jìn)一步做分子基因分型檢測(cè)；Her-2的表達(dá)對(duì)HA、PHM及CHM的鑒別意義不大。

水泡狀胎塊；流產(chǎn)水腫絨毛；P53；P57；Ki-67；Her-2

胎盤絨毛水腫性病變是一組以外觀呈透亮水泡狀的胎盤絨毛病變，臨床工作中常見包括完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole,CHM)、部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole,PHM) 及流產(chǎn)絨毛水腫 (hydropic abortuses,HA)。肉眼標(biāo)本、組織形態(tài)學(xué)及臨床表現(xiàn)的不同常用于胎盤絨毛水腫性病變的診斷及鑒別，但是在病變?cè)缙冢３Ｒ蛉庋蹣?biāo)本、鏡下組織及臨床特征不典型而難以分型，甚至與HA鑒別困難。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道了P57、P53和Ki-67在水泡狀胎塊分型與HA鑒別中的價(jià)值，但報(bào)道結(jié)果并不完全一致[1-3]。而且Her-2在不同類型的絨毛水腫性病變中的表達(dá)及意義研究甚少。本研究通過免疫組織化學(xué)方法觀察P57、P53、Her-2和Ki-67在不同的絨毛水腫性病變中的表達(dá)情況，探討聯(lián)合4個(gè)指標(biāo)對(duì)絨毛水腫性病變鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010-2015年合川區(qū)人民醫(yī)院病理科經(jīng)病理高級(jí)醫(yī)師診斷為HA、CHM和PHM的患者各30例作為研究對(duì)象。選取正常的絨毛組織(NP)30例作對(duì)照。所有存檔病例均經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋。

1.2 方法 P57、P53、Her-2及Ki-67單克隆抗體、EnVision試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液均購(gòu)自福建邁新生物工程有限公司。所有組織經(jīng)4 μm連續(xù)石蠟切片，嚴(yán)格按照EnVision檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書的步驟操作。

1.3 結(jié)果的判定 參照許良中等[3]的資料，綜合考慮切片中陽(yáng)性細(xì)胞占所觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比和陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度兩項(xiàng)指標(biāo)，半定量判斷結(jié)果。P57、P53的觀察，先在低倍鏡下選取最強(qiáng)著色區(qū)，然后選10個(gè)高倍鏡視野(×400)，分別記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，其顏色深淺評(píng)分：細(xì)胞核上無(wú)棕黃色顆粒為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。染色細(xì)胞所占百分比打分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分、1%～10%為1分、11%～50%為2分、≥51%為3分。兩項(xiàng)乘積得分大于或等于3分定為陽(yáng)性。Her-2陽(yáng)性判斷方法：根據(jù)細(xì)胞膜有無(wú)顯色或強(qiáng)弱。0：完全未著色或小于10%細(xì)胞膜著色；(+)：≥10%呈微弱、不完整細(xì)胞膜著色；(++)：>10%呈弱-中度完整細(xì)胞膜著色；(+++)：>10%呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜著色。“0”為陰性，(+～+++)為陽(yáng)性[4]。Ki-67只計(jì)數(shù)絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞，Ki-67增殖指數(shù)=Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 P57在各組中的表達(dá) P57呈細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)部位為滋養(yǎng)細(xì)胞、絨毛間質(zhì)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞，見圖1、2。P57在NP、HA和PHM組分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(dá)(χ2=52.26、52.26、48.65，P<0.01)。P57在PHM組中的表達(dá)低于HA組和NP組中的表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.00、0.00，P>0.05)，見表1。

2.2 P53在各組中的表達(dá) P53陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，見圖3、4。P53在CHM組中表達(dá)為80.00%，明顯高于NP組(16.66%)、HA組(20.00%)和PHM組(53.33%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.09、21.40、4.80，P<0.05)。PHM組明顯高于HA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.71，P<0.01)。而HA組和NP組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.11，P>0.05)。見表1。

圖1 P57在PHM組織中的表達(dá)(SP×400)

圖2 P57在CHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖3 P53在PHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖4 P53在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

