芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)慢性束縛應(yīng)激大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子以及一氧化氮影響的研究

朱映黎++王林元　王成龍　趙丹萍　王莎　費(fèi)文婷　張建軍

[摘要] 研究芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷對(duì)慢性束縛應(yīng)激肝郁大鼠的作用及機(jī)制。以氟西汀及逍遙丸為對(duì)照，檢測(cè)體重，糖水消耗量，并進(jìn)行曠場(chǎng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)；格瑞斯比色法檢測(cè)海馬一氧化氮（NO）的含量；酶免法（ELISA）檢測(cè)海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）的含量；RTqPCR法檢測(cè)海馬神經(jīng)元一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表達(dá)；Western blot法檢測(cè)海馬中nNOS以及BDNF的蛋白表達(dá)。與模型組相比，30 mg·kg-1芍藥苷、30 mg·kg-1芍藥內(nèi)酯苷明顯升高穿行次數(shù)（P<0.05；P<0.01）；芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷明顯降低NO水平（P<0.05，P<0.01；P<0.05，P<0.05）；30 mg·kg-1芍藥苷與30 mg·kg-1芍藥內(nèi)酯苷明顯升高BDNF水平（P<0.05）。與模型組相比，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷明顯降低nNOS mRNA表達(dá)（P<0.01；P<0.05）；30 mg·kg-1芍藥苷、30 mg·kg-1芍藥內(nèi)酯苷明顯升高BDNF 蛋白表達(dá)（P<0.05）。芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷為白芍柔肝解郁功效的有效成分，其作用機(jī)制與調(diào)節(jié)海馬NO含量以及BDNF的表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 芍藥內(nèi)酯苷； 芍藥苷； 肝郁證； 一氧化氮； 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

Investigation of effects of albiflorin and paeoniflorin on hippocampal BDNF and NO in chronic restraint stress rats

ZHU Yingli， WANG Linyuan， WANG Chenglong， ZHAO Danping， WANG Sha， FEI Wenting， ZHANG Jianjun*

（Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

[Abstract] This paper aimed to investigate the antidepressantlike effects and the mechanism of the albiflorin， paeoniflorin on rats with chronic restraint stress model. Fluoxetine and Xiaoyao group served as the positive control， body weight， sucrose preference test and the open field behavioral experiment were measured， the levels of nitric oxide （NO） in hippocampus were detected by Greg colorimetric method. Furthermore， the levels of brain derived neurotrophic factor （BDNF） in hippocampus were detected by ELISA. Finally， the expressions of nNOS mRNA in hippocampus detected by RTqPCR， the protein levels of nNOS and BDNF in hippocampus were detected by Western blot. Compared with the model group，the pass counts of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05，P<0.01）. Furthermore， compared with the model group，the levels of NO in paeoniflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） and albiflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） were all significantly decreased（P<0.05，P<0.01； P<0.05， P<0.05）. BDNF levels of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05）. Finally， compared with the model group， the expressions of nNOS mRNA of paeoniflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） （P<0.01， P<0.01） and albiflorin groups（30 mg·kg-1） were significantly decreased（P<0.05）. Compared with the model group， the protein exprsssions of BDNF of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05）. Albiflorin and paeoniflorin have the effects of smooth the liver and dispel stagnation， the mechanism has the relevant with adjusting and controlling the expression of NO and BDNF in hippocampus.

[Key words] albiflorin； paeoniflorin； liver stagnation syndrome； nitric oxide； brain derived neurotrophic factor

doi：10.4268/cjcmm20162225

白芍[1]為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，味苦、酸，微寒，歸肝、脾經(jīng)，養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛。赤芍[1]為毛茛科植物芍藥P. lactiflora Pall.或川赤芍P. veitchii Lynch的干燥根，味苦、微寒，歸肝經(jīng)，清熱涼血，散瘀止痛。白芍與赤芍來源相似，都含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等單萜苷類成分[2]，研究表明芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷具有補(bǔ)血、抗應(yīng)激作用[39]。本實(shí)驗(yàn)通過芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)束縛應(yīng)激致肝郁大鼠藥理作用以及對(duì)海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）以及NO的研究，探討白芍特征成分芍藥內(nèi)酯苷與赤芍與白芍的共同有效成分芍藥苷的作用機(jī)制及特點(diǎn)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 雄性Sprague Dawley大鼠，體重（180±20） g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)SCXK（京）20160002。

