RP-HPLC測定自微乳中雷公藤甲素的含量

呂 飛 馮 珺 倪堅軍 俞春燕 蔡鑫君

·藥學研究·

RP-HPLC測定自微乳中雷公藤甲素的含量

呂 飛 馮 珺 倪堅軍 俞春燕 蔡鑫君

RP-HPLC；雷公藤甲素；自微乳

雷公藤甲素（triptolide，TP）是從雷公藤中提取分離到的環氧化二萜內酯化合物，是各種雷公藤制劑的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤和抗生育等多種藥理作用[1]。但雷公藤甲素存在水溶性差，對胃腸道刺激性大，生物利用度不高等問題。自微乳釋藥系統（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS）是由藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的熱力學穩定的均一、透明或半透明、各向同性的溶液，口服后在生理體溫、胃腸道蠕動作用下，遇胃腸液分散成粒徑＜100nm的性能良好的O/W（水/油）微乳[2]，可以有效改善藥物溶解度，提高藥物生物利用度。本研究利用偽三相圖確定雷公藤甲素自微乳的處方工藝，并采用HPLC法建立雷公藤甲素自微乳的含量測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（G1322A脫氣機，DAD檢測器，手動進樣器，Chemstation色譜工作站)，BT25S分析天平（賽馬利斯科學儀器（北京）有限公司），KQ-50E超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），雷公藤甲素對照品（純度99.9%，111567-201404，中國食品藥品檢定研究院），雷公藤甲素原藥（純度≥98%，20150109，上海寶曼生物）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相甲醇：0.01mol/L磷酸二氫鈉水溶液（pH調節到4.1）40∶60，流速1.0mL，柱溫28℃，檢測波長218nm，進樣量20μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定雷公藤甲素對照品約10mg，置于100mL容量瓶，加入流動相溶解、稀釋至刻度，搖勻定容。

2.3 供試品及陰性樣品溶液的制備 精密量取雷公藤甲素自微乳約5.0mL于100mL容量瓶，加入流動相溶解、超聲（200w，50kHz）30min使其溶解，稀釋至刻度，搖勻定容。濾過即得樣品。取不含主藥空白自微乳同法制備陰性樣品溶液。

2.4 專屬性實驗 將雷公藤甲素供試品、對照品及陰性樣品溶液均按“2.1”色譜條件項下的方法進樣，比對，結果見圖1。顯示雷公藤甲素供試品主峰的保留時間（4.5min）與對照品溶液主峰的保留時間一致，輔料對其主峰并未有影響。

圖1 雷公藤甲素供試品、對照品及陰性樣品溶液HPLC色譜圖

2.5 線性關系試驗 精密量取雷公藤甲素標準品儲備液1、2、4、6、8、10mL，分別置25mL容量瓶中，定容。分別進樣20μL，按“2.1”色譜條件項下的方法，測定雷公藤甲素峰面積的響應值（A）。以峰面積響應值（A）對雷公藤甲素濃度（ρ）進行回歸，得線性方程A=43.266ρ+ 0.3425（r=0.9999），其進樣量在4.048～40.48mg/mL范圍內線性關系良好。

2.6 精密度和重復性試驗 取濃度分別為5.42、13.55、27.1μg/mL的高、中、低三個對照品溶液20 μL進樣注入液相色譜儀，每個濃度重復進樣6次，計算峰面積響應值（A）的RSD分別為1.07%、0.79%、0.51%（n=6）；取雷公藤甲素自微乳，按“2.3”項供試品制備方法平行制備6份，按“2.1”色譜條件項下的方法測定其含量，各進樣1次，得到平均含量為2.25mg/mL，RSD為2.54%（n=6）。

2.7 加樣回收率測定 精密量取已知含量的供試品溶液3份，分別加入高、中、低3種濃度的對照品（即雷公藤甲素處方量的80%、100%、120%），用流動相溶解超聲，定容至20mL，按“2.1”色譜條件項下的方法測定其含量，得平均加樣回收率為（97.2±1.4）%（RSD=1.44%，n=9），見表1。

杭州市科技發展計劃項目（No.20130733Q14）；浙江省中醫藥科技計劃項目（No.2015ZA148）

杭州市紅十字會醫院藥劑科（杭州 310003）

蔡鑫君，Tel：0571-56109869；E-mail：zjtcmcxj@163.com