2.3 Her-2在各組中的表達(dá) Her-2陽(yáng)性定位于絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞膜，為棕黃色或淺黃色顆粒，見圖5、6。Her-2在CHM組中的表達(dá)為36.66%，明顯高于NP組(10.00)和HA組(13.33%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.96、4.35,P<0.05)。而PHM組(23.33%)與CHM、HA組及NP組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.26、1.00、1.92，P>0.05)，見表1。

圖5 Her-2在PHM中的表達(dá)(SP×200)

圖6 Her-2在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

圖7 Ki-67在PHM組織中的表達(dá)(SP×200)

圖8 Ki-67在CHM組織中的表達(dá)(SP×400)

2.4 Ki-67在各組中的表達(dá) Ki-67陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，見圖7、8。在PHM組和CHM組Ki-67增殖指數(shù)分別與HA組及NP組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.32、3.34、14.38、15.16，P<0.01)，而CHM組也明顯高于PHM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.81，P<0.01)，見表2。

表1 P57、P53及Her-2在各組標(biāo)本組織中的表達(dá)

表2 Ki-67在各組標(biāo)本組織中的表達(dá)

3 討 論

HA、PHM、CHM三者有不同的妊娠結(jié)局和預(yù)后，準(zhǔn)確的診斷直接影響患者的治療方案選擇和預(yù)后判斷。而三者外觀均是呈葡萄狀的水泡樣組織，特別是病變?cè)缙冢诮M織學(xué)上，滋養(yǎng)細(xì)胞增生及HA均不夠典型時(shí)，如果單純從形態(tài)學(xué)診斷就容易造成誤診或漏診，而影響患者的治療和預(yù)后。所以，尋找一種簡(jiǎn)單而可靠的診斷指標(biāo)，對(duì)于胎盤絨毛水腫性病變的鑒別診斷和分型都非常重要。

P57定位于染色體11p15.5，是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子和腫瘤抑制基因，抑制細(xì)胞增殖和腫瘤形成。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)有關(guān)P57基因在水泡狀胎塊中表達(dá)及鑒別診斷意義的研究越來(lái)越多，發(fā)現(xiàn)P57基因又是親源印跡基因，系母源性等位基因表達(dá)，這對(duì)鑒別PHM和CHM起到非常重要的作用，并提出P57可以用于形態(tài)學(xué)上難以客觀區(qū)別的CHM和PHM的鑒別[5]。由于CHM是雄性二倍體，PHM是雌雄異型三倍體，流產(chǎn)水腫是雙親二倍體，所以,P57表達(dá)缺失的CHM容易從P57陽(yáng)性的PHM和HA中別鑒別出來(lái)。陳云新等[6]的研究顯示，P57陽(yáng)性率在PHM為100%，CHM不表達(dá)。而本研究發(fā)現(xiàn)，P57在CHM組中的陽(yáng)性率為3.33%，PHM組為93.33%，HA組為96.66%，CHM組30例患者中有1例P57陽(yáng)性，這與McConnell等[7]的研究一致。McConnell等[7]同時(shí)用P57免疫組織化學(xué)和分子基因型檢測(cè)技術(shù)分析水泡狀胎塊標(biāo)本時(shí)，發(fā)現(xiàn)1例形態(tài)典型的CHM彌漫表達(dá)P57。而且通過短串聯(lián)重復(fù)序列的分子基因型檢測(cè)和單個(gè)核苷酸多態(tài)性陣列的全基因組拷貝數(shù)分析證實(shí)了該例的確是雄性二倍體，卻保留有母系6號(hào)和11號(hào)染色體的拷貝。正是由于母系6號(hào)和11號(hào)染色體的存在，所以異常表達(dá)P57。本研究的P57陽(yáng)性病例可能是保留著母系6號(hào)和11號(hào)染色體的CHM，也有可能是P57假陽(yáng)性的CHM，需進(jìn)一步做分子基因型檢測(cè)以明確診斷。