1.2 藥品 實(shí)驗(yàn)用芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷均為自制，純度均高于96%。氟西汀購(gòu)自PATHEON FRANCE，產(chǎn)品批號(hào)5169A（分包裝廠禮來蘇州制藥有限公司，分包裝批號(hào)5169AA）。逍遙丸（濃縮丸）購(gòu)自九芝堂股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)201510006，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室HPLC測(cè)定，本品芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.19 mg·g-1，芍藥內(nèi)酯苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.68 mg·g-1。

1.3 儀器與試劑 大鼠不銹鋼束縛器：筒長(zhǎng)20 cm、內(nèi)徑6 cm，可通過移動(dòng)底板調(diào)節(jié)其長(zhǎng)度；大鼠行為學(xué)觀察敞箱（自制）；熒光定量PCR儀（ABI，批號(hào)7300）；Trizol 試劑（Invitrogen Life Technologies，批號(hào)15596026）；紫外分光光度計(jì)（上海現(xiàn)科儀器有限公司，批號(hào)752P）；RIPA裂解液（武漢谷歌生物科技公司，批號(hào)G2002）；HRP標(biāo)記山羊抗兔（武漢谷歌生物科技公司，批號(hào)GB23303）；HRP標(biāo)記驢抗山羊（武漢谷歌生物科技公司，批號(hào)GB23404）；HRP標(biāo)記山羊抗小鼠（武漢谷歌生物科技公司，批號(hào)GB23301）；HRP標(biāo)記山羊抗大鼠（武漢谷歌生物科技公司，批號(hào)GB23302）。

2 方法

2.1 分組與給藥 將80只SD大鼠隨機(jī)分成8組，即空白組、模型組、氟西汀組（2.0 mg·kg-1，相當(dāng)于人用量15 mg·d-1）、逍遙丸組（4.032 g·kg-1，相當(dāng)于逍遙丸中白芍人用量4.32 g·d-1，相當(dāng)于芍藥苷18.1 mg·d-1、芍藥內(nèi)酯苷11.6 mg·d-1）、芍藥內(nèi)酯苷組（30，15 mg·kg-1）、芍藥苷組（30，15 mg·kg-1），每組10只。持續(xù)給藥21 d，按每100 g體重灌胃1 mL給藥，每日1次。空白組、模型組每天灌胃等量蒸餾水。

2.2 造模方法 動(dòng)物適應(yīng)數(shù)天后[10]，除空白組每籠5只常規(guī)飼養(yǎng)外，剩余大鼠進(jìn)行常規(guī)單籠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d。除空白組外，各組大鼠進(jìn)行孤養(yǎng)結(jié)合束縛應(yīng)激模型復(fù)制：將大鼠放入自制筒長(zhǎng)為20 cm、內(nèi)徑為6 cm，并可以調(diào)節(jié)長(zhǎng)度的不銹鋼束縛器中；以不影響大鼠正常晝夜節(jié)律為前提，可通過移動(dòng)束縛筒內(nèi)底板的位置，使大鼠無損傷完全固定，限制大鼠進(jìn)退和掉頭，以不產(chǎn)生壓迫感、不影響呼吸和排泄為度。每天定時(shí)束縛3 h（8：00—11：00 am），連續(xù)3周。

2.3 樣品處理 實(shí)驗(yàn)第22天，SD大鼠快速斷頭處死后迅速取出腦組織，在超凈臺(tái)冰面上分離出海馬組織，置于滅菌凍存管，液氮中保存待用。

2.4 體征觀察與體重檢測(cè) 觀察大鼠的口唇、眼睛、皮毛、尾巴的顏色、精神狀態(tài)等變化；并于第1，7，14，21天稱重，記錄并分析各組大鼠體重變化。

2.5 糖水消耗試驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)前48 h，對(duì)所有的大鼠進(jìn)行1%蔗糖水?dāng)z取訓(xùn)練；隨后斷水?dāng)嗍?4 h，進(jìn)行第1次糖水消耗量基線測(cè)定；于實(shí)驗(yàn)的第7，14，21天分別于8：00—11：00 am測(cè)定大鼠1 h內(nèi)的蔗糖水?dāng)z取量，最后計(jì)算糖水消耗量=糖水消耗量（mL）/（去離子水+糖水消耗量）（mL）。

