317例慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與臨床的關系

吳家箴，黃仁剛，楊興祥，劉 翔，江 南，林健梅

(四川省人民醫院感染科，成都 610072)

論著·臨床研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.012

317例慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與臨床的關系

吳家箴，黃仁剛，楊興祥△，劉 翔，江 南，林健梅

(四川省人民醫院感染科，成都 610072)

[摘要] 目的 分析血清HBeAg陰性和陽性的慢性乙型肝炎(CHB)患者肝組織內的HBsAg、HBcAg表達強度與臨床的關系。方法 317例CHB患者肝穿刺標本分成血清HBeAg陰性組和HBeAg陽性組兩組，分析兩組肝組織內HBsAg、HBcAg的表達強度及其與年齡、性別、血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、血清HBV DNA載量、肝臟炎癥活動度分級和纖維化分期的關系。結果 HBeAg陰性組患者的年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化程度大于HBeAg陽性組患者；但血清HBV DNA載量低于HBeAg陽性組患者(均P<0.05)。肝組織內HBsAg表達強度與年齡、ALT、肝臟炎癥程度和纖維化程度均無相關性(P>0.05)。血清HBeAg轉陰后，肝組織內HBcAg表達強度降低(t=12 349.0，P=0.00)；HBcAg與血清HBV DNA載量出現正相關關系(r=0.251，P=0.007)；與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關性消失(P>0.05)。結論 血清HBeAg轉陰后HBV其他抗原成分仍能與肝組織維持足夠活躍的免疫狀態。血清HBeAg轉陰后，肝組織內HBcAg表達強度降低，與血清HBV DNA載量出現正相關關系，與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關性關系弱化。

免疫組織化學；肝炎e抗原，乙型；肝炎表面抗原，乙型；肝炎核心抗原，乙型

[Abstract] Objective The relationship was analyzed between clinic and the expression intensity of HBsAg and HBcAg within the hepatic tissue from the serum HBeAg negative group and the positive group.Methods A total of 317 liver biopsy specimens were divided into the HBeAg negative group and the positive group,and the relationship was analyzed between the expression intensity of HBsAg and HBcAg within the hepatic tissue and their age,gender,ALT level,serum HBV-DNA load,hepatic inflammatory activity grading and fibrosis staging in the two groups.Results Age,ALT level,hepatic inflammatory activity grading and fibrosis of the serum HBeAg negative patients were greater than those of the serum HBeAg positive patients,while their serum HBV-DNA load and the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue were lower than those of the serum HBeAg positive patients (P<0.05).The expression intensity of HBsAg within the hepatic tissue between the serum HBeAg patients and the serum HBeAg positive patients was not significantly different,and it was not correlated with age,ALT level,hepatic inflammatory grading and fibrosis staging (P>0.05).After the serum HBeAg turned negative,the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue was decreased (P=0.00,t=12 349.0),and it became positively correlated with the serum HBV-DNA load(P=0.007,r=0.251) and its negative correlation with the hepatic inflammatory activity and fibrosis was weakened.Conclusion After the serum HBeAg turned negative,other antigenic components of HBV may still maintain the adequately active immune status within the hepatic tissue of organisms.After the serum HBeAg turned negative,the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue was decreased and became positively correlated with the serum HBV-DNA,while its negative correlation with the hepatic inflammatory activity grade and fibrosis stagings was weakened.

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是病毒、肝細胞和機體免疫系統之間相互作用的動態過程。目前多數學者認為肝細胞受HBV入侵后，HBV本身并不直接引起肝細胞損害[1]。HBV只是利用肝細胞攝取的養料賴以生存并在肝細胞內復制，HBV復制的HBsAg、HBeAg和HBcAg釋放在肝細胞膜上，激發人體的免疫系統來辨認并發生抗原抗體反應造成肝細胞的損傷和破壞，從而產生一系列臨床癥狀。對在肝細胞表面的HBV抗原所引起的宿主細胞免疫應答是肝細胞損傷的決定性因素。本研究著重于在血清HBeAg陰性和陽性兩組慢性乙型肝炎(chronic hepatits B,CHB)患者中肝組織內HBsAg和HBcAg的表達強度，及其與臨床的關系，進一步探討HBV抗原與CHB發病和進展存在的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2012年12月在本院做肝穿刺活檢的317例CHB患者,其中男177例，女140例，男女比例1.26∶1.00，年齡15～70歲，平均(30.0±18.0)歲。所有納入CHB患者診斷符合我國2010年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》更新版[2]，均無失代償性肝病的臨床表現和實驗室依據，排除合并其他病毒性肝炎、藥物性肝病、遺傳性肝病、血吸蟲性肝病及自身免疫性疾病、內分泌與代謝疾病、血液系統疾病，均未接受干擾素α、核苷(酸)類、甾體激素類、甘草酸類藥物治療。每例患者臨床及生化、影像學資料均采集自肝穿刺前1周之內。