P53基因是抑癌基因，具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞衰老和凋亡的作用。突變型P53在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)，而且與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。而Ki-67是細(xì)胞增殖的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo),其陽(yáng)性表達(dá)率常作為評(píng)價(jià)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的重要指標(biāo)。近年來(lái)，P53和Ki-67也常常用于鑒別胎盤絨毛水腫性病變中[8-9]。李軍紅等[10]研究發(fā)現(xiàn)P53的表達(dá)及Ki-67在葡萄胎(HM)組中的表達(dá)高于HA組，對(duì)鑒別PHM和HA有重要價(jià)值。本研究采用免疫組織化學(xué)也發(fā)現(xiàn)突變型P53在CHM組(80.00%)和PHM組(53.33%)中的表達(dá)均高于HA組(20.00%)和NP組(16.66%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這提示CHM和PHM中P53蛋白的高表達(dá)與抑癌基因P53的突變有關(guān)， P53蛋白的檢測(cè)有助于水泡狀胎塊與HA的鑒別。同時(shí)，筆者也發(fā)現(xiàn)PHM組(48.03±18.77)%和CHM組(87.79±10.50)%的Ki-67增殖指數(shù)也都高于HA組(33.43±17.17)%及NP組(34.46±16.15)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。該結(jié)果與Khooei等[11]研究結(jié)果一致。但是Khooei等[11]進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)，雖然Ki-67在HM和HA中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是Ki-67仍不能單獨(dú)用于鑒別HM與HA，因?yàn)镵i-67在各組的表達(dá)陽(yáng)性程度上存在著相當(dāng)大的重疊。所以，筆者認(rèn)為聯(lián)合P53和Ki-67增殖指數(shù)可較為準(zhǔn)確地反映HM和HA的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞增殖活性，可作為評(píng)估病變是HM還是HA的重要參考指標(biāo)。

Her-2定位于17q12,是表皮生長(zhǎng)因子受體家族的成員之一，在很多惡性腫瘤組織中表達(dá)并用作監(jiān)測(cè)預(yù)后的標(biāo)記物。Fulop等[12]對(duì)16例PHM、25例CHM和11例HA進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),Her-2表達(dá)于CHM的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞，且明顯強(qiáng)于PHM和HA，這對(duì)HM的分型診斷及惡變預(yù)后起到非常重要的作用。同樣，Yazaki-Sun等[13]對(duì)已經(jīng)發(fā)展為胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的35例HM和自然愈合的32例HM行Her-2和P53的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩者在惡變的HM中強(qiáng)表達(dá)，提示Her-2和P53對(duì)HM惡變及預(yù)后判斷起著非常重要的作用。但Menczer等[14]用免疫組織化學(xué)染色對(duì)23例CHM和10例PHM進(jìn)行Her-2檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)6例陽(yáng)性(CHM和PHM各3例)，而且Her-2在后來(lái)進(jìn)展為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的HM中的表達(dá)強(qiáng)于未進(jìn)展為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的HM中的表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而本研究結(jié)果顯示，Her-2在CHM組中的表達(dá)高于NP和HA組(P<0.05),這可能提示滋養(yǎng)細(xì)胞有增生。但Her-2在CHM組和PHM組中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),這對(duì)診斷CHM組和PHM組無(wú)明顯鑒別作用。

HM和HA的早期診斷及鑒別診斷對(duì)臨床的治療及疾病的預(yù)后都非常重要。聯(lián)合檢測(cè)P57、P53及Ki-67增殖指數(shù)有助于HM的分型和HA的鑒別診斷。P57缺失而P53及Ki-67高表達(dá)可診斷為CHM。而P57陽(yáng)性而P53及Ki-67均缺失或弱表達(dá)可診斷為HA。當(dāng)P57陽(yáng)性而P53及Ki-67高表達(dá)時(shí)可能為PHM，但還需進(jìn)一步做分子基因型檢測(cè)，以排除母系6號(hào)和11號(hào)染色體陽(yáng)性的CHM的可能。Her-2陽(yáng)性對(duì)CHM和PHM的鑒別意義不大，但Her-2聯(lián)合P53和Ki-67的表達(dá)情況可以作為預(yù)測(cè)HM惡變的參考指標(biāo)。Her-2陽(yáng)性可能提示HM的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞有增生，但其如何參與HM的絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞增生，如何導(dǎo)致HM惡變的機(jī)制和意義還需收集大量妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的病例進(jìn)一步研究。

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重慶市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)學(xué)科研計(jì)劃項(xiàng)目(20143054)。 作者簡(jiǎn)介：李昌秀(1979-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)病理學(xué)研究。△

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