2.6 敞箱試驗(yàn) 敞箱為本實(shí)驗(yàn)室自制。大鼠行為學(xué)觀察敞箱（40 cm×80 cm×80 cm）無蓋，周壁和箱底均為黑色，底面劃分面積相等的25塊方格，用白線劃分。本實(shí)驗(yàn)[11]于在末次處理的1 h后，在安靜、四周由遮光簾隔離的獨(dú)立操作室里進(jìn)行。操作者帶黑色手套，握住大鼠尾根部1/3處，小心放入敞箱正中格，釋放后觀察5 min的活動(dòng)情況。并注意每只結(jié)束后，用毛巾蘸清水及低濃度乙醇徹底清理敞箱，待其氣味揮發(fā)擴(kuò)散后，再進(jìn)行下一只的測(cè)試。測(cè)定指標(biāo)包括：①正中央格停留時(shí)間；②方格間穿行次數(shù)（三爪以上跨入鄰格的次數(shù)）；③豎起或修飾次數(shù)（前兩肢離地1 cm以上的次數(shù)）；④豎起或修飾時(shí)間（前兩肢離地1 cm以上的時(shí)間，包括前肢向上抬舉、抓癢、洗臉、舔足等）。

2.7 格里斯法（Griess法）測(cè)定海馬組織中NO含量 用一氧化氮測(cè)試盒進(jìn)行NO含量測(cè)定，其原理是用硝酸還原酶法先將NO3-還原成NO2-，再用Griess法反應(yīng)測(cè)定NO2-總量。即在弱酸性條件下，NO2-與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，與N1萘基乙二胺偶合形成紅色燃料，用比色法可測(cè)得NO2-總量，從而得出各組大鼠海馬組織中NO含量。

2.8 酶免法測(cè)定海馬組織中BDNF含量 采用ELISA法檢測(cè)BDNF，每一份樣本進(jìn)行雙點(diǎn)測(cè)定， 嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。STAT FAX 2100全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)BDNF含量。

2.9 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RTqPCR）檢測(cè)海馬中nNOS mRNA表達(dá) 每組取4只大鼠海馬組織按Trizol試劑說明抽提總RNA。取2 μg總RNA為模板，加入1 μL Oligo（dT）18和無核糖核酸酶的去離子水后于PCR儀上70 ℃保溫5 min，迅速置冰上冷卻，依次加入4 μL 5×buffer，10 mmol·L-1 dNTPs 2 μL，1 μL RNA inhibitor和1 μL反轉(zhuǎn)錄酶，于PCR儀上42 ℃保溫60 min，結(jié)束后80 ℃保溫5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶。取0.2 mL PCR管，配制如下反應(yīng)體系，每個(gè)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物配制3管：2× qPCR Mix 12.5 μL，7.5 μmol·L-1基因引物2.0 μL，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2.5 μL，蒸餾水8.0 μL。取0.2 mL PCR管，配制如下反應(yīng)體系，每個(gè)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物配制3管：2× qPCR Mix 12.5 μL，7.5 μmol·L-1內(nèi)參引物2.0 μL，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2.5 μL，蒸餾水8.0 μL。PCR擴(kuò)增預(yù)變性，95 ℃10 min；循環(huán)（40次）95 ℃，15 s到60 ℃，60 s；溶解曲線75 ℃到95 ℃，每20 s升溫1 ℃。PCR反應(yīng)及數(shù)據(jù)采集在LightCycler 2.0系統(tǒng)上進(jìn)行，記錄其循環(huán)閾值（CT），基因表達(dá)結(jié)果采用相對(duì)定量公式2ΔΔCt計(jì)算，其中ΔCt值=靶基因的Ct值-βactin的Ct值。測(cè)定海馬組織中nNOS mRNA表達(dá)水平。

引物設(shè)計(jì)使用Primer 3.0 軟件計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，見表1。

2.10 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)海馬中nNOS以及BDNF的蛋白表達(dá) 每組取5只大鼠海馬組織。冰浴30 min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。裂解30 min后，移至離心管，在4 ℃下12 000 r·min-1離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。再按照常規(guī)Western blot方法操作，以βactin蛋白表達(dá)水平作為內(nèi)參，以各樣本與相應(yīng)內(nèi)參灰度值比值為蛋白相對(duì)含量。

2.11 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用±s表示，采用SPSS Statistics 20.0的IndependentSample T Test或Oneway ANOVA過程（兩兩比較采用SNK）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁大鼠體重的影響 與空白組比較，模型組體重從第7天開始明顯降低，差異非常顯著（P<0.001），從第21天開始，與模型組相比，逍遙丸組體重明顯升高，差異顯著（P<0.01）；氟西汀組體重明顯升高（P<0.05）；芍藥苷30 mg·kg-1組、芍藥苷15 mg·kg-1組的體重明顯升高（P<0.01，P<0.05）；芍藥內(nèi)酯苷30 mg·kg-1組、芍藥內(nèi)酯苷15 mg·kg-1組的體重明顯升高（P<0.05，P<0.01），見表2。