1.2 肝組織病理檢測 首先彩超定位確定穿刺位置和深度,局部麻醉后用美國巴德活檢針MN1816獲取肝組織。標本長度均在1 cm以上，置于10%甲醛溶液內固定,石蠟包埋切片,行蘇木精-伊紅(hematine-eosin,HE)染色、網狀纖維染色及免疫組織化學LDP法染色。肝穿標本鏡下包含4個及4個以上可供評價匯管區，由本院病理科醫師讀片,在光鏡下觀察判定炎癥活動度分級、纖維化分期和肝組織內HBsAg、HBcAg的表達強度。肝組織炎癥活動度分級(G0～G4)和纖維化分期(S0～S4)的病理診斷標準參照2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》[3]。檢測肝組織內HBsAg、HBcAg表達采用免疫組織化學LDP法染色，試劑購自福州邁新生物技術有限公司。肝組織內HBsAg、HBcAg表達強度的評價參考半定量計分法:在排除非特異性染色前提下，黃色、棕色和棕褐色顆粒為陽性。染色強度參照Chu等[4]提出的標準:無肝細胞著色為(-)，著色肝細胞小于10%為(1+)，10%～50%為(2+)，>50%為(3+)。

1.3 實驗室檢測 (1)血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)采用日本OlympusAU2700型全自動生化分析儀檢測,其正常值上限為40 IU/L。(2)乙型肝炎標志物采用ELISA檢測(Hamilton全自動酶聯免疫分析儀2420,試劑購自北京萬泰生物藥業有限公司)。(3)血清HBV DNA采用實時熒光定量PCR檢測法(ABI 7500實時PCR定量檢測儀,試劑購自中山大學達安基因股份有限公司)。

1.4 統計學處理 采用SPSS19.0軟件對數據進行統計學分析。計量資料年齡、ALT、HBV DNA為非正態分布，采用均數±四分位數間距(M±QR)表示，比較采用秩和檢驗。計數資料用率或構成比表示，比較采用χ2檢驗；等級資料采用例數表示，比較采用秩和檢驗；數據相關性采用Spearman相關分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 年齡、性別、ALT、血清HBV DNA載量、肝臟炎癥活動度和纖維化在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異 血清HBeAg陰性組的年齡、ALT、炎癥活動度和纖維化顯著高于陽性組，但血清HBV DNA顯著低于陽性組，差異均有統計學意義(P<0.05)。血清HBeAg陰性組的年齡顯著大于陽性組(P=0.00)，ALT顯著大于陽性組(P=0.02)，炎癥活動度和纖維化顯著高于陽性組(P=0.00)，但血清HBV DNA載量顯著低于陽性組(P=0.00)。見表1。

2.2 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異 血清HBeAg陰性組的肝組織內HBsAg表達強度與陽性組學差異無統計學意義(P=0.521)；血清HBeAg陰性組肝組織內HBcAg表達強度顯著低于陽性組，差異有統計學意義(P=0.00)。見表2。

2.3 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與年齡相關關系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內HBsAg表達強度與年齡無相關性(P=0.358和P=0.623)。血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內HBcAg表達強度與年齡均存在負向相關性(r=-0.277，P=0.003和r=-0.157，P=0.025)。見表3。

2.4 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與性別的相關關系 血清HBeAg陰性和陽性組兩組中，肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度均在男女患者間差異無統計學意義(均P>0.05)。見表3。

2.5 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與ALT相關關系分析 血清HBeAg陰性和陽性組,肝組織內HBsAg表達強度與ALT無相關關系(P=0.231和P=0.191)。血清HBeAg陰性組,肝組織內HBcAg表達強度與ALT無相關性(P=0.622)；血清HBeAg陽性組,與ALT存在輕度負向相關性(P=0.047,r=-0.142)。見表4。

2.6 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與血清HBV DNA載量相關關系分析 血清HBeAg陰性組，肝組織內HBsAg表達強度與血清HBV DNA載量無相關關系(P=0.347)；肝組織內HBcAg表達強度與血清HBV DNA載量呈正相關(r=0.251，P=0.007)。血清HBeAg陽性組，肝組織內HBsAg表達強度與血清HBV DNA載量呈輕度正相關(r=0.201，P=0.006)；肝組織內HBcAg表達強度與血清HBV DNA無相關性,(P=0.088)。見表4。

2.7 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度分級的相關關系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內HBsAg表達強度與炎癥活動度無相關關系(P=0.897和P=0.065)。血清HBeAg陰性組，肝組織內HBcAg表達強度與炎癥活動度無相關關系(P=0.913)；血清HBeAg陽性組，與炎癥活動度存在負向相關性(r=-0.168，P=0.017)。見表5。

2.8 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與肝臟纖維化分期的相關關系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內HBsAg表達強度與纖維化無相關關系(P=0.858和P=0.428)。血清HBeAg陰性組，肝組織內HBcAg表達強度與纖維化無相關關系(P=0.780)；血清HBeAg陽性組，與纖維化存在負向相關性(r=-0.202，P=0.040)，見表5。