3.2 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠糖水消耗的影響 與空白組比較，模型組糖水消耗量從第21天開始明顯降低（P<0.001）；與模型組相比，各藥物組糖水消耗量有升高趨勢(shì)，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表3。

3.3 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠敞箱自發(fā)活動(dòng)的影響 與空白組比較，模型組修飾次數(shù)明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，各給藥組具有升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與空白組比較，模型組穿行次數(shù)明顯降低，差異顯著（P<0.01）；與模型組相比，逍遙丸組穿行次數(shù)明顯升高，差異顯著（P<0.01）；氟西汀組穿行次數(shù)明顯升高，差異顯著（P<0.01）；芍藥苷30 mg·kg-1組的穿行次數(shù)明顯升高（P<0.05）；芍藥內(nèi)酯苷30 mg·kg-1組的穿行次數(shù)明顯升高，差異顯著（P<0.01）；與空白組比較，模型組滯留時(shí)間明顯升高（P<0.05）；與模型組相比，逍遙丸組滯留時(shí)間明顯降低（P<0.05）；氟西汀組

滯留時(shí)間明顯降低，差異顯著（P<0.01）；芍藥苷30，15 mg·kg-1組的滯留時(shí)間明顯降低（P<0.01，P<0.05）；芍藥內(nèi)酯苷30，15 mg·kg-1組的滯留時(shí)間明顯降低，差異顯著（P<0.01，P<0.01），見表4。

3.4 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠海馬組織中NO含量的影響 與空白組比較，模型組NO含量明顯升高，差異顯著（P<0.01）；與模型組相比，逍遙丸組NO水平明顯降低（P<0.05）；氟西汀組NO水平明顯降低，差異顯著（P<0.01）；芍藥苷30，15 mg·kg-1組的NO水平明顯降低（P<0.05，P<0.01）；芍藥內(nèi)酯苷30，15 mg·kg-1組的NO水平明顯降低（P<0.05，P<0.05），見表5。

3.5 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠海馬組織中BDNF含量的影響 與空白組比較，模型組BDNF含量明顯降低，差異顯著（P<0.01）；與模型組相比，逍遙丸組BDNF水平明顯升高，差異顯著（P<0.01）；氟西汀組BDNF水平明顯升高，差異顯著（P<0.01）；芍藥苷30 mg·kg-1組與芍藥內(nèi)酯苷30 mg·kg-1組的BDNF水平明顯升高（均P<0.05），見表6。

3.6 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠海馬組織中nNOS mRNA表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組nNOS mRNA表達(dá)明顯升高，差異非常顯著（P<0.001）；與模型組相比，逍遙丸組與氟西汀組nNOS mRNA表達(dá)明顯降低（P<0.05，P<0.05）；芍藥苷30，15 mg·kg-1組的nNOS mRNA表達(dá)明顯降低，

3.7 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠海馬組織中nNOS 蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組nNOS 蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與模型組相比，各藥物組nNOS 蛋白表達(dá)有降低趨勢(shì)，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表8。

3.8 芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷對(duì)肝郁證大鼠海馬組織中BDNF 蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組BDNF 蛋白表達(dá)明顯降低，差異顯著（P<0.01）；與模型組相比，逍遙丸組、氟西汀組、芍藥苷30 mg·kg-1組、芍藥內(nèi)酯苷30 mg·kg-1組的BDNF 蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.05），見表9。

4 討論

肝郁，中醫(yī)認(rèn)為是一種情志相關(guān)疾病，常見于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的精神神經(jīng)類疾病，與慢性應(yīng)激引起的抑郁癥相似[12]。采用慢性輕度不可預(yù)知應(yīng)激（CUMS）大鼠模型和嗅球損毀抑郁大鼠模型對(duì)白芍提取物（芍藥苷48.89%和芍藥內(nèi)酯苷18.99%）及白芍有效成分芍藥苷進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)白芍提取物與芍藥苷均具有良好的抗抑郁作用，且機(jī)制與調(diào)節(jié)大腦皮層單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和NO/cGMP通路有關(guān)[1316]。

本實(shí)驗(yàn)采用目前被廣泛應(yīng)用的慢性束縛應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)方法復(fù)制大鼠肝郁模型[10]。從第7天開始，大鼠體重開始急劇下降，出現(xiàn)毛發(fā)凌亂、色澤晦暗、喜蜷伏角落，灌胃時(shí)反抗劇烈、撕叫掙扎等現(xiàn)象，與肝郁證臨床表現(xiàn)特點(diǎn)相一致。從14 d開始，大鼠興奮性持續(xù)降低、探究興趣減弱，體重增長(zhǎng)緩慢，但各給藥組與模型組之間并未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第21天模型組、給藥組大鼠體重出現(xiàn)增長(zhǎng)差異，糖水消耗量，行為學(xué)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中穿行次數(shù)、修飾時(shí)間、滯留時(shí)間明顯變化。

本實(shí)驗(yàn)以逍遙丸和氟西汀為陽性對(duì)照藥。氟西汀作為一種選擇性5羥色胺再攝取抑制劑類（SSRI）抗抑郁藥，常用于臨床治療抑郁癥[17]。逍遙丸作為傳統(tǒng)中醫(yī)名方，出自宋代《太平惠民和劑局方》，由柴胡、白芍、當(dāng)歸、白術(shù)（炒）等組成，具有疏肝解郁，養(yǎng)血健脾之效。經(jīng)HPLC檢測(cè)本次使用逍遙丸中芍藥內(nèi)酯苷及芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為10.80，16.89 mg·kg-1。表明在本實(shí)驗(yàn)給藥劑量下，逍遙丸中芍藥內(nèi)酯苷及芍藥苷含量與本實(shí)驗(yàn)二者的給藥劑量相近。

海馬作為與情感疾病相關(guān)的大腦邊緣系統(tǒng)構(gòu)成組織之一，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒、內(nèi)分泌、內(nèi)臟活動(dòng)及介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[18]。一氧化氮參與抑郁癥的發(fā)病過程，抑郁癥患者血清及腦內(nèi)一氧化氮升高，一氧化氮合酶及NMDA 受體拮抗劑對(duì)抑郁癥治療有效[19]。研究表明，NO作為一種神經(jīng)信號(hào)的傳遞物質(zhì)， 可以促進(jìn)腦部的血流量，并可能與腦細(xì)胞的發(fā)育、腦細(xì)胞的學(xué)習(xí)和記憶過程、后腦垂體激素如血管加壓素和催產(chǎn)素的分泌、保護(hù)腦細(xì)胞避免毒物的攻擊及腦缺血時(shí)調(diào)整腦血供應(yīng)等有關(guān)[20]。在本模型條件下，NO升高的原因可能與慢性應(yīng)激激活下丘腦垂體腎上腺（HPA）軸，糖皮質(zhì)激素持續(xù)高分泌以及腦內(nèi)興奮性氨基酸含量增多有關(guān)[21]，芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷均可以降低慢性束縛應(yīng)激大鼠海馬NO含量水平。

神經(jīng)元一氧化氮合酶（nNOS）是內(nèi)源性的通過催化底物左旋精氨酸分解產(chǎn)生一氧化氮的一氧化氮合酶之一[18]。nNOS 已經(jīng)被證實(shí)是海馬中神經(jīng)元再生的抑制分子，研究表明nNOS是介導(dǎo)氟西汀影響神經(jīng)元再生進(jìn)而影響抑郁行為的關(guān)鍵分子[17]。本實(shí)驗(yàn)芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)nNOS蛋白表達(dá)的影響卻并不明顯，這可能與NO對(duì)抑郁癥具有雙向作用有關(guān)，原因有待深入研究。

“神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)假說”認(rèn)為，人類的抑郁障礙與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)降低及功能下調(diào)有關(guān)，臨床上對(duì)抑郁癥的治療可通過提高腦內(nèi)神經(jīng)生長(zhǎng)因子水平抵抗應(yīng)激引起的腦組織損傷[22]，它可能參與了抑郁癥的發(fā)病和治療機(jī)制，并可能與抑郁癥的預(yù)后密切相關(guān)。而另一方面，NO又能控制長(zhǎng)期突觸改變中的早期基因如BDNF等表達(dá)，使樹突減少、突觸終端結(jié)構(gòu)改變、神經(jīng)可塑性降低， 從而導(dǎo)致以海馬為重要組成部分的情感調(diào)節(jié)中樞功能失常[1920]。本實(shí)驗(yàn)芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷增強(qiáng)海馬中BDNF 水平以及表達(dá)。

綜述以上結(jié)果，在本實(shí)驗(yàn)條件下，芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷能夠通過增加大鼠體重、提高大鼠自主活動(dòng)和探索行為、降低緊張度和對(duì)新環(huán)境恐懼等方面改善大鼠抑郁樣作用；其機(jī)制與調(diào)節(jié)海馬內(nèi)NO含量以及BDNF的表達(dá)有關(guān)。

[致謝] 北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心李偉老師對(duì)本實(shí)驗(yàn)提供了支持。

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[責(zé)任編輯 張燕]