表1 317例患者年齡、性別、ALT、血清HBV DNA載量、G和S在HBeAg陰性與陽性組之間的差異

表2 317例患者肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異

表3 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與年齡性別關系

表4 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與ALT、血清HBV DNA關系

表5 肝組織內HBsAg和HBcAg表達強度與炎癥活動度、纖維化的相關關系

3 討 論

CHB的發病機制是免疫損傷而不是HBV對肝細胞的直接細胞毒作用[5]。肝細胞表面的HBV抗原引起的宿主細胞免疫應答是肝細胞損傷的決定性因素，其程度決定患者的臨床特點和病情嚴重程度。HBsAg、HBeAg、HBcAg是HBV復制過程中產生的重要的HBV蛋白抗原。臨床普遍認為HBsAg是HBV感染的重要標志，血清HBeAg和肝組織中HBcAg是HBV感染及復制的特異性標志[6]。

血清HBeAg是HBV感染及復制的特異性標志之一。血清HBeAg陽性患者的HBV DNA復制活躍，有強傳染性[9]。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化顯著大于陽性患者；但血清HBV DNA、肝組織內HBcAg表達強度顯著低于陽性患者。與Chu等[7]報道HBeAg陽性CHB患者HBV DNA載量顯著高于HBeAg陰性患者的結果一致。符合血清HBeAg陰性CHB患者病程更長，在長期的逐步免疫清除靶抗原之一的HBeAg的過程中，不同程度的引起肝組織細胞破壞，導致肝組織的纖維化較高[8]。提示血清HBeAg轉陰的CHB患者，雖然HBV病毒復制降低,肝組織內HBcAg表達強度降低，但肝臟炎癥活動度相關的指標如ALT和肝臟炎癥活動度并未出現緩解的跡象，因此HBV其他抗原成分(如HBsAg和HBcAg等)可能仍然能夠與機體在肝組織產生和維持足夠活躍的免疫狀態。

HBsAg是HBV感染的重要標志。肝組織內HBsAg表達強度與血清HBV DNA的關系，近年文獻報道不一，如張文杰等[10]報道呈正相關；樂曉華等[11]則認為無相關性。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者，肝組織內HBsAg表達強度與血清HBV DNA無相關性；血清HBeAg陽性患者，兩者呈正相關。而肝組織內HBsAg表達強度與肝臟炎癥活動度和纖維化的關系，近年研究結果較為一致，張文杰等[10]、樂曉華等[11]和陸偉等[12]均報道無相關性。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的組織內HBsAg表達強度與陽性患者無統計學差異。在血清HBeAg陰性和陽性組兩組患者中，肝組織內HBsAg表達強度與年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化均無相關性。提示可能由于HBsAg是HBV的外膜蛋白不含核酸，不是免疫攻擊的靶抗原[13]，所以導致上述結果。而肝組織內HBsAg表達強度與血清HBV DNA關系尚需進一步研究。

肝組織內HBcAg是HBV核心區基因產物，是機體特異性細胞毒性淋巴細胞攻擊的主要靶抗原，也是病毒復制的最確切指標[14]。肝內HBV的感染狀態如肝細胞內HBcAg的表達及分布等，某種程度上也是乙型肝炎患者肝組織炎性反應的體現[15]。肝細胞內HBcAg的表達強度與血清HBV DNA關系，近年有文獻報道，如厲新妍等[16]和董曉鋒等[17]報道呈顯著的正相關。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者，肝組織內HBcAg表達強度與血清HBV DNA呈正相關；在血清HBeAg陽性患者，兩者無相關性。而HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度分級和纖維化分期的關系，近年文獻報道不一。張文杰等[10]報道呈正相關；陸偉等[12]報道HBeAg陰性患者HBcAg表達水平與肝組織病理學分級呈顯著正相關，與病理學分期無顯著相關性。HBeAg陽性患者，HBcAg表達水平與肝組織病理學分級和分期呈顯著負相關。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的組織內HBcAg表達強度顯著低于陽性患者。血清HBeAg陰性患者，肝組織內HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度和纖維化無相關性；在血清HBeAg陽性患者，兩者呈負向相關。提示血清HBeAg轉陰后，肝組織內HBcAg表達強度降低，與血清HBV DNA載量出現正相關關系，與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關性關系弱化。

肝細胞內HBV抗原的復制和表達激發炎癥活動，引起一系列的組織病變。血清HBeAg轉陰后，肝組織內HBsAg表達強度和HBcAg表達強度的變化，與HBV DNA、肝臟炎癥活動度和纖維化等相關關系發生變化，應繼續深入研究。

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Association of serum HBeAg,expression intensity of HBsAg and HBcAg in hepatic tissue with clinical characteristics in 317 chronic hepatitis B patients

WuJiazhen,HuangRengang,YangXingxiang△,LiuXiang,JiangNan,LinJianmei

(DepartmentofInfection,thePeople′sHospitalofSichuan,Chengdu,Sichuan610072,China)

immunhistochemistry;hepatitis B e antigens;hepatitis B surface antigens;hepatitis B core antigens

吳家箴(1980-)，主治醫師，本科，主要從事慢性肝病診斷與治療學研究。△

，E-mail:xxyang508@tom.com。

R512.62

A

1671-8348(2017)04-0468-04

2016-09-10

2016-10-18)